凌源市南果梨花果管理关键技术

本文主要介绍了凌源市南果梨花果期管理的关键技术,以实现凌源市南果梨的高效生产。

干扰TOX基因联合抗CD38 CAR-T细胞的构建及其对血液肿瘤细胞增殖和凋亡能力的影响

目的构建干扰胸腺细胞选择相关高迁移率群体盒(TOX)基因联合抗CD38 CAR-T细胞,观察其对血液肿瘤细胞增殖和凋亡能力的影响。方法采集健康志愿者外周血,分离单个核细胞(PBMC),提取原代T淋巴细胞。构建以shRNA技术靶向抑制TOX的抗CD38 CAR分子,分别命名为TOX-shRNA1-CD38 CAR和TOX-shRNA2-CD38 CAR,另设计一条不针对任何靶点的无意义RNA序列作为对照,命名为CD38 CAR分子。将分子酶切并连接逆病毒载体包装质粒pMFG,获得pMFG-TOX-shRNA1-MYC-CD38 CAR、pMFG-TOX-shRNA2-MYC-CD38 CAR和pMFG-MYC-CD38 CAR。将人原代T淋巴细胞分为CD38 TOX-shRNA1-CD38 CAR-T组、TOX-shRNA2-CD38 CAR-T组、CAR-T组,分别转导pMFG-TOX-shRNA1-MYC-CD38 CAR、pMFG-TOX-shRNA2-MYC-CD38 CAR和pMFG-MYCCD38 CAR质粒,获得CD38 CAR-T细胞、TOX-shRNA1-CD38 CAR-T细胞和TOX-shRNA2-CD38 CAR-T细胞。采用RT-QPCR法检测三组细胞中TOX mRNA的相对表达量;记录三组细胞0~10 d体外培养生长倍数,观察细胞增殖能力。选取CD38高表达的人多发性骨髓瘤荧光素酶标记细胞RPMI-Luc、人Burkitt’s淋巴瘤荧光素酶标记细胞Raji-Luc作为靶细胞,与三组CAR-T细胞分别共培养48 h;另取三组CAR-T细胞单独培养作为对照,不加肿瘤细胞。采用流式细胞术检测三组CAR-T细胞表面CD69的表达效率,评价CAR-T细胞活化情况;对三组细胞进行CFSE染色,采用流式细胞术观察CAR-T细胞增殖能力;荧光素酶化学发光法观察CAR-T细胞在不同效靶比(1∶2、1∶4、1∶8)时对肿瘤细胞的杀伤效率;ELISA法检测三组CAR-T细胞上清中IFN-γ释放量;流式细胞术检测三组细胞表面PD-1表达量,评估CAR-T细胞的耗竭程度。结果 CD38 CAR-T组、TOX-shRNA1-CD38 CAR-T组、TOXshRNA2-CD38 CAR-T组的转导效率分别为41.51%、41.28%、44.84%,均超过40%。与CD38 CAR-T组比较,TOXshRNA2-CD38 CAR-T组TOX mRNA表达水平降低(P <0.05),TOX-shRNA1-CD38 CAR-T组无明显变化(P>0.05)。三组CAR-T细胞体外培养0~10 d均稳定增殖,三组间生长倍数比较差异无统计学意义(P <0.05)。三组与肿瘤细胞共培养后,CD69表达效率均升高(P均<0.01)。与单独培养的CAR-T细胞相比,三组CAR-T细胞与Raji-Luc、RPMI-Luc细胞共培养后FITC信号左移,增殖加快,三组增殖能力比较无统计学差异(P> 0.05)。与CD38 CAR-T组相比,TOX-shRNA2-CD38 CAR-T组在不同效靶比时对肿瘤细胞的杀伤效率均提高,γ干扰素释放水平升高,细胞表面PD-1表达水平降低(P <0.05或<0.01),而TOX-shRNA1-CD38 CAR-T组与CD38 CAR-T组比较,肿瘤细胞的杀伤效率、γ干扰素释放水平、细胞表面PD-1表达水平均无统计学差异(P均>0.05)。结论成功构建了靶向抑制TOX基因联合抗CD38 CAR-T细胞,TOX-shRNA-CD38 CAR-T细胞能够有效抑制TOX表达;经肿瘤细胞激活后,其体外增殖活性及抗肿瘤能力显著增强,且TOX-shRNA-CD38 CAR-T细胞耗竭也得到改善。

从森林植被资源经营现状出发浅谈对国有凌源市欺天林场森林功能区域的划分

本文从国有凌源市欺天林场地理位置、气候特点、森林植被和森林资源现状出发,阐述了以往经营中存在的7项问题,针对主要问题,对森林功能进行了科学的区域划分,供决策者参考。

辽西地区设施温室果树栽培水肥一体化配套技术及其应用效应

设施温室果树栽培引进与推广水肥一体化配套技术,即节省了大量的劳动力资源,又提升了设施温室果树栽培的经济效益,预与此同时,还对设施温室土壤理化性质的优化起到了重要的作用。本文立足辽西北半干旱地区设施温室果树栽培的现状,总结了设施温室果树栽培水肥一体化的主要模式,在此基础上,分析了设施温室果树栽培肥水一体化的主要效应。

shRNA靶向抑制PTPN2增强抗CD38 CAR-T细胞抗肿瘤活性

目的构建shRNA靶向抑制PTPN2的抗CD38 CAR-T细胞并对其体外抗肿瘤活性进行初步研究。方法构建shRNA靶向抑制PTPN2的抗CD38 CAR-T的CAR分子,包装为逆病毒载体,转导人原代T细胞,制备CAR-T细胞。将2组PTPN2-shRNA CD38 CAR-T细胞作为实验组,未转导的T细胞和CD38 CAR-T细胞作为对照组。采用RT-QPCR法检测CART细胞PTPN2 mRNA抑制效率;计算CAR-T细胞体外培养0~12 d的生长倍数;采用CFSE法检测CAR-T细胞与Raji-luc(人Burkitt淋巴瘤)或RPMI-GFP(人多发性骨髓瘤外周血B淋巴细胞)细胞共培养时的增殖情况;采用流式细胞术检测CAR-T细胞表面激活标志物CD69的表达水平;采用流式细胞术和荧光素酶化学发光法检测CAR-T细胞在不同效靶比(1∶1、1∶2、1∶4)时对Raji-luc、RPMI-GFP细胞的杀伤效率;采用ELISA法检测CAR-T细胞杀伤Raji-luc或RPMI-GFP后上清中干扰素γ(IFN-γ)水平;采用流式细胞术检测CAR-T细胞表面耗竭性T细胞生物标志PD-1的表达水平。结果CD38 CAR、PTPN2-shRNA1 CD38 CAR和PTPN2-shRNA2 CD38 CAR逆病毒载体的滴度均大于1×107 copies/ml,转导T细胞后,CD38 CAR-T、shRNA1-CD38 CAR-T和shRNA2-CD38 CAR-T的转导效率(CAR阳性率)分别为45.4%、60.6%、48.6%。与CD38 CAR-T组相比,2组PTPN2-shRNA CD38 CAR-T细胞PTPN2 mRNA的表达量显著降低(P<0.01),在2种CD38阳性的肿瘤细胞的刺激下,3组CART细胞的CD69表达明显上升,增殖加快,CAR-T细胞构建成功。2组PTPN2-shRNA CD38 CAR-T细胞杀伤效率更高(P均<0.01);γ干扰素的释放水平更高(P均<0.01);表面PD-1的表达水平更低(P<0.01)。结论本研究成功构建一种shRNA靶向抑制PTPN2的抗CD38 CAR-T细胞,该细胞能够有效地杀伤CD38阳性的多发性骨髓瘤细胞,且与抗CD38 CAR-T细胞相比,抗肿瘤能力更强,改善了CAR-T细胞的耗竭情况。

辽西半干旱地区林业育苗主要病虫害的防治

针对辽西北半干旱地区林业育苗主要病虫害的的发生情况,分析了林业育苗主要病虫害发生的主要症状,在进行综合考量分析的基础上,提出了辽西北半干旱地区林业育苗主要病虫害的防治技术。

辽西地区盛果期苹果梨优质丰产栽培技术

苹果梨是辽西地区凌河老哈河上游区域的主要经济林树种,栽培面积较大。文章从施肥、浇水、防控晚霜冻害、授粉疏果、病虫害防治、休眠期修剪等环节总结了苹果梨的优质丰产栽培关键技术。

辽西北半干旱地区枣树树形改造的关键技术

针对辽西地区朝阳市枣树树形不良的实际情况,采取了树形改造措施,改造后树形光照良好、树势平衡、产量质量提升。文章介绍了枣树树形改造的基本原则与措施、改造应用的主要树形、改造的关键点。

电力配网工程建设中的造价合理化控制研究

在电力配网工程的建设过程中,首先应该考虑到的就是工程造价合理化,对工程的造价进行控制,是电力配网工程建设过程中最重要的环节。对工程造价进行合理化的控制,就是要求采用质量好且价格合理的设备、创新的施工手段,运用国际或国内最先进的技术,加大对施工过程的管理,在提高经济效益的同时降低成本。本文就电力配网工程建设中的造价合理化控制进行了研究,旨在促进促进电力配网工程的蓬勃发展。

梨品种南苹优系在辽宁凌源的表现

经6年观察试验,南苹优系梨品种在辽宁省凌源市生长结果良好,商品价值明显高于当地主栽品种安梨和秋白梨。总结了该品种适宜当地条件的早期丰产栽培技术。

CD38基因敲除的淋巴瘤细胞株构建

目的:构建Luc^(+)CD38^(-)的Raji细胞株,并进行功能的初步验证,为后期探索淋巴瘤细胞CD38位点免疫逃逸现象奠定基础。方法:通过CRISPR-cas9技术和Piggy Bac(PB)转座子系统,对Luc^(+)Raji细胞的CD38基因位点进行敲除,构建Luc^(+)CD38^(-)Raji细胞株,使用流式细胞术检测与Luc^(+)CD38^(-)Raji细胞株以1:1的比例共孵育CD19 CAR-T和CD38 CAR-T以及未转导的原始T细胞表面活化因子CD69的表达水平,荧光素酶检测法检测上述几组效应细胞对Luc^(+)CD38^(-)Raji细胞株的杀伤效率。结果:成功构建Luc^(+)CD38^(-)Raji细胞,激活实验结果显示,CD19 CAR-T与CD38 CAR-T均可以被Luc^(+)Raji细胞激活。而Luc^(+)CD38^(-)Raji19号单克隆细胞由于缺失CD38的表达,仅能够激活CD19 CAR-T。杀伤实验结果显示,两种CAR-T细胞均能够对Luc^(+)Raji细胞进行杀伤,而CD38 CAR-T对Luc^(+)CD38^(-)Raji19号单克隆细胞的杀伤效率与原始的T细胞相似。结论:成功构建了Luc^(+)CD38^(-)Raji细胞株,为后期探索淋巴瘤CD38位点免疫逃逸现象奠定基础。