白细胞介素15基因脂质体的构建及其抗肿瘤效果评价

目的制备DSPE-PEG2000-FA修饰的阳离子脂质体(FPCL),并与白细胞介素15质粒DNA(interleukin-15 plasmid DNA,IL-15 pcDNA,pIL-15)形成FPCL/pIL-15基因递送系统,并进行抗肿瘤效果评价。方法通过薄膜分散法制备FPCL,并且利用正负电荷吸引的原理,制备FPCL/pIL-15复合物。运用动态光散射法测定复合物粒径,利用琼脂糖凝胶电泳考察复合物稳定性,采用荧光分光光度法测定其包封率,以Balb/c小鼠为模型,考察制剂的抗肿瘤效果。结果成功制备了FPCL/pIL-15阳离子脂质体基因复合物,FPCL/pDNA复合物在质量比w_((DOTAP))∶w_((pDNA))=5∶1时粒径达到200 nm以下;抵御阴离子置换实验表明FPCL包载pDNA的稳定性良好,药效学实验表明FPCL/pIL-15复合物抗肿瘤效果显著。结论FPCL作为基因递送载体对基因药物具有很好的保护性,FPCL/pIL-15复合物能够有效诱导NK-细胞增殖与激活,抑瘤效果明显,在肿瘤免疫治疗领域有很大的研究价值。

MT肽修饰阳离子脂质体作为新型基因载体的体外细胞学评价

目的通过体外细胞学实验对MT肽修饰的阳离子脂质体进行基因载体递送能力的评价。方法通过点击反应制备DSPE-PEG2000-MT用于修饰阳离子脂质体,并通过1H-NMR对DSPE-PEG2000-MT进行结构表征。以能够表达增强型绿色荧光蛋白的pEGFP-C1报告基因为模型基因,首先通过琼脂糖凝胶电泳实验进行复合物包封率测定,选出最佳质量比,然后应用A549细胞对其进行细胞毒性评价、报告基因转染与表达研究,以及细胞摄取实验。以PEG2000修饰阳离子脂质体和空白阳离子脂质体为对照,充分研究MT肽修饰阳离子脂质体作为基因递送系统的潜力。结果MT肽修饰阳离子脂质体(cationic liposomes modified by DSPE-PEG2000-MT,MCL)对比参照阳离子脂质体(cationic liposomes,CL;cationic liposomes by DSPE-PEG2000,PCL)具有更高的稳定性及包封率;并通过细胞毒性实验验证MT肽修饰阳离子脂质体的细胞毒性较低;通过共聚焦显微镜和流式细胞仪验证该复合物具有更好的细胞摄取能力,能够促进绿色荧光蛋白的表达;而且通过时间、温度依赖性实验表明了该摄取行为与时间和温度有一定的关系。结论MT肽修饰的阳离子脂质体拥有较好的稳定性,较低的细胞毒性以及更好的细胞摄取能力,是一个十分有潜力的基因递送载体。

抗丙肝新药daclatasvir dihydrochloride的合成

目的:合成抗丙肝新药daclatasvir dihydrochloride,并对其工艺进行改进。方法:以联苯为原料经傅克酰基化,亲核取代,环合,酸化脱保护和亲核取代反应制得daclatasvir dihydrochloride。结果:目标产物结构经1H-NMR和MS确证,整个工艺总收率为23.9%。结论:本路线操作简便、成本较低、条件温和、步骤少,适合工业化生产。