硫化氢对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及其机制研究

目的 观察硫化氢（hydrogen sulfide,H2S）对内皮细胞凋亡的影响,并从抗氧化的角度初步探讨其作用机制.方法 以硫氢化钠（sodium hydrosulfide,NaHS）作H2S的供体,人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）经10 μmol/L NaHS预孵育24 h后加入33 mmol/L葡萄糖（高糖）作用48 h,以正常对照组、高糖损伤组和10 μmol/L NaHS预处理组作为对照,DAPI荧光染色观察细胞核形态的变化并检测细胞凋亡,Western Blot检测细胞黄嘌呤氧化酶（XOD）和超氧化物歧化酶（SOD）蛋白质的表达.结果 DAPI染色荧光显微镜观察发现,与正常对照组相比,高糖损伤组HUVECs中出现大量的核呈浓染致密的固缩形态或颗粒状荧光的凋亡细胞,NaHS预处理的HUVECs中细胞核呈浓染致密的固缩形态或颗粒状荧光的细胞数明显减少,大部分细胞染色质呈弥漫均匀的低强度荧光.Western Blot结果显示,33 mmol/L葡萄糖孵育HUVECs 48 h后,与正常对照组相比,SOD蛋白表达降低37.17%,XOD蛋白的表达增加47.06%;10 μmol /L NaHS 预处理组与高糖损伤组相比,HUVECs SOD蛋白的表达增加27.52%,XOD 蛋白表达降低 31.20%.结论 H2S对高糖诱导的HUVECs凋亡具有拮抗作用,并与其抑制高糖引起的细胞内SOD水平的降低、XOD升高有关.

盐酸羟考酮控释片联合加巴喷丁治疗癌性神经病理性疼痛的疗效观察

目的观察盐酸羟考酮控释片（以下简称羟考酮）联合加巴喷丁治疗癌性神经病理性疼痛的临床疗效。方法40例Ⅲ、Ⅳ期恶性肿瘤合并癌性神经病理性疼痛患者，随机分为2组：单药组20例给予羟考酮治疗，联合组20例给予羟考酮联合加巴喷丁治疗。比较2组治疗前后羟考酮的用量、镇痛效果、生活质量和不良反应。结果2组治疗后疼痛均有不同程度的缓解，且联合组优于单药组（P〈0．05）；羟考酮日均用量联合组低于单药组（P〈0．05）；2组患者生活质量均较治疗前有改善，组间差异无统计学意义（P〉0．05）；联合组便秘及恶心呕吐的发生率低于单药组（P〈0．05）。结论盐酸羟考酮控释片联合加巴喷丁能有效控制癌性神经病理性疼痛，减少羟考酮的用量及不良作用，并能提高患者的生活质量。

浅谈提高留学生神经病学教学质量的几点体会

神经病学复杂抽象、难以理解,是医学留学生的一门重要临床医学课程。在承担该课程的全英语教学过程中,从提高授课老师教学能力,改进教学方式等方面,探讨留学生神经病学教学实践,以期对今后留学生的教学工作有所帮助。

间歇性压力刺激通过NO途径改善糖尿病大鼠微血管功能

目的 观察间歇性压力处理对糖尿病大鼠骨骼肌微血管功能的影响.方法 链脲霉素（60 mg/kg）诱导大鼠Ⅰ型糖尿病模型成功后,给予大鼠一侧后肢骨骼肌120 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）的压力,按5 s/15 s的压力/释放模式循环处理30 min/d,持续3周.体视显微镜下分离后肢骨骼肌微动脉,采用微血管离体灌流方法观察微动脉对乙酰胆碱（Ach）引起的舒张反应.应用免疫印迹方法测定微动脉中内皮依赖性的一氧化氮合酶（eNOS）的蛋白表达.结果 与未给予压力处理侧微动脉相比,压力处理使微动脉eNOS的表达增加,同时增强骨骼肌微动脉对Ach引起的舒张反应.结论 骨骼肌间歇性压力处理可以通过增加eNOS表达,改善糖尿病大鼠骨骼肌微血管功能.

外源性硫化氢通过抗氧化应激减轻水浸束缚大鼠胃黏膜损伤

目的观察硫化氢供体硫氢化钠（NaHS）预处理对大鼠水浸束缚所致胃黏膜损伤的影响，并对其机制进行探讨。方法sD大鼠分为正常组、水浸束缚组（WRS组）及NaHS预处理组。NaHS预处理组大鼠腹腔连续注射NaHS（10μmol·kg-1·d-1）7、14、21天后水浸束缚6h。计算大鼠水浸束缚后胃黏膜大体损伤面积，免疫印迹方法检测胃黏膜组织黄嘌呤氧化酶（XOD）和超氧化物歧化酶（SOD）的表达。结果WRS组大鼠胃黏膜损伤面积明显高于正常组；NaHS预处理7、14、21天能够减少水浸束缚引起的胃黏膜损伤面积（P〈0．05）；与WRS组比较，NaHS预处理各组的XOD表达下降（P〈0．05）、SOD表达升高（P〈0．05）。结论NaHS预处理对水浸束缚大鼠胃黏膜损伤具有保护作用，推测其机制是硫化氢通过提高胃黏膜组织SOD活性、减少XOD表达，促进机体清除氧自由基，同时减少氧自由基生成，从而减轻水浸束缚对胃黏膜的损害作用。

NF—κB在模拟缺血／再灌注诱导人离体胃黏膜上皮细胞凋亡中的作用

目的观察核因子KB（NF—κB）在模拟缺血／再灌注诱导人离体胃黏膜上皮细胞凋亡中活性的变化，并进一步阐明其作用。方法采用人胃黏膜上皮细胞株进行体外培养并传代，细胞以缺氧（5％CO2、1％O2、94％N2）＋兀糖KR液模拟缺血、缺氧，复氧、复糖模拟再灌注诱导胃黏膜上皮细胞凋亡，用流式细胞术、免疫组化法、免疫印迹法观察正常对照组、模拟缺血／再灌注损伤组（I—R组）、NF—κB的抑制剂PDTC预处理组（使用10μmol·L^-1PDTC预处删胃黏膜上皮细胞24h）于模拟缺血1h、再灌注6h后细胞凋亡及NF—κB的表达情况。结果①I—R组细胞凋亡率较正常对照组明显增高（P〈0．01），PDTC预处理组细胞凋亡率较I—R组明显下降（P〈0．01）。②正常对照组胃黏膜上皮细胞核内极少有NF—κB表达，I—R组细胞核内NF—κB表达明显增加，PDTC预处理绀NF—κB核转化现象减轻，胞核染色明显减少。③I—R组与正常对照组比较，胃黏膜上皮细胞核NF—κB蛋白表达水平显著增高（P〈0．01）；PDTC预处理组与I—R组比较，NF—κB蛋白表达水平明显降低（P〈0．01）。结论模拟缺血／再灌注能增加人肖黏膜上皮细胞核内NF—κB的表达，NF—κB的激活具有促进细胞凋产的作用；PDTC叮以抑制细胞凋亡，对人胃黏膜上皮细胞模拟缺血／再灌注损伤有保护作用。

ISRIB对Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞的神经保护作用

目的:以β淀粉样蛋白(amyloidβ-protein 1-42,Aβ1-42)诱导的SH-SY5Y细胞为模型,探讨综合应激反应抑制剂(integrated stress response inhibitor,ISRIB)对Aβ1-42诱导的内质网应激和细胞凋亡的影响。方法:SH-SY5Y细胞按不同处理方式分为4组:对照组、Aβ组、ISRIB组、ISRIB+Aβ组。培养48 h后用噻唑蓝比色法检测各组细胞存活率,蛋白免疫印迹试验检测内质网应激相关蛋白的表达,包括葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK)-真核起始因子2α(eukaryotic initiation factor 2α,eIF2α)-活化转录因子4(activation transcription factor 4,ATF4)介导的内质网应激通路,以及下游的CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP),同时也检测了凋亡相关蛋白的表达,包括Bcl-2、Bax、cleaved-caspase-3。结果:与Aβ组比较,ISRIB能显著提高SH-SY5Y细胞的存活率(P <0.01),显著降低p-PERK(P <0.01)、p-eIF2α(P <0.05)、ATF4(P <0.01)和CHOP的表达(P <0.05),提高Bcl-2/Bax表达(P <0.05),降低cleaved-caspase-3表达(P <0.01)。结论:ISRIB能够抑制Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,其机制与抑制ERS造成的eIF2α通路激活及其相关凋亡信号通路有关。

留学生生理学教学体会

随着医学高等教育国际化进程加速,留学生教育已经成为我国当前医学人才培养的重要组成部分。生理学是医学生接触的第一门功能学课程,也是医学基础教育的一门主要课程,存在内容抽象,理论性强,机制复杂,较难被学生理解和掌握的问题,同时也要求教师有较高的英语水平。为了进一步提升教学效果,文章结合生理学的教学特点和教学现状,提出如何在提高留学生生理学教师全英语授课能力同时,从留学生的个人特点、教师的个人魅力、教学方法的设计等方面入手,积极探索改善留学生生理学教学的方式,提高生理学留学生教学质量,同时为留学生生理学教学提供经验。

依达拉奉对MPP^+诱导的PC12细胞氧化应激的保护作用

目的探讨依达拉奉对MPP^+诱导帕金森病(PD)细胞模型细胞线粒体氧化应激的机制。方法以500μmol/L MPP^+诱导大鼠PC12细胞损伤建立PD模型,观察依达拉奉对活性氧(ROS)、脂质过氧化物丙二醛(MDA)、线粒体DNA(mtDNA)拷贝数和ATP产生速率的影响。结果 MPP^+诱导的PD模型可增加PC12细胞ROS,脂质过氧化MDA,抑制mtDNA拷贝数和线粒体呼吸。相反,依达拉奉可改善MPP^+诱导的相关神经毒性。结论依达拉奉对MPP^+致PC12细胞线粒体氧化应激具有保护作用,其机制可能是通过抑制脂质过氧化、恢复线粒体呼吸来实现的。

硫辛酸对初发2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝病患者血清VCAM-1水平的影响

目的博讨2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝病患者血清血管细胞黏附分子-1 ( VCAM-1)水平及硫辛酸干预的影响。方法选取初发2型糖尿病未合并非酒精性脂肪肝病患者(A组)80例,初发2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝病患者(B组)80例,检测2组患者体质指数(BMI)、空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2hPG)、糖化血红蛋白Alc(HbAlc)、空腹胰岛素(FINS)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c),计算稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),ELISA法测定血清VCAM - 1。2组患者均予健康教育及生活方式干预,完成比较观察后,A组患者另行制订降糖方案,B组患者均予硫辛酸每日600 mg静脉输注,疗程为2周,治疗后检测BMI、FPG、2hPG、HbAlc、TG、TC、LDL-c,ELISA法测定血清VCAM - 1,进行对照研究。结果 B组患者血清VCAM-1水平高于A组,差异有统计学意义(P <0.05);硫辛酸干预后B组患者血清VCAM - 1下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论初发2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝病患者血清VCAM- 1水平高于初发2 型糖尿病未合并非酒精性脂肪肝病患者。硫辛酸可降低初发2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝病患者的血清 VCAM - 1 水平。

外源性硫化氢预处理通过减轻氧化应激延缓人脐静脉内皮细胞老化

本文旨在观察硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)供体硫氢化钠(NaHS)预处理对人脐静脉内皮细胞老化的影响及机制。原代人脐静脉内皮细胞株(HUVECs)传代培养到第12代为老年组;自第4代细胞(年轻组)起,给予NaHS孵育到第12代即为NaHS组。细胞衰老β-半乳糖苷酶(SAβ-gal)染色法检测细胞老化程度,DAPI荧光染色法检测细胞凋亡,免疫印迹法测定细胞黄嘌呤氧化酶(XOD)、锰-超氧化物歧化酶(Mn-SOD)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶亚单位蛋白表达,化学比色法检测HUVECs内SOD活性和过氧化氢(H2O2)含量。结果显示,与年轻组相比,老年组内皮细胞SAβ-gal阳性率和凋亡率显著增加(P<0.01),而NaHS预处理能明显减少细胞SAβ-gal阳性率和凋亡率(P<0.01)。与年轻组相比,老年组内皮细胞XOD和NADPH氧化酶亚单位p67phox蛋白表达增加,Mn-SOD蛋白表达减少;NaHS组与老年组相比,XOD和p67phox蛋白表达减少,Mn-SOD蛋白表达增加(P<0.05)。与年轻组相比,老年组SOD活性降低,H2O2含量增加;NaHS组与老年组相比,SOD活性提高,H2O2含量减少(P<0.01)。以上结果提示,NaHS预处理能减轻老化HUVECs氧化应激水平,起到延缓HUVECs老化的作用。

乳酸菌复合系SFC-2发酵液对秸秆饲料的抑菌作用

为揭示乳酸菌发酵液直接吸附生产秸秆饲料的新工艺中,发酵液对秸秆饲料的保鲜作用及其机制,以玉米秸秆为原料,以乳酸菌复合系SFC-2发酵液为处理剂,设不同添加量(0、75、150、375mL/kg),研究吸附后24h内秸秆的理化性质、微生物群动态变化及有氧稳定性。结果表明添加SFC-2发酵液后:1)提高秸秆的营养价值和风味,添加量越大,效果越明显;2)添加75mL/kg时,秸秆的有氧稳定性提高,其余处理有氧稳定性降低;3)添加发酵液可以减少饲料有氧放置过程中粗蛋白的损失;4)变性梯度凝胶电泳(Denaturing gel gradient electrophoresis,DGGE)图谱分析表明,添加发酵液的处理中主导菌群是SFC-2中的Lactobacillus fermentum和L.plantrum,未发现对照中的杂菌条带。由此可见,添加适量SFC-2发酵液可通过有效抑制杂菌的繁殖,提高饲料的有氧稳定性等来实现保鲜作用。

依达拉奉对MPP^+处理的PC12细胞线粒体融合和分裂平衡的保护作用

本文旨在探讨依达拉奉(edaravone, Eda)对帕金森病细胞模型线粒体融合、分裂动态平衡的作用及机制。用500μmol/L1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium, MPP^+)处理PC12细胞建立帕金森病细胞模型,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度Eda对MPP^+处理的PC12细胞存活率的影响,用激光共聚焦显微镜检测线粒体形态,用Western blot检测线粒体融合与分裂相关蛋白OPA1、MFN2、DRP1和Fis1的表达变化。结果显示,预先加入不同浓度的Eda能减轻MPP^+处理的PC12细胞损伤,作用呈一定的量效关系;经MPP^+处理48 h,PC12细胞线粒体出现碎片化,OPA1和MFN2蛋白表达下调,DRP1和Fis1蛋白表达上调,而Eda预处理能逆转PC12细胞的上述变化,但对Fis1的蛋白表达没有影响。以上结果提示,Eda可上调OPA1和MFN2的蛋白表达,下调DRP1的表达,从而抑制线粒体碎片化,发挥神经细胞线粒体保护作用。