嗜血支原体研究进展

嗜血支原体(原附红细胞体)属于支原体目支原体科支原体属。嗜血支原体寄生在包括人类在内的多种哺乳动物的红细胞表面或内部,导致感染宿主出现从无任何特征性表征到诱发潜在的危及生命的溶血性贫血等症状。国内外多个地区报道了嗜血支原体的传播与感染情况,表明嗜血支原体是世界范围内常见和重要的传染原,应该进行进一步的研究,以更好地了解其对养殖动物和野生动物的影响,以及对人类的致病性情况。该文从动物感染后的临床特征、流行病学特征、检测方法、基因组学特征和治疗方案等方面综述对嗜血支原体的研究进展,为今后嗜血支原体综合防控提供参考。

学龄前儿童24 h活动行为特征及其与执行功能的关系

目的探讨学龄前儿童24 h活动行为特征及其与执行功能的关系。方法以珠海市555名学龄前儿童为研究对象,应用客观测量法,采用加速度计测量身体活动水平,采用计算机化行为测试评估执行功能。对儿童24 h活动行为特征进行描述,使用SPSS 26.0软件进行数据分析,采用独立样本t检验比较不同性别24 h活动行为差异,运用多元线性回归分析探讨学龄前儿童活动行为达标情况对执行功能的影响。结果依据《学龄前儿童(3~6岁)运动指南》对儿童每日中高强度身体活动、静坐屏幕时间和睡眠时长的推荐量,研究对象中高强度身体活动达标(≥60 min/d)率为33.9%(188/555)、静坐屏幕时间达标(≤1 h/d)率为43.4%(241/555)、睡眠时长达标(10~13 h/d)率为83.4%(463/555),仅13.3%(74/555)儿童三项均达标。工作记忆测验正确得分为(60.6±20.3)分,抑制控制测验反应时间为(695.1±135.8)ms。学龄前男性儿童中高强度身体活动(≥60 min/d)正向预测工作记忆(β=0.121,P=0.037),静坐屏幕时间(≤1 h/d)负向预测抑制控制(β=-0.122,P=0.036)。结论学龄前儿童每日中高强度身体活动和静坐屏幕时间达标率较低,且前者与学龄前男性儿童工作记忆呈正相关,后者与学龄前男性儿童抑制控制呈负相关。

检测犬弓形虫SAG3抗体间接ELISA方法的建立

目的以弓形虫重组SAG3蛋白为抗原,建立一种检测犬弓形虫抗体的间接ELISA方法。方法采用棋盘滴定法确定抗原的包被浓度和阳性血清稀释度,再对该方法的封闭剂以及封闭时间、犬弓形虫阳性血清孵育时间、二抗稀释度以及加入显色液孵育时间等各项条件进行优化;通过对弓形虫感染犬血清及犬心丝虫、等孢球虫、蛔虫及巴贝斯虫感染血清的检测评价方法的敏感性和特异性。结果该方法最佳优化条件分别为:抗原包被浓度0.82μg/孔,封闭剂为含10%胎牛血清的PBST,被检血清稀释度1∶20;兔抗犬酶标二抗稀释度1∶8 000。优化的ELISA敏感性为1∶1 280,犬心丝虫、等孢球虫、蛔虫及巴贝斯虫感染血清均未发生交叉阳性反应;批间、批内重复性试验的变异系数均<15%。结论建立的ELISA方法特异性较强,敏感性高,批内、批间重复性较好,可用于犬弓形虫感染的检测。

检测犬弓形虫感染双抗体夹心ELISA方法的建立

目的用42#抗弓形虫SAG3单抗为捕获抗体、29#抗弓形虫SAG3单抗作为检测抗体建立检测犬弓形虫感染的双抗体夹心ELISA方法。方法利用HRP标记检测29#抗弓形虫SAG3单抗;采用棋盘滴定法确定捕获抗体42#抗弓形虫SAG3单抗的包被浓度和弓形虫阳性血清稀释度;对封闭剂、检测抗体的工作浓度等条件进行优化,并进行敏感性、特异性、重复性以及稳定性测定。用所建立的双抗体夹心ELISA方法对76份犬待检血清进行检测,计算阳性率。结果最佳优化条件为捕获抗体包被浓度为1∶800稀释(0.34μg/孔),弓形虫阳性血清稀释度为1∶12,封闭剂为10%FBS溶液,最佳封闭时间为2h,参考阳性血清最佳作用时间为2h,检测抗体稀释度1∶3 000,TMB底物最佳显色时间为10min。优化的ELISA敏感性为1∶48;与犬心丝虫阳性血清、犬等孢球虫阳性血清、犬蛔虫阳性血清及犬巴贝斯虫阳性血清之间均无交叉反应;批内、批间重复性试验的CV均<15%;保存于4℃中的包被板稳定性>90d。用该方法检测76份犬血清中的弓形虫抗原,阳性率为5.26%。结论建立的双抗体夹心ELISA方法特异、敏感,重复性好,可用于犬弓形虫感染的早期检测。

禽腺病毒血清4型Fiber-2蛋白在毕赤酵母中的优化表达及其免疫原性分析

为研制禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)亚单位疫苗,本研究对FAdV-4的Fiber-2蛋白在毕赤酵母中的发酵工艺进行了优化。首先根据酵母密码子偏好性优化Fiber-2基因,并且构建了重组真核表达载体pPIC9K-Fiber-2。将该质粒转化至毕赤酵母GS115菌株,经不同质量浓度G418筛选获得高拷贝重组菌。随后在摇瓶中进行诱导发酵时温度、时间和甲醇浓度的优化。用优化后的条件进行发酵表达并将上清液通过镍柱纯化得到了重组的Fiber-2蛋白。最后将蛋白与ISA-201-VG油佐剂混合并免疫21日龄SPF鸡进行免疫保护性试验。结果表明:在毕赤酵母中成功且高效的分泌表达了Fiber-2蛋白,分子量约为60ku,在摇瓶发酵中诱导的最佳甲醇浓度、时间和温度分别为1.0%、72h和30℃。优化后发酵液上清中的总蛋白量约为50mg/L,重组Fiber-2蛋白达到8.7mg/L。SDS-PAGE和Western blot结果表明采用镍柱对蛋白进行纯化可得到条带单一且具有良好免疫原性的重组Fiber-2蛋白。免疫保护性试验显示,由优化后的毕赤酵母表达Fiber-2蛋白制备的亚单位疫苗免疫雏鸡后,可以诱导较高的抗体水平并提供高达100%的超强FAdV-4毒株(GD616)的攻击保护。本研究为进一步采用毕赤酵母表达的重组Fiber-2蛋白制备FAdV-4亚单位疫苗的研发奠定了基础。