2014年~2019年PRRSV主要流行毒株在我国的变化

为了研究2014年至2019年PRRSV在我国的流行变化情况,本研究分别检测了2014年6月~2019年8月全国17个省、市和自治区及某大型养猪集团2007份和338份疑似PRRSV感染的病料。结果显示,共检出PRRSV阳性病料650份,测定了486株ORF5基因、441株nsp2基因和122株全基因组序列。遗传演化分析显示,2014年~2019年共检测到6种基因亚型的PRRSV,分别是I型PRRSV、HP-PRRSV、NADC30-like PRRSV、NADC34-like PRRSV、QYYZ-like PRRSV和RespPRRS MLV-like PRRSV。经统计分析显示,2016年以前除检测到1株NADC30-like PRRSV外,其余全部是HP-PRRSV;2016年后HP-PRRSV检出比率逐渐降低,NADC30-like PRRSV检出比率逐渐升高,且2016年后已超过HP-PRRSV,成为我国主要的流行株。QYYZ-like PRRSV的检出数量增多,其广泛流行于我国的华南地区。其它类型的PRRSV检出比率较低,呈现散发或局部流行。此外,近年来,PRRSV的细胞嗜性已经发生明显变化,绝大多数的病毒株无法在体外分离培养。因此,我国养殖企业针对PRRSV流行株的变化应及时调整防控策略,同时加大对PRRSV生物学特性变化机制的研究。本研究对了解我国PRRSV的流行状况及防控具有重要的指导意义。

水杨酸对干旱胁迫下毛竹实生苗生理生化特征的影响

【目的】通过比较分析水杨酸对不同水分处理毛竹幼苗的生长和生理生化指标的影响,初步揭示水杨酸对不同水分处理毛竹生长的作用机制。【方法】采用随机区组设计,设置正常供水（CK）、干旱（D）、干旱＋0.5mmol·L-1SA（DS1）、干旱＋1.0 mmol·L-1SA（DS2）和干旱＋2.0 mmol·L-1SA（DS3）5个处理,通过测定、分析毛竹实生苗的保护酶活性、渗透调节物质含量、叶片含水量、叶片叶绿素含量和叶片电解质外渗率等指标,探究干旱胁迫下外源水杨酸（SA）处理对1年生毛竹实生苗生理生化特性的影响。【结果】干旱胁迫下,毛竹叶片中可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、过氧化物酶（POD）活性、叶绿素含量和叶片含水量显著下降（P〈0.05）,电解质外渗率显著增加（P〈0.05）,全株生物量显著减少（P〈0.05）。而根际施加SA处理后,在0.5-2.0 mmol·L-1范围内,随着SA浓度的增加,毛竹实生苗叶片中可溶性糖含量、过氧化物酶（POD）活性显著升高（P〈0.05）,叶片含水量、叶绿素含量、全株生物量显著增加（P〈0.05）,电解质外渗率显著下降（P〈0.05）,过氧化氢酶（CAT）和超氧化物歧化酶（SOD）活性出现短暂下降;干旱胁迫下,0.5 mmol·L-1SA处理,毛竹实生苗电解质外渗率显著下降（P〈0.05）,而其他指标没有显著变化。以上结果说明,在中度干旱胁迫下,外源SA处理提高了毛竹实生苗叶片保护酶的活性,特别是POD的活性,清除氧自由基,减少了干旱对毛竹实生苗的伤害;通过保持毛竹实生苗叶片较高的水分含量和叶绿素水平,增强其生理活性,增加干旱胁迫下的生物量积累,毛竹实生苗抗旱性增强。根际施加SA处理,在0.5-2.0 mmol·L-1范围内,随着浓度的增加,外源SA处理提高毛竹实生苗抗旱能力的效应增强;而在相同浓度下,随着干旱时间的持续,其提高毛竹实生苗抗旱能力的效果呈现先增强后减弱的趋势。【结论】在干旱条件下,外源SA（2.0mmol·L-1）根施处理,能在一定时间内（14天）有效提高毛竹1年生实生苗的抗旱能力,减少干旱对毛竹实生苗的生长的不良影响;同时,也可能对提高毛竹实生苗造林成活率,以及后期在毛竹林抵御干旱灾害上具有积极的作用。

2017年我国输入性北美1-7-4分支PRRSV的基因组序列分析

为揭示我国猪场中的新发猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的基因组特征及起源,本研究对辽宁省两个发病猪场检测到的两株1-7-4分支PRRSV (LNWK96和LNWK130)进行遗传演化及测序分析。遗传演化分析显示,两株1-7-4分支PRRSV在我国PRRSV基因分群中属于一个新亚群,即第7亚群。对LNWK96株进行了全基因组序列分析显示,与我国分离的PRRSV株的核苷酸同源性为82.3%～84.9%,与美国分离的1-7-4分支IA/2014/NADC34株的同源性最高为96.1%。重组分析显示LNWK96株是以1-7-4分支的病毒为母本株,ISU30和NADC30病毒株提供重组片段的重组病毒。推测该两株PRRSV极有可能是来自北美的输入性1-7-4分支PRRSV。本研究首次报道1-7-4分支的PRRSV在我国出现,该类病毒株在我国的流行趋势值得关注,其致病性及当前疫苗的保护效果需要进一步研究。

2016年我国3株欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及其全基因组特征分析

2016年,本实验室共检测到3株基因1型(欧洲型)猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),分别命名为ZD1株、WK14株和WG9株,本研究对3株PRRSV进行了全基因组序列分析。遗传演化分析显示,3株PRRSV均属于基因1型I亚型,与基因1型代表株LV的核苷酸同源性为88.7%~88.9%,与基因2型代表株VR2332的核苷酸同源性为60.7%~60.8%。ORF3与ORF4推导氨基酸序列比对结果显示,ZD1株的ORF3提前26个氨基酸(aa)终止,这是首次报道基因1型PRRSV编码的结构蛋白存在提前终止现象,WK14株与WG9株在ORF3的245位存在1个氨基酸的缺失;3株PRRSV在ORF4的66位皆存在1个氨基酸的缺失。Simplot生物学重组软件分析表明,WK14株为重组病毒,供体病毒株为BJEU06-1,提供重组片段的病毒株为NVDC-FJ,重组位置位于第931~3 379位碱基处。ZD1株和WG9株未发现重组现象。本研究发现我国欧洲型PRRSV基因组在缺失、重组等方面正发生一些新的变化,有必要对该类病毒进行持续监测和深入研究。

高温干旱及复水对毛竹实生苗保护酶和脂质过氧化的影响

为探讨高温、干旱、高温+干旱复合胁迫及复水对毛竹Phyllostachys edulis实生苗保护酶、脂质过氧化的影响,以毛竹实生苗为材料,研究了适温(昼/夜温度为28℃/22℃)正常供水(田间持水量的75%,对照),适温下干旱胁迫(田间持水量的35%),高温(昼/夜温度为40℃/22℃)正常供水,高温下干旱胁迫以及干旱胁迫后复水等4个处理对毛竹实生苗叶片中抗氧化酶、过氧化氢(H_2O_2)和丙二醛(MDA)的影响。结果表明:(1)在3种胁迫处理下,超氧化物岐化酶(SOD),过氧化物酶(POD),过氧化氢酶(CAT)活性均显著上升(P<0.05),抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性在干旱胁迫、高温干旱复合胁迫下显著上升。其中高温处理毛竹叶片SOD和CAT活性上升幅度最大;干旱处理POD活性上升幅度最大,其次为CAT,同时过氧化氢显著高于其他各处理,达278.7 nmol·g-1;高温干旱复合胁迫下POD和APX活性上升幅度最大,MDA显著高于其他各处理。(2)复水后,干旱处理下过氧化氢在复水后第1天上升,引起POD和CAT活性上升,APX活性先降后升,复水后第3天毛竹叶片MDA,过氧化氢均恢复至对照水平;高温干旱复合胁迫下SOD,POD和CAT活性持续下降,APX先下降又有回升,同时MDA持续上升,过氧化氢先下降后又升高,在复水后第3天均处于较高水平,且与干旱胁迫相比差异显著(P<0.05)。毛竹实生苗在不同胁迫下有不同的保护机制,CAT和POD分别是毛竹适应高温和干旱的主要抗氧化酶,APX和POD对复合胁迫较为敏感,SOD则在3种胁迫下均对抗膜脂过氧化起到重要作用;在一定的干旱胁迫后复水,保护酶协同作用,表现出较强的恢复能力,而高温加剧了干旱对竹苗的伤害,在高温干旱复合胁迫后复水竹苗并未得到恢复。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)对类NADC30 PRRSV免疫保护效果的评价

类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)已成为我国PRRSV的主要流行株,为了评价当前商品化疫苗对类NADC30 PRRSV的免疫保护效果,本研究将12头6周龄仔猪随机分为3组,免疫组和攻毒对照组各5头、空白对照组2头,免疫组肌注高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)10^(5.0)TCID_(50)/头,免疫后21 d,免疫组和攻毒对照组每头各肌注2 mL和滴鼻2 mL类NADC30 PRRSV SD53-1603株(104.0TCID_(50)/mL)。攻毒后观察各组实验猪临床症状,可见攻毒对照组所有猪均发热,持续5 d9 d,免疫组仅2头猪发热1 d2 d。检测各组实验猪体重变化,结果显示,攻毒后免疫组和攻毒对照组体重增长均显著低于空白对照组(p<0.001),但攻毒14 d以后,免疫组体重增长显著高于攻毒对照组(p<0.05)。IDEXX ELISA测定各组猪血清中PRRSV的特异性抗体,结果显示免疫后14 d可以诱导免疫组仔猪产生良好的针对PRRSV的特异性抗体。利用荧光定量PCR测定血清和组织中的病毒载量,结果显示免疫组血清和组织中的病毒载量均极显著低于对照组(p<0.0001)。对PRRSV免疫后及攻毒后各组仔猪各脏器病理学观察,结果可见攻毒对照组与免疫组相比出现明显的剖检和组织病理学变化。以上结果表明,高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)对类NADC30 PRRSV可以提供一定的交叉保护,该研究为评价我国现有疫苗是否对类NADC30 PRRSV具有保护效果提供了参考依据。

风兰种子的组织培养技术

风兰为一种稀有的兰花品种,具有重要的药用和观赏价值。利用风兰种子为外植体,筛选风兰种子的诱导、增殖和生根培养基,结果表明:1/2MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+1.0 g/L AC+30g/L蔗糖+7.0 g/L琼脂+100mg/L香蕉泥诱导效果最好,诱导率在95%以上;增殖分化培养基为1/2MS+0.5mg/L6-BA+1.0 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+7.0 g/L琼脂+100 g/L香蕉泥,增殖系数为55.46;生根培养基为1/2MS+0.5 g/L AC+0.5 mg/L6-BA+0.5 mg/L NAA+15 g/L蔗糖+7.0 g/L琼脂+100 g/L香蕉泥,生根率为93%,平均根数为4.8条/株。

火焰南天竹组培快繁体系的探讨

以观赏灌木火焰南天竹幼嫩茎尖为研究对象,研究不同灭菌时间对成活率及污染率的影响,以及不同培养基和激素浓度对不定芽诱导、增殖和生根的影响。试验表明,在无菌环境下,用70%酒精消毒5 s,再用10%NaClO灭菌12 min的灭菌效果最佳;最佳诱导培养基为MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1+AC 1.0 g·L-1,最高诱导率为87%;最佳增殖培养基为MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1+IAA 0.1 mg·L-1 L+AC 1.0 g·L-1,增殖系数最高可达5.29;最佳生根培养基为1/2 MS+IBA 0.5 mg·L-1+AC 4.0 mg·L-1,生根率最高可达98%。将火焰南天竹组培苗移入泥炭土∶蛭石∶珍珠岩为8∶1∶1的混合基质中成活率较高,最高可达94%,且组培苗长势良好。

斜拉索磁致负刚度阻尼器与黏滞阻尼器减振对比研究

为验证基于负刚度效应的阻尼器对斜拉索减振效果的提升作用,开展了磁致负刚度阻尼器和黏滞阻尼器数值仿真分析研究。研究结果表明:建立的耦合系统(对拉索抗弯刚度和垂度忽略不计)基于MATLAB/Simulink仿真分析可实现磁致负刚度阻尼器对斜拉索附加模态阻尼比的精准求解;该系统的附加阻尼比可直观表征负刚度对斜拉索减振效果的提高程度;不同的负刚度系数对减振效果影响较大,主要体现在斜拉索的附加阻尼比、跨中位移幅值等方面。

白花真樱组蛋白乙酰转移酶hat8基因的克隆和表达分析

组蛋白乙酰转移酶是组蛋白乙酰化的关键酶,它与组蛋白去乙酰化酶共同作用,调节组蛋白乙酰化的动态过程。研究表明,组蛋白乙酰化在植物的生长发育、抗性胁迫反应过程中有十分重要的调节作用。本研究通过PCR扩增获得了白花真樱组蛋白乙酰转移酶基因hat8。通过生物信息学分析,该基因序列全长1701 bp,编码566个氨基酸,预测分子量为63.62 kD,等电点为8.72,并将其命名为Plhat8。通过对白花真樱不同发育期的转录组测序结果分析发现,该基因在白花真樱愈伤组织发育过程中的表达量下调。在接种致病根癌农杆菌At3后,Plhat8基因在感病品种白花真樱中表达量显著上调,而在抗病品种迎春樱的表达量下降。这些研究结果表明,Plhat8可能参与白花真樱响应根癌农杆菌侵染的过程,为樱花抗根癌病的遗传改良提供理论基础。