川西泸定昔格达地层黏土岩工程地质特性研究

昔格达地层作为一类特殊的半成岩,具有“见风成粉,遇水成泥”的特性,是工程地质问题与地质灾害的良好孕生载体。以川西泸定海子坪昔格达地层黏土岩为研究对象,通过X射线衍射、电镜扫描、现场与室内岩土测试,分析了其物质组成、微观结构及力学特性,重点研究水作用下其物理力学性质的变化规律,并与其他地区昔格达地层工程地质特性进行比较分析。研究表明:①海子坪昔格达地层黏土岩主要成分为粉细砂、黏土等细粒物质,由薄层黄色和灰色的黏土岩互层产出,具有近水平层理构造。②黄色和灰色黏土岩的物质组成相同,但占比不同,黄色黏土岩的黏粒含量比灰色黏土岩高约12%,方解石含量少约10%,黄色黏土岩的结构更为致密,黏粒间胶结作用更强。③海子坪昔格达地层黏土岩现场实测渗透系数为3.62×10^(−4)~7.34×10^(−4)cm/s,介于其他地区昔格达地层的黏土岩类–砂岩类之间,这与其天然节理发育、受扰动极易开裂的特性密切相关。④黄、灰色黏土岩的黏聚力均随含水率增加而降低,且含水率越高,降幅越大,内摩擦角与含水率的关系则表现有所不同。⑤不同地区昔格达地层的力学特性对含水率变化的敏感性具有明显差异,其中泸定海子坪昔格达地层黏土岩的水敏性最为显著。

东北虎巴氏杆菌病的病原分离鉴定及耐药性分析

为确定从死亡东北虎脏器组织中分离获得的1株细菌的特性,通过菌体形态、菌落形态、革兰氏和美蓝染色特性、生化特性、血清型、动物致病性试验等系统鉴定,确定其为高致病性的多杀性巴氏杆菌。20种常用抗菌药物的纸片法药敏试验结果证明,该菌株仅对新霉素、头孢唑啉和卡那霉素3种药物敏感,对大多数抗菌药物高度耐药。经电镜负染观察及传代细胞系和鸡胚进行病毒分离,结果均为阴性。

四川泸定昔格达组滑坡灾害运动过程模拟分析

四川泸定昔格达组以半成岩为主,工程地质特性复杂,在高陡斜坡中常发生浅层蠕滑变形,在强降雨作用下失稳后可转化为泥石流。本文以四川省泸定县海子坪环环村滑坡为例,基于遥感解译、地面调查、数值模拟等方法,对滑坡发育特征、潜在失稳模式和滑坡-泥石流运动过程进行分析。结果表明,环环村滑坡主要发育于昔格达组内,以深度3~5 m的浅层变形为主,整体处于蠕滑变形阶段。滑坡平面上分为强变形区(A区)和弱变形区(B区),体积分别约为5.5×10^(4) m^(3)、5.8×10^(4) m^(3),在不同降雨条件下,存在仅有A区下滑和A区牵引B区一起下滑并转化为沟道泥石流2种致灾模式。当仅有A区失稳下滑时,最远运动距离可达1325 m,最大堆积厚度为5.2 m,最大运动速度41.6 m/s,滑坡破坏沟口居民区及道路。当A区和B区同时失稳下滑时,最远运动距离可达1345 m,最大堆积厚度为7.7 m,最大运动速度为44.3 m/s,滑体最远能够冲至河流对岸,形成高约3 m的滑坡坝。研究结果对于深化浅层滑坡-泥石流远程致灾效应的认识和防灾减灾具有一定的指导意义。

水泡性口炎病毒感染犊牛口腔黏膜上皮细胞的超微结构变化

将水泡性口炎病毒(VSV)接种于原代培养的犊牛口腔黏膜上皮细胞(CPMBCs),通过对不同时间收集的感染细胞制作超薄切片,观察病毒在该细胞上的形态发生。结果表明,VSV能导致CPMBCs出现典型的CPE和超微结构变化,主要表现为细胞圆缩、线粒体肿胀、胞浆空泡化,病毒游离于胞浆内或以出芽方式进入胞浆空泡内,病毒主要在细胞突起处进行出芽增殖,获得囊膜而成熟。感染24h后,细胞出现严重的纤维化,细胞骨架明显。该研究结果为VSV的嗜上皮机制研究提供了重要的依据。

PCR扩增近交系大鼠微卫星位点DNA多态性的研究

本实验选取大鼠 7条染色体上的微卫星位点合成了 10对引物 ,利用聚合酶链反应 (PCR)扩增技术对国内北京和哈尔滨等 4家单位提供的 6个品系 (SHR、SHRSP、LEW、RCS、WKY和F34 4)的 8个近交系大鼠群体进行了DNA多态性分析的研究。结果表明 :9个微卫星位点具有显著多态性 ;不同品系个体之间具有多态性 ;同一群体不同个体之间除SHR(哈 )的SMST位点和WKY(哈 )的AGT位点出现一定的差异外 ,其他均没有差异 ;不同地区同一品系的不同个体之间也存在一定的差异。该方法能有效地对近交系与杂交系、品系与品系、品系与亚系加以区分。因此 ,本实验为开展近交系大鼠遗传作图、基因定位和为实验动物的遗传背景监测提供可靠的信息 ,为大鼠遗传基因的研究提供了一个快捷简便、特异准确的方法。

犬瘟热琼脂扩散试验方法的建立及初步应用

采用犬瘟热鸡胚成纤维细胞弱毒疫苗免疫绵羊制备琼脂扩散抗体，应用犬瘟热病貉肝脏（电镜检查“＋＋”以上）制备琼脂扩散抗原，建立了琼脂扩散试验方法，用于犬瘟热病死动物肝、脾脏器中病毒抗原成分的检出。检测送检病料１０份，与电镜检查结果比较，阳性符合率为８５．７％（６／７），阴性符合率为７５％（３／４），总体符合率为９０％（９／１０）。本方法特异、敏感，操作简便，易于推广应用。

猪血凝性脑脊髓炎病毒抗体的调查

应用血凝和血凝抑制试验检测了从吉林省部分地区采集的猪血清中血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)抗体。结果,212份样品中有94份呈现HEV抗体阳性反应,阳性率高达44.3%。被采集血清的猪未表现临床症状,说明该地区的猪群中存在HEV隐性感染。

DNA指纹图与生化标记分析对近交系小鼠遗传检测的比较

采用 JL- 0 2多位点探针对来自北京和西安地区的 5个 BAL B/ c群、2个 BAL B/ c- nu/ nu群、4个 C57群、1个CBA/ N群和 1个 DBA/ 2群近交系小鼠进行了 DNA指纹图分析 ,并与常规生化标记分析法进行了比较。结果显示 ,DNA指纹图的图带数均为 17～ 2 2条 ,具有良好的多态性。生化标记分析中 Hbb位点显示异常的 BAL B/ c及 BAL B/c- nu/ nu小鼠与其同群体正常小鼠的 DNA指纹图有较大差异 ,2个体之间的相似系数 (F)及共有带率 (X)均在 0 .8以下 ,完全相同 DNA指纹图的概率 (P)均在 1.3× 10 - 2以下 ;生化标记分析未见异常的群体内 ,DNA指纹图基本一致 ,P>2 .2× 10 - 1 。 DNA指纹图显示 ,不同单位的同一品系间存在一定差异 ,其 F及 X均在 0 .8以下 ,P<1.1× 10 - 3 。不同品系间 DNA指纹图的 F及 X相差较大 ,均在 0 .4以下 ,P=2 .7× 10 - 1 0。BAL B/ c群与 BAL B/ c- nu/ nu群间 DNA指纹图的 F和 X在 0 .6 5以下 ,P=3.8× 10 - 6。同一动物的基因组 DNA,经不同次实验所得出的 DNA指纹图基本一致。2种方法比较表明 ,DNA指纹图在动物遗传检测中比生化标记分析有较大的优势 ,它不但能确切地反映生化标记分析显示的异常动物的遗传变化 ,而且还检出了生化标记分析未能检出的动物遗传变异 ,因此更加灵敏。

羊传染性脓疱病毒松原分离株的分离鉴定及B2L基因的克隆与序列分析

利用原代犊牛睾丸细胞从临床上表现口疮症状的羔羊痂皮材料中分离获得1株病毒,对该株病毒进行病毒形态学、理化学、PCR检测与动物回归试验等系统鉴定后,证实该分离株为羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV),命名为ORFV-sy。利用PCR方法克隆出其B2L基因,并将该基因序列和推导的氨基酸序列与6个不同来源的ORFV毒株进行同源性和亲缘关系的比较分析。结果表明,各毒株间核苷酸和氨基酸的同源性分别为97.8%～99.5%和97.6%～99.5%;系统发育进化树结果表明,ORFV-sy毒株与印度分离绵羊株ORFV-Mukteswar67/04、ORFV-Izatnagar79/04的亲缘关系较近,表明不同地区分离毒株的B2L基因差异不大。

鹅巴氏杆菌病的病原分离鉴定及其病理学观察

通过镜检、培养、琼扩试验、生化鉴定及动物回归等试验,从临床表现为神经症状、眼观主要病变为肝肿大、肝表面和切面有灰白色坏死灶为主要特征的病鹅体内分离出禽多杀性巴氏杆菌,其主要病理组织学变化为部分肝小叶内含有一个或多个凝固性坏死灶;大脑皮层血管周围有多量的中性粒细胞浸润,形成明显"血管套"现象,呈化脓性脑炎变化。通过电镜观察、SPF鸡胚接种和血凝抑制试验等排除了禽流感、新城疫等病毒感染的可能性,为禽巴氏杆菌病的诊断提供了资料。

1株高致病性血凝性脑脊髓炎病毒的分离与鉴定

利用细胞培养方法从临床表现神经症状的死亡仔猪脑组织内分离获得1株病毒,同时对该病毒进行电镜负染观察、昆明种小鼠致病性试验、RT-PCR检测和部分基因测序分析。电镜观察可见细胞培养物中有大量的直径约115 nm的冠状病毒样粒子;接种病毒的小鼠均出现典型的神经症状,死亡率100%;血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)特异性引物RT-PCR扩增结果阳性;其S基因序列与GenBank中登录的HEV-67 N相应基因序列的同源性高达99.6%。结果表明,分离的病毒为猪血凝性脑脊髓炎病毒,分离株暂命名为HEV-CC-2007。

用DNA指纹图技术分析Wistar大鼠的遗传距离

采用JL - 0 2多位点探针和Southern杂交对Wistar大鼠基因组进行了DNA指纹分析 ,并对国内最具有典型的 6个地区 9个Wistar大鼠群体内和群体间进行了DNA指纹分析比较。结果表明 ,DNA指纹图较好地反映了封闭群动物的遗传本质 ,具有良好的多态性。同一群体不同个体间Wistar大鼠遗传距离主要为 0 .2～ 0 .6 ,将不同群体的Wistar大鼠DNA指纹图带进行分析表明 ,所有群体间的DNA指纹图的遗传距离在 0 .2～ 0 .7。

临床死亡川金丝猴心肌炎病例的诊断及病因分析

对临床送检的急性死亡川金丝猴进行解剖,观察各组织脏器的大体病理变化并对其进行中性甲醛固定、石蜡包埋切片和病理组织学分析;无菌操作进行肉汤法分离培养细菌和细胞培养法分离病毒,通过形态学、动物回归试验和RT-PCR方法对分离的病原进行培养、鉴定。结果,眼观心肌呈局灶性坏死,镜下心肌纤维断裂、崩解,肌间有大量炎性细胞浸润,呈典型的病毒性心肌炎变化;从肺脏中分离获得大肠杆菌;电镜负染可见心肌组织匀浆液和心包积液以及其Vero细胞培养物中均有直径在20～25nm,形似小RNA病毒的粒子存在;RT-PCR检测结果说明所分离病毒为柯萨奇B型病毒;动物回归试验证实,分离的大肠杆菌对昆明种小鼠无致病性,而分离的病毒对小鼠有致病性,且病理组织学变化与金丝猴相似。根据临床症状、病理剖检和病理组织学变化特征,结合病原分离结果综合分析,推测该金丝猴死亡的原因可能与该病毒感染有关。

小鼠体外受精、胚胎培养及胚胎快速冷冻的研究

目的 为扩大胚胎来源并获取特定胚龄胚胎 ,建立小鼠冷冻胚胎库。方法 运用超数排卵、体外受精与胚胎培养及胚胎冷冻技术系统研究了小鼠受精卵的体内发育与运行规律。卵母细胞的体外成熟与受精、单细胞胚胎培养及胚胎快速冷冻。结果 (1)注射hCG后 12～ 2 0h受精卵发育至原核期 ,4 2～ 4 8h为 2 细胞期 ,4 8～ 6 0h为 4 细胞期 ,6 0～ 6 8h为 8 细胞期 ,以上各期受精卵均处于输卵管中 ;75～ 78h为桑椹胚 ,78～ 80h为致密桑椹胚 ,90～ 92h为早期囊胚 ,92～ 96h为囊胚 ,以上各期均处于子宫角中。 (2 )培养液中添加促性腺激素 (FSH与hCG) ,能显著提高卵母细胞的体外受精率 ,添加FCS和激素组的体外受精率又显著高于单独添加激素组 ,FCS还能显著提高胚胎发育。 (3)在培养液中添加EDTA ,能有效克服小鼠胚胎的 2 细胞阻断 ,其 2 细胞胚的发育率达 10 0 % ,8 细胞胚发育率达 5 5 %以上 ;牛、羊上皮细胞培养液上清也能有效克服 2 细胞阻断。添加乳酸钠和丙酮酸钠可使 2细胞与 8细胞期胚的发育率显著提高。 (4)以D PBS +甘油 +蔗糖为冷冻液 ,以D PBS +蔗糖为稀释液 ,对小鼠胚胎进行快速冷冻 ,桑椹胚的存活率为 6 9 3% ,早期囊胚的存活率为 6 0 4 %。结论 研究为将生物技术应用于小鼠 。

鼠防御素cryptdin 4基因在杆状病毒中的表达及活性

以防御素cryptdin 4为研究对象,在昆虫-杆状病毒表达系统对cryptdin 4基因的成熟肽片段进行表达。通过SDS-PAGE电泳和Western-blot检测,结果发现在相对分子质量8000处出现目的蛋白条带,表明该基因在杆状病毒中获得表达;体外抑菌试验结果显示,目的蛋白具有明显的抗金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、李斯特菌等指示菌的活性。

水泡性口炎病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

为建立方便快捷的水泡性口炎病毒(VSV)检测方法,本研究以抗VSV单克隆抗体(MAb)为捕获抗体,兔抗VSV多克隆抗体为检测抗体,建立VSV双抗体夹心ELISA检测方法。结果显示,该方法的最佳工作条件为:抗VSV MAb 1A2的包被浓度为3.09μg/mL,兔抗VSV多克隆抗体和酶标抗体的工作浓度分别为5.16μg/mL和1∶5 000,以OD450nm≥0.231作为阳性判定标准。该ELISA方法对猪水泡病病毒、猪水疱疹病毒及羊传染性脓疱病毒等均无交叉反应;敏感度可达3.125μg/mL(101TCID50);其重复性变异系数小于10%。采用建立的ELISA方法与RT-PCR方法同时检测187份临床样品,符合率达到97.9%,具有良好的相关性。本实验建立的VSV双抗体夹心ELISA检测方法具有特异性好、敏感性高、成本低及方便快捷等优点,可以用于VSV的快速检测。

川金丝猴柯萨奇病毒的分离鉴定

利用细胞培养方法从长春某动物园送检的死亡川金丝猴心脏中分离获得1株柯萨奇病毒,经系统的形态学、理化学、动物回归试验和RT-PCR扩增,符合柯萨奇B型病毒特征;进而对其VP1基因部分序列和特异性血清抗体分析,证明所分离的病毒为柯萨奇B3型病毒。这是国内外首次从金丝猴分离到该病毒,暂命名为CVB/SGM-05。

东北虎巴氏杆菌病的诊断及病理形态学观察

应用常规的病理剖检技术解剖死亡东北虎,观察其病理变化;将病料无菌操作接种血清肉汤培养基培养获得1株细菌,经形态学观察和动物回归试验证实为高致病性巴氏杆菌;进而对死亡虎的各脏器进行病理组织学观察和分析,为东北虎的巴氏杆菌病提供了相关诊断资料。

猪血凝性脑脊髓炎病毒HE基因的克隆及原核表达

目的构建猪血凝性脑脊髓炎病毒株(67N)血凝素酯酶蛋白(HE蛋白)原核表达系统,为建立特异性免疫学诊断方法提供备选材料。方法克隆猪血凝性脑脊髓炎病毒(67N)HE蛋白抗原表位富集区基因,构建重组表达质粒pET-HE,并在大肠杆菌中诱导表达。经包涵体的初步纯化,金属螯合层析进一步纯化HE蛋白,SDS-PAGE和Western blot进行检测。结果大肠杆菌可高效表达HE蛋白,目的蛋白表达量可占菌体总蛋白的42.2%。纯化后蛋白浓度为0.6 mg/ml,纯度为85.4%。所表达的蛋白可被兔抗猪血凝性脑脊髓炎阳性血清所识别。结论已成功构建猪血凝性脑脊髓炎病毒HE蛋白原核表达载体,重组HE蛋白抗原具有良好的特异性,可作为检测猪血凝性脑脊髓炎病毒血清抗体的候选抗原。