重组犬α2干扰素的原核表达及其抗病毒活性评价

试验旨在构建犬α2干扰素(CaIFN-α2)大肠杆菌表达系统,并进行优化和筛选,评价其表达的重组犬α2干扰素的抗病毒活性。根据GenBank中CaIFN-α2的基因序列,按大肠杆菌密码子偏好性对CaIFN-α2全基因序列进行优化与合成,连接至pET-32a表达载体中,构建pET-32a-CaIFN-α2重组表达质粒。设计1对含NdeⅠ/BamHⅠ酶切位点的特异性引物,克隆CaIFN-α2成熟肽基因,连接至pET-21a表达载体中,构建pET-21a-CaIFN-α2重组表达质粒。将两种重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,经IPTG诱导表达。SDS-PAGE结果显示,表达产物均以包涵体形式存在。表达菌经超声破碎、变性、复性和分子筛层析后,得到纯化的CaIFN-α2蛋白,纯度约为90%。采用细胞病变抑制法在MDCK-VSV系统中测定其抗病毒活性,结果显示,纯化后pET-32a-CaIFN-α2蛋白的抗病毒活性为1.5×103IU/mL,而纯化后pET-21a-CaIFN-α2蛋白的抗病毒活性高达1.0×107IU/mL。本试验结果表明CaIFN-α2在pET-32a及pET-21a载体系统中均能成功表达,且具有抗病毒活性,但在pET-21a载体系统中表达产物的活性更高,试验结果为进一步开发和利用犬干扰素制剂奠定了基础。

重组犬α6干扰素的酵母表达及其抗病毒活性评价

试验旨在构建犬α6干扰素毕赤酵母表达系统,并对其进行优化和筛选,以期获得高活性的重组犬α6干扰素(CaIFN-α6)。根据CaIFN-α6基因序列,按毕赤酵母菌密码子偏好性对CaIFN-α6全基因序列进行优化与合成,用XhoⅠ和NotⅠ双酶切将其连接至载体pPICZαA中,构建pPICZαA-CaIFN-α6重组表达质粒,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞。提取质粒pPICZαA-CaIFN-α6并线性化,电转入酵母感受态细胞X33中制备重组菌。采用甲醇进行诱导表达,收集上清,超滤浓缩,最终获得纯化的重组CaIFN-α6。利用BCA法测得纯化后的CaIFN-α6蛋白浓度为1.5 mg/mL,Western blotting分析表明CaIFN-α6蛋白具有良好的反应原性,SDS-PAGE显示其纯度约在95%以上,MDCK/VSV法检测其效价为2.37×10^7 IU/mL,比活性为1.58×10^7 IU/mg。结果表明犬α6干扰素在毕赤酵母pPICZαA表达载体系统中成功表达,且具有较高的生物活性,为后期的犬病毒病的临床预防与治疗提供了良好的支撑。

心脏瓣膜置换术并发低心排综合征的ICU系统化干预措施

目的探讨ICU系统化干预在心脏瓣膜置换术并发低心排综合征中的应用价值。方法选取2019年6月至2021年12月收治心脏辨膜置换术并发低心排综合征患者70例,随机数字法,对照组30例接受常规干预,研究组40例接受ICU系统化干预,对2组患者干预结局进行对比分析。结果研究组护理有效率高于对照组(P<0.05);研究组护理后ICU住院时间、机械通气时间,短于对照组(P<0.05);研究组患者护理后心功能指标包括左心室射血分数(LVEF)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVFS)、E/A、EPSS水平均显著优于对照组(P<0.05)。研究组护理后并发症发生率低于对照组(P<0.05)。结论心脏瓣膜置换术并发低心排综合征,采取ICU系统化干预,可促进患者快速恢复,减少并发症,提升护理效果,临床具有较高价值。

氟[^(18)F]脱氧葡糖注射液细菌内毒素检查法的方法学验证

目的:考查氟[18F]脱氧葡糖注射液对细菌内毒素检查法试验的干扰实验情况。方法:参照《中国药典》2005年版二部附录ⅪE细菌内毒素检查法进行试验。结果:供试品氟[18F]脱氧葡糖注射液每1m l含细菌内毒素的量应小于15 EU,该浓度下对鲎试验不存在干扰作用,同时排除了干扰性,对氟[18F]脱氧葡糖注射液细菌内毒素检查法进行了验证。结论:该法对细菌内毒素检查可行。

快速、精确的热电联产经济调度研究

为更好地解决热电联产经济调度问题,提出了一种基于剪枝的改进遗传算法。该算法基于不同时期的种群适应度,调整自适应选择和交叉策略,在每次迭代之后对不合适的基因进行剪枝处理,提高了算法的收敛精度,加快了收敛速度。同时,也在确保种群多样性的前提下,保证了算法的收敛性。

阴性突变Rac-N17基因转染对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的探讨基因转染对内皮细胞凋亡的影响及其相关机制。方法采用凝血酶诱导法诱导人脐静脉内皮细胞株(HUVECs)凋亡,检测细胞凋亡情况及caspase-3活性。结果结果显示,凝血酶诱导48 h后,HUVECs细胞浆内颗粒和空泡增多,细胞凋亡率明显增高,caspase-3活性明显增加,而加入Rac-N17干预后,细胞凋亡率明显降低c、aspase-3活性明显下降。结论Rac-N17基因转染能防止细胞的凋亡与衰老,保护血管内皮细胞。

飞蝗Argonaute1的分子特性及生物学功能

【目的】MicroRNAs(miRNAs)是一类长度约22 nt的非编码RNA,通过转录后调控的方式在多种生命活动中发挥重要功能。Argonaute1(AGO1)蛋白作为miRNA沉默复合物(miRNA silencing complex RISC)的重要组成部分,在miRNA调控通路中起着关键作用。论文旨在研究AGO1的生物学功能及其对飞蝗(Locusta moratoria)生长发育的影响,为探索昆虫miRNA的生物合成和农业害虫的有效控制提供理论依据。【方法】采用生物信息学方法在飞蝗转录组数据库中获得Lm AGO1 c DNA序列;使用在线蛋白翻译软件(Ex PASy)对Lm AGO1进行蛋白翻译,利用SMART分析Lm AGO1蛋白的功能结构域;选取家蚕(Bombyx mori)、果蝇(Drosophila melanogaster)和赤拟谷盗(Tribolium castaneum)等模式昆虫的同源序列与Lm AGO1氨基酸序列进行聚类分析,采用Phyml软件构建昆虫AGO蛋白的系统发育树;为了进一步研究Lm AGO1在飞蝗生长发育过程中的作用,使用T7 RiboMAX^(TM) Express RNAi System体外合成Lm AGO1的ds RNA,在飞蝗4龄第2天和5龄第2天若虫期连续两次注射ds RNA进行干扰,同时注射ds GFP作为对照。分别收集注射ds RNA后48 h和72 h的整虫样品提取RNA,反转录为c DNA。通过实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测Lm AGO1在不同时间点的干扰效率并观察虫体的发育表型。同时,为了检测Lm AGO1沉默是否会影响miRNA的生物合成,采用RT-q PCR对飞蝗体内5个高丰度miRNA表达进行定量分析。【结果】Lm AGO1蛋白含845个氨基酸,具有典型的AGO蛋白家族保守结构域,即位于213—348位点的PAZ结构域和502—804位点的PIWI结构域。聚类分析表明,Lm AGO1蛋白与其他昆虫的AGO1蛋白聚为一类。通过AGO1氨基酸序列同源比对结果显示Lm AGO1与模式昆虫果蝇、家蚕AGO1的氨基酸序列一致度高达82.2%和86.9%。RNAi结果表明,虫体注射ds Lm AGO1 48 h和72 h后,与对照组相比,Lm AGO1表达量均显著降低,干扰效率分别为88.1%和93.0%;进一步观察试虫生长发育的表型特征,与对照组相比,飞蝗4龄期注射dsL m AGO1后其生长发育并没有出现明显异常,待蜕皮发育至下一龄期(即5龄期)时,出现大量死亡,死亡率为89.3%;荧光定量PCR结果显示注射ds Lm AGO148 h后,飞蝗体内miRNA-252和miRNA-8的表达显著下降,干扰72 h后miRNA-7、let 7、miRNA-252、miRNA-8的表达均显著下降。【结论】飞蝗AGO1除参与RSIC的形成以外,还可能参与miRNA的剪切加工过程进而调控飞蝗的正常发育。

CDV强毒BJ16B2株H基因在昆虫杆状病毒中的表达与鉴定

试验旨在获得具有天然构象且抗原性良好的犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)强毒株的H蛋白。以分离的CDV强毒株BJ16B2为模板,RT-PCR特异扩增H基因,克隆至表达载体pFastBacTMHTA上,酶切及测序鉴定正确后比对分析H基因同源性,并将重组质粒pFastBacTMHTA-H转化大肠杆菌DH10BacTM感受态细胞,同源重组构建穿梭质粒rBacmid-H,将重组穿梭质粒转染Sf9昆虫细胞,拯救重组杆状病毒。利用IFA和Western blotting对获得的重组蛋白进行鉴定及抗原性分析。结果显示,重组质粒pFastBacTMHTA-H酶切测序鉴定正确,该H基因属于Asia-1强毒株,与参考毒株的核苷酸和氨基酸同源性分别为89.8%~99.3%和89.6%~99.5%。在杆状病毒中所表达的H蛋白能与CDV阳性血清及His-tag抗体发生特异性反应,IFA鉴定能够产生特异性绿色荧光,且在68ku左右出现蛋白条带,表明H蛋白成功表达且具有良好的反应原性。本研究获得了具有天然构象及良好抗原性的CDV重组H蛋白,为后续蛋白结构和抗原特性差异分析、单抗制备、CDV亚单位疫苗的开发奠定了基础。

牛分枝杆菌eis基因在耻垢分枝杆菌中的表达及其生物学活性鉴定

试验旨在构建牛分枝杆菌eis基因的穿梭表达载体,鉴定其在重组耻垢分枝杆菌中的生物学活性。采用PCR技术扩增并克隆牛分枝杆菌eis基因,构建大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMV261-Mbeis,经双酶切和测序鉴定其正确性,利用电穿孔法将重组质粒转化至耻垢分枝杆菌mc2155中,采用SDS-PAGE和Western blotting技术检测牛分枝杆菌eis基因在耻垢分枝杆菌中的表达,质谱鉴定目的蛋白氨基酸序列。研究结果表明,成功构建了牛分枝杆菌eis基因穿梭表达载体pMV261-Mbeis;生长曲线表明负载重组质粒不会影响耻垢分枝杆菌的体外生长;SDS-PAGE和Western blotting检测证实了牛分枝杆菌eis基因在耻垢分枝杆菌中可表达出分子质量约44ku的eis蛋白;质谱检测证明了该蛋白即为牛分枝杆菌eis蛋白。本研究构建的牛分枝杆菌eis基因穿梭表达质粒pMV261-Mbeis在耻垢分枝杆菌中具有生物学活性,为下一步研究表达产物eis蛋白的功能奠定了基础。

秸秆覆盖对东北黑土区坡耕地产流产沙及氮磷流失的阻控

为揭示秸秆覆盖对东北黑土区坡耕地产流产沙及氮磷流失的阻控,通过田间试验,探讨秸秆覆盖模式下,玉米生育期对不同坡度试验小区径流、泥沙和氮磷流失的阻控效果。结果表明:随着耕地坡度的增加,地表径流量、土壤及氮磷流失量逐渐增加。玉米种植条件下,地表径流量与降雨量呈正相关,土壤流失量与降雨量不相关。秸秆覆盖模式对土壤流失的阻控效果均为随坡度的降低,阻控率增加,秸秆覆盖对地表径流和土壤流失阻控率均超过90%。土壤中氮素流失以溶解态氮为主,溶解态氮占总氮的60%以上;磷素流失以颗粒态磷为主,颗粒态磷占总磷的80%以上。秸秆覆盖对土壤中总氮、总磷阻控率均超过85%,对于控制水土流失和降低面源污染风险具有积极意义。

金塔县浅层地下水质量现状评价与治理对策分析

依据《地下水质量标准》,采用单因子评价法和综合指数F值评分法分别对甘肃金塔县浅层地下水水质进行评价,结果发现:金塔县区域内的地下水含盐量较高,主要为溶解性总固体、硫酸盐和总硬度超标,区域内浅层地下水水质正在不断恶化,影响到了农业和区域经济的发展,针对地下水污染现状提出应通过促进水土和水盐平衡、合理开发利用地下水、建立健各级污水处理设施、加强农业污染防治、推进现代化农业建设和提升人们节水保护水资源的意识等措施,保证金塔县水资源可持续利用,为该区域的地下水整治和综合管理提供依据。

基于B-S模型的专利权价值评估

全球金融危机过后,实体经济的地位愈加凸显。而诸如柯达、摩托罗拉等企业的衰落也给企业敲响了警钟:缺乏技术创新的企业,即使是当前行业领域内的佼佼者,也终究会被时代的浪潮推翻。当今社会,越来越多的企业已经意识到技术创新对企业未来发展的重要性,纷纷将战略重心转移到研发项目投资上,近年来专利申请数量的递增使得专利权交易市场迅猛发展,市场对专利权价值的评估需求也越来越广。在资产评估领域,如何选定恰当的评估方法,合理准确地评估专利权价值已成为评估的工作重点。本文在基于现有研究成果及相关理论基础,展示了使用B-S模型对专利资产价值评估的全过程,并对传统方法和基于B-S模型的实物期权法进行对比。经过研究分析发现,相较于传统方法,实物期权法考虑了专利资产隐含的期权特性,充分体现了未来预期现金流的变化性。因此,基于现如今多数专利权价值评估仅采用单一方法(收益法)的现状,实物期权法可以作为评估专利资产价值的重要补充方法,有利于提高评估的合理性和准确性,对专利权价值评估实践具有一定指导意义。

物元可拓法在疏勒河水系水质评价中的运用

物元可拓法在水环境质量评价方面已得到广泛运用,在理论和实践方面发挥了重要作用。以酒泉疏勒河水系为准,从中选取3个水质监测站点,每个监测点,选取4个主要的水质检测指标,运用物元分析法对疏勒河水系进行水质评价,物元模型得到的水质评价结果与该水系实际水质情况相符。

指数评价法在苏干湖水系水质评价中的运用研究

苏干湖水系是一个独立的内陆河水系,其生态系统较为脆弱。参照《地表水质量标准》(GB3838-2002),运用指数评价法的单因子污染指数法和内梅罗指数法对苏干湖水系内主要河流和湖泊的水环境质量进行评价分析,研究了该水系内的地表水环境现状,以期为区域内的水环境保护与治理工作提供理论依据。结果表明,结合两种方法,得到的评价结果能够更真实有效地反映出苏干湖水系的水质状况,是比较科学的评价方法。综合分析得出,苏干湖水系内的主要河流大、小哈尔腾河的水质状况良好,未受到污染;湖泊大、小苏干湖的水质状况整体较差,受到不同程度的污染。

基于Arduino和IOT的家庭消防逃生报警系统

家庭安全一直是人们所关注的问题,但近五年来,每年家庭火灾的次数占总火灾发生次数的50%以上,亡人比例大幅上升。随着人们生活水平的提高,人们的安全意识逐渐加强,对家庭防火安全指数提出了更高的要求。而传统家庭消防逃生报警系统无法实现无线互联、自适应环境生成个性化探测指标并及时通知其他人并报警。为了解决这一问题,以Arduino作为核心控制器,采取物联网和传感器技术,将ESP8266模块与相关的硬件电路进行无线连接,通过APP获取室内实时监测的数据、火灾报警、远程开锁等。这种系统主要运用物联网技术,通过MQTT协议实现信号无线实时传输,弥补了传统系统的不足,能在第一时间联系到干系人,实现预警和协助逃生的目的。

英国社会组织参与政府发展援助的管理体系及其启示

该文主要探讨英国政府对社会组织参与政府发展援助的主要支持方式、管理模式、资助策略以及监管模式等,对英国社会组织参与政府发展援助的支持与监管经验进行了归纳总结,在此基础上提出了发挥社会组织在政府发展援助中的作用、成立专门的部门负责社会组织对外发展援助事务、多维度扶持和强化监测评估等政策建议。

疏勒河流域地下水化学特征及控制因素研究

为了解决疏勒河流域地下水退化过程中出现的生态环境问题,在分析疏勒河中下游盆地地下水TDS含量空间变化和分析地下水化学特征的基础上,阐明了控制该地区地下水化学演化的主要因素,结果表明:疏勒河流域地下水TDS含量从祁连山前至瓜州盆地逐渐增大,研究区地下水的流动方向为祁连山前→玉门-踏实盆地→瓜州盆地;祁连山前泉水、玉门-踏实盆地地下水和瓜州盆地地下水的主要水化学类型分别为Mg-Ca-HCO3、Mg-Ca-HCO3-SO4、Na-Mg-SO4-Cl型;控制疏勒河流域地下水水化学演化的主要因素包括岩石风化作用和蒸发结晶作用,其中岩石风化作用占主导地位。

中欧资产评估准则比较与启示

资产评估准则是规范评估行为的重要指导文件,对资产评估行业的发展具有重要意义,本文将我国资产评估准则与具有悠久历史的欧洲资产评估准则进行多方面比较,力求进一步完善我国资产评估准则体系,规范评估执业行为。

MPN计数法对肉类食品检测金黄色葡萄球菌的影响

目的:研究MPN计数法对肉类食品检测金黄色葡萄球菌的影响。方法:选择2017年5月至2018年12月期间,每月在武汉市农贸市场购买的生猪肉、生牛肉、禽肉类及散装熟肉4类肉类食品作为研究对象,分别利用MPN计数法检测其中的金黄色葡萄球菌,观察其检测结果。结果:经过MPN计数法检测后,其中生猪肉有10份阳性,检出率26.32%;生牛肉有10份阳性,检出率31.25%;禽肉类有26份阳性,检出率50.98%;散装熟肉有19份阳性,检出率35.19%。结论:MPN计数法在肉类食品检测金黄色葡萄球菌中具有重要意义,检出率较高,具有临床推广使用的价值。

含碘[^(131)I]放射性药品的药理毒理和不良反应

放射性药品指含有一种或几种放射性核素供应医学诊断和治疗用的药品,是一种特殊药品,具有诊断和治疗肿瘤和组织炎症的作用。尽管含碘[131I]的体内放射性药品的诊断与治疗有显著功效,但同样具有毒性和不良反应。