牙龈素提取物对口腔鳞癌细胞HN6生物学特性的影响

目的·观察牙龈素提取物对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞HN6生物学特性的影响。方法·选取人OSCC细胞系HN6,加入牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)牙龈素提取物进行培养。根据牙龈素提取物的蛋白浓度不同分为对照组(control组),及牙龈素提取物蛋白浓度3.125μg/mL组、6.25μg/mL组、12.5μg/mL组、25μg/mL组、50μg/mL组和100μg/mL组,培养24、48 h后,采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)检测牙龈素提取物对HN6细胞增殖活性的影响。后续其他实验,分为control组、25μg/mL组和50μg/mL组进行。通过流式细胞术检测牙龈素提取物对细胞周期的影响,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,实时荧光定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)和Western blotting检测细胞E-cadherin和N-cadherin蛋白和基因的表达。结果·在牙龈素提取物刺激HN6细胞24 h时,相比较control组,牙龈素提取物蛋白浓度25μg/mL组(P=0.025),50μg/mL组(P=0.000)和100μg/mL组(P=0.049)的HN6细胞增殖活性显著增加;当刺激48 h时,6.25μg/mL组(P=0.024)、12.5μg/mL组(P=0.006)、25μg/mL组(P=0.000)、50μg/mL组(P=0.000)和100μg/mL组(P=0.000)均较control组HN6细胞增殖活性有显著增加。细胞周期检测结果显示,与control组相比,经牙龈素提取物刺激24 h,HN6细胞G1期比例下降,S+G2期比例显著性上升(25μg/mL组:P=0.024;50μg/mL组:P=0.001)。细胞迁移实验结果显示,与control组相比,随着牙龈素提取物浓度升高,划痕愈合的百分比显著增加(P=0.001)。细胞Transwell侵袭实验结果显示,与control组相比,随着牙龈素提取物浓度升高,细胞穿过小室底部的数量显著性增加。RT-PCR和Western blotting实验结果显示,与control组相比,随着牙龈素提取物浓度增加,HN6细胞中N-cadherin mRNA和蛋白表达量显著性增加,E-cadherin mRNA和蛋白表达量显著性减少。结论·牙龈素提取物对OSCC细胞HN6的增殖、迁移和侵袭有促进作用。

牙周病学专科进修医师培养模式的探索与思考

目的了解牙周医师专科进修学习现状,总结改进培养模式,提高牙周进修培养质量。方法对2010年1月至2022年12月在上海交通大学医学院附属第九人民医院牙周科完成进修学习的168名医师进行问卷调查,并对进修学习的效果、内容需求、带教形式等问题的反馈进行分析。结果收到168份有效问卷,参与调查的医师对上海第九人民医院牙周科的进修学习满意度普遍较高,112名医师非常满意,占66.7%;进修学习内容需求最高的是牙周病治疗计划制订,对带教形式满意度最高的是手术治疗操作指导。结论调查结果表明进修学习是一种非常有效的医师继续教育方式,能够提高医师自身及本地区的牙周治疗水平。

伴阿尔茨海默病牙周炎患者血清Th17/Treg相关细胞因子水平变化研究

目的·观察血清Th17/Treg水平的变化对阿尔茨海默病与牙周炎的影响。方法·纳入2020年6月—2021年12月就诊于上海交通大学医学院附属精神卫生中心老年科共18位伴阿尔茨海默病的牙周炎患者与同时期就诊于上海交通大学医学院附属第九人民医院共15位认知功能正常的牙周炎患者,检查并记录患者探诊深度(probing depth,PD)、附着丧失(clinical attachment loss,CAL)及探诊出血位点比例(percentage of bleeding on probing,BOP%)。使用酶联免疫吸附法检测血清中Th17相关细胞因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-17、IL-22及Treg相关细胞因子IL-4、IL-10、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)水平。采用样本独立t检验比较2组牙周指标与细胞因子水平的差异,P<0.05表示差异具有统计学意义。结果·伴阿尔茨海默病的牙周炎患者PD(P=0.021)、CAL(P=0.023)及BOP%(P=0.018)均显著高于认知功能正常的牙周炎患者。伴阿尔茨海默病的牙周炎患者血清IL-6(P=0.010)、IL-17(P=0.022)、IL-22(P=0.031)水平均显著高于认知功能正常的牙周炎患者;同时,组中IL-4(P=0.002)及IL-10(P=0.049)、TGF-β(P=0.006)水平相较于认知功能正常的牙周炎患者显著降低。结论·伴阿尔茨海默病牙周炎患者的牙周状况比认知功能正常的牙周炎患者差,Th17相关促炎细胞因子升高,而Treg相关抗炎因子降低,说明牙周炎可能通过介导Th17/Treg相关的慢性炎症反应影响阿尔茨海默病的发生发展。

釉基质蛋白联合骨髓基质细胞促进牙周再生

目的探讨以骨髓基质细胞(BMSCs)为种子细胞,以釉基质蛋白(EMPs)为生长因子,利用组织工程技术修复牙周骨缺损的可行性。方法选取2只健康雄性恒河猴,体外分离髂骨BMSCs并传代培养,第3代细胞与Bio-oss胶原复合。动物双侧上、下后牙区,分别制备人工水平型牙周骨缺损模型,分为空白对照组、单纯材料组、细胞/材料组和细胞/材料/EMPs组,8周时取材进行组织学和Micro-CT观察分析。结果空白对照组为纤维结缔组织形成;单纯材料组可见牙槽骨新生;细胞/材料组可见牙周再生,但新生的牙骨质较少且不规则;细胞/材料/EMPs组新生牙槽骨较多,有规则且连续的牙骨质形成。结论以BMSCs为种子细胞联合EMPs诱导,能显著促进牙周组织再生。

氯化钴化学模拟低氧对牙周膜成纤维细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究低氧对人牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament cells,PDLCs)的增殖及低氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)和Caspase-3表达的影响。方法:采用二氯化钴(cobalt chloride,CoCl2)模拟低氧作用于人PDLCs,用MTT法检测人PDLCs的活力,并通过荧光定量PCR和Western印迹观察低氧处理后人PDLCs中HIF-1α和Caspase-3的表达变化。采用SAS6.12软件包对所得数据进行统计学分析。结果:低氧使人PDLCs存活率降低,并呈浓度和时间依赖;低氧促进HIF-1α蛋白的表达,而HIF-1α mRNA的水平未见影响(P>0.05);低氧使Caspase-3 mRNA及Caspase-3蛋白表达均上调。结论:低氧抑制人PDLCs增殖,这与低氧诱导HIF-1α表达,促进细胞凋亡有关。提示低氧在牙周炎发生和发展中起一定调控作用。

釉基质蛋白对人骨髓基质细胞生长和黏附的影响

目的探讨釉基质蛋白(enamelmatrixprotein,EMPs)对人骨髓基质细胞黏附、伸展和增殖的影响。方法用全骨髓培养法获得人骨髓基质细胞,各实验组中EMPs的浓度分别为50、100、200、300μg/ml,以不加EMPs作为空白对照组。细胞计数法测定细胞的黏附能力;通过计数高倍视野中伸展的细胞数,计算骨髓基质细胞在1、3、5和7h的伸展率;MTT法检测各组细胞的增殖活性。采用SAS6.12软件对所得数据进行单因素方差分析。结果体外培养的人骨髓基质细胞生长良好;各实验组间及与对照组比较,对细胞的黏附性的影响无统计学差异;各组细胞的伸展率亦无显著性差异;EMPs对人骨髓基质细胞有较明显的促增殖作用,其中200μg/ml浓度组EMPs对骨髓基质细胞的促增殖作用显著(P<0.05)。结论EMPs对体外培养的人骨髓基质细胞的黏附性和伸展率无影响,但可明显促进其增殖。

Bio-oss胶原与骨髓基质细胞相容性的实验研究

目的:探讨Bio-oss胶原与骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)的生物相容性,为用组织工程技术修复牙周缺损提供理论依据。方法:体外培养恒河猴BMSCs,将BMSCs与Bio-oss胶原复合进行体外培养。用激光扫描共聚焦显微镜检测细胞与材料的黏附,MTT法检测细胞的增殖,并行碱性磷酸酶(ALP)活性测定。采用SAS6.12软件包对所得数据进行t检验。结果:BMSCs能黏附于Bio-oss胶原上;MTT结果显示,在2d、5d时,对照组和实验组间无显著性差异(P>0.05),8d时,两组间有显著性差异(P<0.05);在各时间点,对照组和实验组间ALP活性均无显著性差异(P>0.05)。结论:Bio-oss胶原与恒河猴BMSCs有良好的生物相容性,可作为组织工程材料应用于牙周骨缺损的修复。

实验性牙周炎动物模型的研究进展

牙周炎动物模型在牙周病病因学、病理学以及防治方面的研究中起着十分重要的作用。本文从实验性牙周炎动物模型建立的机制、方法、实验动物的选择等方面,综述了实验性牙周炎动物模型的研究进展,以期为牙周炎的深入研究提供参考。

釉基质蛋白对人骨髓基质细胞增殖和矿化的影响

目的:观察釉基质蛋白(enamelmatrix proteins,EMPs)对人骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)细胞周期和碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。方法:体外培养人骨髓基质细胞,以200μg/ml EMPs作用于细胞为实验组,以不加EMPs为对照组。流式细胞仪检测EMPs对BMSCs细胞周期的影响,碱性磷酸酶试剂盒检测ALP的活性。结果:体外培养的人BMSCs生长良好,200μg/ml浓度的EMPs能提高细胞的ALP活性;影响细胞周期变化,EMPs组S期细胞数目较多,为19.48%,而对照组S期细胞数目为9.89%。结论:釉基质蛋白可促进人骨髓基质细胞的分化,影响细胞周期变化。

口腔颌面部肉瘤组织中Survivin和PCNA的表达

目的探讨口腔颌面部肉瘤(OMFS)组织中Survivin和PCNA的表达。方法应用免疫组织化学SP法检测37例OMFS组织,14例口腔良性间叶肿瘤组织和10例口腔正常间叶组织中Survivin及PCNA的表达。结果口腔正常间叶组织及良性间叶肿瘤组织中均无Survivin表达,OMFS中Survivin阳性表达率为81.08%(31/37),且Survivin阳性表达率随肿瘤分化程度的降低而升高(P<0.05),但与患者年龄、性别、肿瘤大小无关。OMFS组织中PCNA表达水平高于良性间叶肿瘤组织和口腔正常间叶组织。Survivin阳性表达的OMFS组织中PCNA标记指数为39.51±14.13,高于表达阴性者的22.52±11.65(t=2.856,P=0.007)。结论Survivin的高表达可能与OMFS的恶性生物学行为有关。

甲硝唑联合地塞米松局部应用治疗急性智齿冠周炎疗效观察

目的 :探讨甲硝唑联合地塞米松局部应用治疗急性智齿冠周炎的临床效果。方法 :96例急性智齿冠周炎随机分为治疗组和对照组。治疗组 48例采用 3%双氧水和 0 9%生理盐水冲洗盲袋后 ,置入适量的甲硝唑和地塞米松粉剂。对照组 48例采用常规治疗。第 4天进行临床效果评价。结果 :治疗组与对照组比较 ,治疗组有效率为 95 83%,对照组有效率为 79 17%,经 χ2 检验 ,P <0 0 5 ,两组间有显著性差异。结论 :甲硝唑联合地塞米松局部应用治疗急性智齿冠周炎可有效控制症状 ,疗效较好。

口腔颌面部肉瘤中Survivin表达及其与细胞凋亡关系的研究

目的:探讨口腔颌面部肉瘤(oromaxillofacial sarcoma,OMFS)中Survivin蛋白表达对肿瘤细胞凋亡的影响。方法:应用免疫组织化学技术和DNA原位末端标记(TUNEL)法检测37例OMFS组织、14例口腔良性间叶组织肿瘤中Survivin蛋白的表达及细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)。结果:37例OMFS中30例有Survivin蛋白阳性表达,阳性率为81.08%;在口腔良性间叶组织肿瘤中未见其表达,2组间差异有显著性(P<0.05)。OMFS组AI显著低于良性肿瘤组AI;而且Survivin蛋白阳性表达组AI显著低于Survivin蛋白阴性组AI。结论:Survivin可能通过抑制细胞凋亡,促使肿瘤增殖。

慢性牙周炎患者种植体3年存活情况分析

目的·观察慢性牙周炎患者行种植修复后中短期内的种植体存活情况。方法·收集2011年8月—2013年8月接受种植修复的牙周炎患者54例(133枚种植体),观察植入后存活状况,对不同病变程度牙周炎患者发生种植体周围病变的情况进行比较分析。结果·种植体3年存活率为97.74%,不同程度牙周炎间种植体存活率的差异无统计学意义(P=0.452),重度牙周炎患者的种植体周袋探诊深度(PPD)和改良菌斑指数(m PLI)均显著高于轻、中度牙周炎患者。在未定期接受牙周支持治疗的患者中,重度牙周炎的种植体周围炎患病率显著高于轻、中度牙周炎(P=0.009);在吸烟的患者中,重度牙周炎的种植体周围炎患病率显著高于轻、中度牙周炎(P=0.016)。结论·慢性牙周炎患者行种植修复可获得较好的疗效,积极控制菌斑、定期行牙周支持治疗及戒烟可降低种植体周围炎的患病率。

基础治疗对慢性牙周炎临床疗效和龈下牙周致病菌的影响

目的:评价牙周基础治疗对慢性牙周炎临床疗效及龈下牙周致病菌的影响。方法:纳入慢性牙周炎患者120例,在牙周基础治疗前和治疗后1个月时检查牙周探诊深度(probing depth,PD)、附着丧失(attachment loss,AL)、菌斑指数(plaque index,PLI)和牙龈指数(gingival index,GI)。采用实时荧光定量聚合酶链反应法(real-timePCR)检测基础治疗前和治疗后6周时龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌(P.g)和伴放线放线杆菌(A.a)比例的变化。采用SAS6.12软件包对所得数据进行t检验。结果:各项指数在治疗前、后比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后P.g占总菌的比例与基线相比有显著性差异(P<0.05),治疗后A.a占总菌的比例与基线相比,无显著差异(P>0.05)。结论:基础治疗可以有效治疗慢性牙周炎,并能降低致病菌P.g的比例。

“益肾清火”方对大鼠牙周炎症和免疫功能的影响

目的观察中药“益肾清火”方对大鼠牙周炎症和免疫功能的影响。方法选择12个月龄SD大鼠,分为A、B、C、D共4组。A组为空白对照组,B组为牙周炎造模组,C组为造模后灌服中药高剂量组,D组为造模后灌服中药等效剂量组。牙周炎造模成功后,A、B组动物灌喂生理盐水,C、D组动物灌喂中药3个月。分别采用脱钙骨切片、流式细胞术及ELISA法测定用药前后动物牙周组织、外周血中T细胞的分类及比值、IL-2和IL-1β水平的变化,并采用SAS6.04软件包对数据进行单因素方差分析。结果牙周炎大鼠灌服“益肾清火”方3个月后,与B组相比,C、D组的牙周组织炎症明显改善;各组外周血中CD4+T/CD8+T的比值分别为3.55±0.94、2.42±0.75、3.23±1.14和3.29±0.83,B组比其余3组低(P<0.05);IL-2与IL-1β分别为(36.03±2.63/179.04±17.29)pg/ml、(25.18±3.08/306.09±13.38)pg/ml、(38.44±2.58/176.33±45.38)pg/ml和(36.81±2.45/182.13±43.97)pg/ml。与其余3组相比,B组IL-2水平显著下降,IL-1β显著升高(P<0.01),但以上指标在两用药组之间无显著差别(P>0.05)。结论中药“益肾清火”方能改善实验性牙周炎动物的牙周炎症,对动物机体免疫有一定的调节作用。

低氧对牙周膜成纤维细胞增殖和成骨分化的影响

目的:观察低氧对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament cells,PDLCs)增殖与成骨分化的影响。方法:体外培养鉴定人牙周膜成纤维细胞,分别用浓度为0、100、200、400μmol/L的CoCl2作用于细胞,采用MTT法观察CoCl2对PDLCs增殖的影响,运用实时定量PCR和Western免疫印迹技术检测CoCl2模拟低氧对PDLCs成骨分化的影响。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:免疫组化染色结果证实,培养细胞为牙周膜成纤维细胞。200μmol/L及400μmol/L的CoCl2均能抑制PDLCs的增殖及碱性磷酸酶、RUNX2、Ⅰ型胶原的表达,并呈剂量依赖性。结论:氯化钴模拟的低氧环境对PDLCs增殖及成骨分化具有抑制作用。

重组全长人釉原蛋白对人成纤维细胞黏附、增殖、迁移的影响

目的：比较重组25kDa全长人釉原蛋白（recombinanthumanamelogenin，rhAm）和提取的猪釉基质蛋白（enamelmatrixproteins，EMPs）对人牙周膜成纤维细胞（humanperiodontalligamentfibroblasts．HPDLF）和人包皮成纤维细胞（foreskinfibroblasts，HFF）生物学特性的影响，初步探讨rhAm促进牙周组织再生的可能机制。方法：选择BL21／pET28a—His—SUMO—rhAm表达系统，在适宜的条件下，经诱导表达和酶切纯化．得到25kDa全长rhAm．采用SDS—PAGE和Western印迹鉴定，乙酸法提纯EMPs。体外培养HPDLF和HFF．采用不同浓度的rhAm和EMPs分别刺激HPDLF、HFF，观察并比较2种蛋白对细胞黏附、增殖和迁移能力的影响。采用SAS5．0软件包对数据进行统计学分析。结果：10—20μg／mLrhAm能显著促进人牙周膜成纤维细胞和人包皮成纤维细胞的黏附、增殖和迁移（P〈0．05），其作用效果与200μg／mLEMPs相似（P〉0．05）。结论：25kDarhAm和EMPs对成纤维细胞具有相似的生物学作用。rhAm和EMPs可通过增强牙周膜成纤维细胞的生物学活性．从而促进牙周组织再生。