宋思扬:精“移”求精

纳米级精度当站在距墙壁三五米左右的位置,想要手持激光笔瞄准落在墙上的一只小飞虫时,大家会发现,虽然距离并不远,但只凭借人手的控制,要让光点精准地落在小飞虫身上,是几乎不可能的。那如果再要求光点随着小飞虫的快速移动而移动呢?读博期间,我和团队一起研发了一个水杯大小的器件——高性能压电驱动器。所谓驱动器就是一个能按要求驱动物体产生运动的器件,我们日常生活的方方面面都离不开驱动器,大到工业机器人,小到智能家居中自动升降的窗帘等。

旋毛虫排泄分泌抗原p49基因的克隆

应用ＤＮＡ重组技术将编码旋毛虫肌幼虫４９ＫＤａ抗原的基因克隆于大肠杆菌中．设计特异的ＰＣＲ引物，用ＰＴ－ＰＣＲ技术直接从旋毛虫肌幼虫总ＲＮＡ中反转录并扩增出约１．１Ｋｂ的靶ＤＮＡ．用ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ酶解后将其克隆到质粒载体ｐＵＣ１９中，用Ｘ－ｇａｌ培养基筛选重组子．该重组子经相同的核酸内切酶水解获得约２．７Ｋｂ和１．１Ｋｂ两个片段，分别与ｐＵＣ１９和目的基因的大小相同，目的基因经序列分析并与文献报道的序列比较发现具有９７．８％的同源性．

双抗体夹心ELISA法检测养殖对虾病毒的研究

用纯化的长毛对虾球状病毒（PPSV）和日本对虾中肠腺坏死杆状病毒（BMNV）制备新西兰兔抗BMNV和抗PPSV抗血清及Balb／c小鼠抗BMNV和抗PPSV抗血清，建立检测PSV和BMNV的双抗体夹心ELISA检测法，结果表明，双抗体夹心ELISA法具有较高的灵敏度，可以从100μl待测组织匀浆液中检测到50ng的PPSV蛋白，以及100ng的BMNV蛋白。不同病毒抗血清无交叉反应性，用该ELISA技术检测养殖对虾和多种采自养殖虾池及其附近的近海岸生物，发现相当比例的外观正常的对虾和近海岸生物已呈阳性反应，电镜观察结果证实了检测的特异性及可靠性。

旋毛虫p49抗原相关抗体的快速检测

目的 建立旋毛虫病的快速检测技术。方法 基因工程抗原包被有色乳胶颗粒，抗抗体包被磁性颗粒，在抗体存在下形成抗原－ 乳胶－ 抗体－ 抗抗体－ 磁性颗粒的复合场，在磁场作用下沉淀下来，从而达到快速检测旋毛虫相关抗体的目的。结果 １９ 份人工感染鼠血清、５ 份人工感染猪血清、３ 份旋毛虫病猪血清、４ 份病人血清均呈阳性反应，而对照血清均为阴性反应；该方法在鼠感染旋毛虫后第五天可测出ＩｇＭ 抗体，第九天可测出ＩｇＧ抗体。结论 本检测技术简便易行，不需专用设备，可望成为一种快速诊断旋毛虫病的有效方法。

一个与双孢蘑菇子实体品质相关的DNA片段的克隆

利用 2 0个十碱基随机引物 ,在基因组水平上对双孢蘑菇 (Agaricusbisporus)的优质低产型 (G型 )及低质高产型 (H型 )菌株进行了RAPD差异显示 ,获得一个与双孢蘑菇子实体品质相关的大小约为 2 0 0 0bp的差异DNA片段 ,将其克隆 ,并应用点杂交及RFLP技术对其区分两类菌株的有效性进行了检验。这为进一步建立特异性探针或PCR引物 。

沙门氏菌LPS相关抗体的快速检测

建立两种颗粒——乳胶颗粒及磁性颗粒快速检测沙门氏菌ＬＰＳ相关抗体（ＩｇＭ或ＩｇＧ的方法。乳胶颗粒用ＬＰＳ包被，磁性颗粒用羊抗人ＩｇＭ或ＩｇＧ包被，将两种颗粒及血清标本置于酶标条的微孔中，室温振荡３０ｍｉｎ后置于磁铁上使磁性颗粒沉淀。上清液在４００ｎｍ的酶标仪上读取浊度以判定反应结果。该方法比乳胶凝集试验的灵敏度高。其结果与用ＥＬＩＳＡ方法检测的结果一致，但步骤少，时间短，操作更简便。是一种快速诊断沙门氏菌感染的有效方法。

产免疫调节活性多糖海洋放线菌的筛选

用硫酸苯酚法和实验动物模型检测分离于厦门海区潮间带的 996株海洋放线菌胞外多糖产量和体内外免疫增强活性 .结果表明 ,3 3%的海洋放线菌粗多糖产量大于 3g/dm3;在粗多糖产量高的海洋放线菌中有 3株菌株的胞外多糖在体内外均具有较好的免疫增强活性 ,其中链霉菌 (Streptomycessp .) 2 30 5菌株的胞外多糖具有较高的非特异性、细胞及体液免疫增强活性 .研究结果表明海洋放线菌胞外多糖是免疫调节剂开发的重要资源 .

CytosporoneB的分离纯化,结构鉴定及其生物活性的初步研究

从福建九龙江口红树林自然保护区桐花树树皮中分离出内生真菌HTF3菌株,用柱层析和正相HPLC的方法从该菌株的发酵液中纯化出一单体化合物,经1D- 、2D -NMR和ESI -MS等方法鉴定该化合物为CytosporoneB.活性检测发现它具有较强的抗肿瘤活性和较广谱的抗真菌活性,本文报道这类物质有抗肿瘤活性,作用机理值得进一步深入研究.

从深海沉积物中筛选具有抗菌、抗肿瘤活性的海洋真菌

从西太平洋近赤道区采集到的18个深海沉积物样品中分离到83株海洋真菌,采用滤纸片琼脂扩散法和MTT法分别对其发酵液乙酸乙酯抽提物的抗菌、抗肿瘤活性进行筛选.结果显示,有37株菌株对至少一种指示菌有抑制作用;有29株菌株对KB或Raji肿瘤细胞具有显著的抑制活性,分别占总供测菌株的44.6%和34.9%.在抗肿瘤活性菌株中,WP-M-1、DY-G-2、DY-C-2、WP-K-3和WP-Q-2等5株菌具有很高的活性,其发酵液乙酸乙酯抽提物对Raji细胞的IC50分别为5.000、1.064、2.796、1.920、0.520μg/mL.研究结果表明,海洋沉积物来源的真菌中蕴藏着丰富的抗菌及抗肿瘤活性代谢产物产生菌,是开发抗菌和抗肿瘤药物的宝贵资源.

PCR方法检测食品中的转基因成分35S和NOS的研究

根据转基因农作物中最常用的花椰菜叶病毒启动子(CaMV35S)和根癌农杆菌终止子(NOS)的序列,设计并合成了两对不同的引物和相对应的两种荧光双链探针(FDCP),分别建立了常规PCR、应用FDCP的新型实时荧光PCR检测转基因成分35S启动子和NOS终止子的方法。利用该套方法对冷冻马铃薯条、大豆、冷冻玉米棒、甜椒、番茄等实物样品进行了检测,发现11份样品中有5份检出35S启动子、NOS终止子,6份样品结果为阴性。结果表明我们建立的两种PCR方法均能有效检测出35S和NOS片段,其中常规PCR方法具有灵敏度高、特异性好的特点;应用FDCP的新型实时荧光PCR方法则更为简便、快速、准确,有很好的应用前景和研究价值。

褐牙鲆耐热性状相关的微卫星分子标记筛选

采用微卫星分子标记技术分析褐牙鲆耐热相关特性,为耐高温褐牙鲆的分子辅助育种提供合适的分子标记.褐牙鲆经过热处理,将其区分为耐热组与不耐热组,用于实验分析.采用酚-氯仿抽提法抽提褐牙鲆肌肉组织的DNA,进行微卫星引物PCR(SSR-PCR)扩增,所用引物为已知的20个褐牙鲆微卫星位点的侧翼保守序列.对PCR扩增出的差异条带进行个体统计,最后进行微卫星位点与耐热性状的相关性分析.结果表明,有6个微卫星位点的某等位基因片段与褐牙鲆耐热性状存在一定的正相关性,其中位点Po13(AB046746)跟耐热性有极显著的正相关性,相关系数为0.466;有3个微卫星位点的某等位基因片段与耐热性存在负相关性,其中位点Po42(AB046754)与其有极显著的负相关性,相关系数为-0.408.微卫星位点Po13与Po42所扩增出的等位基因片段可作为分子标记指导耐热褐牙鲆的辅助育种.

应用PCR-ELISA技术检测转基因产品的研究

建立并优化了转基因大豆与玉米的DNA提取方法,针对CaMV35S启动子和T-NOS终止子的序列特点设计特异性引物与探针,应用PCR-ELISA检测技术,建立了转基因大豆与玉米中常用外源基因的快速检测体系,并应用于进出境产品的转基因检测实际工作中。结果表明,建立的PCR-ELISA法具有操作简便、灵敏特异、结果准确的优点,可对转基因大豆、玉米及其它转基因产品进行定性和定量检测。

海洋细菌1202菌株产胞外多糖的适宜条件

应用响应面法(ResponseSurfaceMethod,RSM)对海洋细菌1202菌株胞外多糖发酵培养基进行优化.结果表明,适宜的发酵培养基组成为:蔗糖4%,酵母膏0.05%,玉米浆1.5%,CaCO30.15%,KH2PO40.08%,MgSO4·7H2O0.05%,FeSO4·7H2O0.01%,NaCl0.1%,pH7.5.在装液量为50mL(500mL三角瓶),接种量5%时,于28℃摇瓶培养7d,胞外多糖的产量可达到8.3mg/mL,转化率为20.75%.

透明颤菌血红蛋白基因在金色链霉菌中的克隆与表达

分别用质粒pJJ6 99与pUC1 9(vhb) ,pIJ70 2与pBR3 2 2 (vhb) ,构建大肠杆菌 链霉菌穿梭质粒 ,将透明颤菌血红蛋白基因转入金色链霉菌。在低溶解氧浓度下 ,透明颤菌血红蛋白的表达 ,可提高金色链霉菌氧的利用效率 ,产物合成比原始菌株提高 40 %～ 6 0 %。在局部低氧的环境中 ,采用四环素抗性基因启动子带动血红蛋白基因表达 ,可有效发挥透明颤菌血红蛋白的氧传递效率 。

具有免疫活性多糖海洋细菌菌株的筛选

从厦门海区潮间带的动植物体及底泥分离到的177株海洋细菌中筛选出一株高产胞外多糖的1202菌株.其产生的胞外多糖可显著地促进昆明种小鼠脾淋巴细胞IL 2(白介素 2)的合成,并对小鼠S180肉瘤具有较强的抑制作用.经初步分类鉴定,确定该菌株归属于土壤杆菌属(Agrobacteriumsp.).

用HPLC-MS-MS快速分析和鉴定三尖杉植物内生真菌发酵液中的Brefeldin A

采用HPLC -MS -MS联用技术 ,分析了C56和C65两株具有抗肿瘤活性的三尖杉植物内生真菌发酵液抽提物 ,首次报道了这两株真菌都能产生BrefeldinA(BFA)。采用ESI-MS总离子流跟踪分析HPLC的洗脱液 ,并用低能量的CID -MS -MS(碰撞诱导裂解方式 )进一步确定目标离子峰为BFA分子离子峰 。

双孢蘑菇耐温差异蛋白质组学研究

利用蛋白质组学和荧光定量PCR方法,研究双孢蘑菇(Agaricus bisporusLange(Imbach))02菌株在常温与高温胁迫下的蛋白质表达差异,发现了6个差异蛋白质点,经NCBI数据库比对分析,表明6个差异蛋白质分别为HSP70家族的HSS1热激蛋白、异柠檬酸裂解酶、细胞色素P450单氧化酶及3个未知蛋白质.这些蛋白质在双孢蘑菇受热胁迫下具有保护自身稳定的功能.

RT-RAPD技术分析高温诱导双孢蘑菇相关基因片段

应用RT RAPD技术 ,以 6bp随机引物反转录双孢蘑菇 (Agaricusbisporus) 0 2菌株常温培养和高温诱导菌丝体的总RNA ,10bp随机引物PCR扩增 ,得到几个高温诱导差异片段 ,对OPU13引物的差异片段 0 2U13克隆并测序 ,发现该片段可能编码tRNAVal(密码子GUC)基因 .推测GUC可能是稀有密码子 ,在某些耐温基因中出现频率较高 .识别该稀有密码子的tRNAVal在常温条件下不表达或表达量很少 ,而在高温诱导下引发一定的调控机制促使它们大量的合成 。

红树植物内生真菌的种群动态及生物活性

2003年10月至2004年8月对福建龙海浮宫2种红树植物秋茄、木榄的内生真菌进行连续6次的分离，得到290株内生真菌．研究结果显示，木榄（Bruguiera gymnorrhiza）和秋茄（Kandelia candel）内生真菌数量高峰期分别为4月份和10～R12月份；青霉（Penicillium）、交链孢（Alternaria）、Dothiorella和无孢目是秋茄中的主要优势属；木榄内生真菌主要优势属为头孢霉（Cephalosporium）、交链孢（Alternaria）、青霉（Penicillium）等．不同宿主对内生真菌的季节分布有重要的影响．抗菌测定共筛选得到活性菌株40株，占总菌株数的13．8％；17株内生真菌对KB（人口腔上皮癌）和／或Raji（人B淋巴瘤）细胞具有抑制作用，占总菌株数的5．9％．生物活性菌株分布于青霉、交链孢、拟青霉、无孢目等10个不同的分类单元中，2种宿主植物内生真菌抗菌及抗肿瘤活性均有不同程度的季节差异性．

海洋真菌杀虫活性的初步研究

对采集自浙江舟山海域底泥、福建省九龙江口红树林及福建省云霄县红树林共188株海洋真菌代谢产物的杀小杆线虫(Rhabditissp.)和卤虫(brine shrimp)活性进行初步研究.筛选出#164菌株代谢产物对小杆线虫显示了较好的杀害活性,其LC90小于0.5 mg/mL.#122菌株代谢产物对卤虫显示了较强的麻痹效应.#305菌株代谢产物对卤虫的LC50仅为75μg/mL.此外,对188株海洋真菌代谢产物的乙酰胆碱酯酶抑制活性进行研究,筛选出#229菌株代谢产物和#170菌株代谢产物具有较强的乙酰胆碱酯酶抑制活性,IC50分别为30μg/mL和25μg/mL,这些活性菌株具有产生杀线虫剂或乙酰胆碱酯酶抑制剂的特性.