牛结核杆菌DNA疫苗的纯化工艺研究及质量鉴定

为获得纯度较高,能进行动物免疫试验的DNA疫苗,在高密度发酵工程菌的基础上,通过传统的碱裂解,获得粗提的质粒;用氯化钙去除裂解液中的大部分RNA,并用Sartobran P囊式过滤器获得了澄清的溶液。用聚乙二醇法沉淀超螺旋质粒DNA,去除大部分菌体蛋白和宿主DNA。最后用source 30Q阴离子交换色谱填料去除几乎全部的内毒素并浓缩了质粒。本试验纯化的DNA疫苗经质量检验达到了转染动物的要求。该工艺实现了一步色谱纯化DNA疫苗的目的,具有工艺简单、快速的优点。

牛分支杆菌DNA疫苗工程菌的高密度培养研究

对牛分支杆菌三价DNA疫苗工程菌进行了高密度培养的探索。通过摇瓶培养试验对3种培养基进行了筛选,选择出具有高密度培养潜力的半合成培养基作为中试规模的发酵罐培养基;经对培养温度、溶氧、pH、转速、补料方式等各种条件优化,培养的工程菌密度OD600达到22.92,细菌湿重达到27.173 g/L,质粒产量为1.44 mg/g湿菌。试验还对培养物质粒的稳定性进行了证实。

特别策划:提高对牛结核病的重视

结核病是由结核分枝杆菌（Mycobacterium）引起的人、畜、禽共患的一种慢性传染病,由人结核分枝杆菌（MTB）、牛分枝杆菌（MB）、禽型分枝杆菌（M,avium）、非洲分枝杆菌以及田鼠分枝杆菌（M,microti）所引起,统称这些病原为结核分枝杆菌复合物（或群）。目前已知,结核病除感染人外还能使50多种哺乳动物和25种禽类感染,牛是最敏感的动物。

一株牛分枝杆菌的分离与鉴定

采集一头检疫阳性的结核牛病变的淋巴组织进行细菌分离。分离物(Z-N)染色为阳性。提取细菌DNA,用PCR检测结核分枝杆菌特异性插入片段IS1081,确定该细菌为结核分枝杆菌。将PCR扩增出的特异性片段克隆到PMD-18T载体上。重组质粒经酶切和PCR鉴定均为阳性,测序结果与牛分枝杆菌标准菌株的同源性为100%。对其用Richard C.Huard等公布的PCR分型方法设计引物进行基因分型,确定该菌株为牛分枝杆菌BCG(M.bovis BCG)。

牛分枝杆菌ESAT-6蛋白抗体间接ELISA方法的建立

利用分子克隆技术,提取结核分支杆菌早期分泌性抗原靶ESAT-6基因,然后对其进行克隆表达,获得高效表达的ESAT-6蛋白,Western blot证实ESAT-6蛋白可与结核牛阳性血清发生特异性反应。以纯化复性的ESAT-6重组蛋白作为诊断抗原建立的间接ELISA特异性为94%、敏感性为63.35%。交叉反应试验表明,该抗原只与牛副结核病阳性血清有交叉反应,而不与其他5种常见的牛病阳性血清发生交叉反应。用间接ELISA方法对285份PPD阳性牛血清、对74份PPD阴性牛血清、79份牛γ-干扰素(IFN-γ)检测阳性血清进行检测,其负荷率分别为62.1%、98.64%、83.54%。实验结果表明建立的间接ELISA方法可以用于牛结核病感染和免疫抗体检测,且具有很好的开发和应用前景。

矿山地面工程概预结算的微机管理

1 整体模型的建立通过对煤矿工程造价管理工作的分析,建立了煤炭地面建筑工程造价概、预、结算的系统模型。由于概、预、结算既相互联系,又相对独立,为便于管理,我们可以分别来进行系统设计,同时考虑进去它们的制约关系,那么三个子系统就有机地联系在一起了。

牛结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的原核表达和纯化

构建牛结核分枝杆菌ESAT-6基因的原核表达载体,诱导表达、纯化并初步鉴定该蛋白。方法:以牛型分枝杆菌基因组DNA为模板,PCR方法扩增ESAT-6基因,产物通过双酶切克隆入pET-22b(+)质粒,经PCR、酶切、测序等方法鉴定后,转入大肠杆菌BL21(DE3)polys菌体,经IPTG诱导表达蛋白;利用Western-blot鉴定重组蛋白后,纯化目的蛋白。结果:所获得ESAT-6基因序列与GenBank公布的完全一致。经SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定均发现在6kDa处有特异性蛋白条带。纯化的蛋白的大小与蛋白质分子量标准比较一致。结论:成功表达纯化并鉴定构建了ESAT-6融合蛋白。

农村土地整理的效益分析——以河北省孟村回族自治县为例

土地整理项目效益分析是土地整理研究中的重要问题。土地整理活动以谋求土地整理的综合效益最大化为目的,也就是土地整理后的社会效益、环境效益和经济效益的自然融合。本文以河北省孟村回族自治县为例,分析了农村土地整理项目中的效益。

中国生物医学文献光盘数据库检索系统(试验版)

中国生物医学文献光盘数据库检索系统是中国医学科学院医学信息研究所开发研制的面向生物医学领域的微机光盘检索系统。该系统由两大部分构成:①中国生物医学文献光盘数据库及其辅助检索词表;②系统软件:包括数据输入子系统、数据库文件生成维护子系统、检索子系统、出版子系统、报表生成子系统。中国生物医学文献光盘数据库收录了1983年1月至1994年3月《中文科技资料目录》(医药卫生)的全部文献题录,总计43万余篇,从1994年起年文献报道量增至12万篇。

对腐败现象的思索及反腐之我见

现阶段中国社会经济生活中 ,存在着一些腐败现象。透过这些现象 ,可以发现腐败存在的条件和其赖以生存的土壤。腐败的根源来自于因追求私利而导致的权力滥用 ,所以反腐的关键是以防止和减少权力滥用为重点 ,进行制度创新 ,限制权力 ,制约权力 。

中国生物医学文献光盘数据库检索系统——1995年版概貌

中国生物医学文献光盘数据库自1994年9月问世以来,引起了医药卫生人士的关注。人们给予了支持、肯定,提出了许多宝责建议。95年版中国生物医学文献光盘数据库与94年版相比,做了多项重大改动;(1)收录期刊由原来的600种增加至700多种,文献量由原来的每年4万余篇增加到约13万篇;(2)数据著录项和可检索字段由原来的15个增至为32个;(3)加强了文献的主题标引深度,增加了主要概念、次要概念的标引,增加了主题词的加权检索及扩展加权检索功能;(4)为适应机检,对分类表进行了扩充,分类号可进行多种灵活的检索;(5)增加了期刊表辅助检索功能;(6)扩充了数据项的精确检索和非精确检索功能;(7)通过多种检索功能的进一步完善,使用户环境更为友好。

低碳经济背景下煤炭经济生态圈的模式探究

随着社会经济的不断发展,人们在追求生活质量的同时也开始逐渐把关注的重心向生态环境问题转移。低碳生活、节能减排的生活理念已经越来多地渗透进人们生活的方方面面。煤炭作为一个高碳的行业,其污染排放量高、能源消耗大的特点极为明显。作为我国重要组成部分的经济产业之一,如何在当前低碳经济盛行的背景下求得“生存”?企业煤炭的发展亟待改革创新。本文就企业煤炭经济生态圈的发展所需要具备的条件进行分析,以供参考。

药物穴位注射治疗顽固性神经性呃逆

采用药物穴位注射治疗顽固性神经性呃逆。在祖国医学经典理论指导下 ,结合现代药理学 ,选穴内关、膈俞、足三里 ,用药物 654- 2、维生素 B6、维生素 K3 、硫酸镁穴位注射。中西合璧 ,共奏宣畅气机、通利三焦、温中降逆之功效 ,疗效显著。

煤炭资源资产分类的模糊数学方法

建立了煤炭资源产分类的影响因素评价指标体系,以及基于聚类的综合评判模糊分类模型,探讨了煤炭资源资产分类的模糊数学方法,并通过实例进行了检验.

中轴线上的民俗吆喝声

我从小生活在交道口北二条胡同,这是位于北京中轴线东侧的一条老胡同。与威严壮观的皇家建筑不同,胡同承载了老百姓的日常生活,琐碎、市井、热闹又温情。这样的胡同在中轴线上有不少。我们家族自350年前就定居北京。从清末开始,我的祖先在北京以走街串巷卖糖葫芦为生,可以讲是老北京民俗文化的亲历者和见证者。在我看来,民俗文化是北京中轴线的灵魂,也是了解中华文化的活化石。

浅议初中英语听力训练教学

英语教学工作必须认真遵循《英语教学大纲》的规定,把培养学生的听力作为重点来做。 听力是理解和吸收口头信息的交际能力,是说的能力的基础,它需要边听,边联想,边判断,从而在有限时间内听懂英语的有声信息。然而,实践证明在英语学习过程中,听力技能是很难掌握的。

穴位封闭治疗急性胆囊炎60例

穴位封闭治疗急性胆囊炎６０例宋振忠临床资料所治６０例中，男性２６例，女性３４例；年龄最小的１８岁，最大的５０岁，平均年龄３０岁；病程１～７天者５１例，７天以上者９例。诊断标准：患者急性起病；右上腹部绞痛、肌紧张和压痛、莫菲氏征（＋），并有发烧；Ｂ超示...

中国乡村治理结构的未来发展方向探究

随着城乡一体化发展速度不断加快,乡村治理被放置到极为重要的地位。乡村治理是国家治理的重要组成部分,乡村治理的现代化发展不仅关系到国家现代化治理进程,也与农民的实际利益分不开。在一定意义上,乡村治理有序或者无序,都会在一定程度上影响到国家政治的稳定发展以及社会和谐进步。基于此,本文主要分析中国乡村治理过程中存在的问题,并且为乡村治理未来发展提供方向。

如何提高学生的阅读能力

提高学生的阅读能力，需要看题目，找问题，读课文，抓特点，重点阅读，要上好说话训练课。