稳定表达FIP1L1-PDGFRA及其突变体细胞株的构建和耐药性评价

目的构建能稳定表达FIP1L1-PDGFRA融合基因(F/P)及其T674I和D842V突变体的小鼠原B细胞株BaF3-F/P、BaF3-F/P-T674I和BaF3-F/P-D842V,并通过考察它们对酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)的响应以评价其活性。方法用慢病毒感染技术将目的基因导入BaF3细胞;RT-qPCR检测mRNA表达;CCK-8法检测TKIs对稳转细胞株增殖的抑制作用。结果构建的BaF3-F/P、BaF3-F/P-T674I和BaF3-F/P-D842V细胞株均能转录FIP1L1和PDGFRA mRNA,并表现出不依赖IL-3增殖的恶性表型特征以及对相应TKIs的敏感性。结论成功构建了能稳定表达F/P及其T674I、D842V突变体的小鼠原B细胞株,为开发以此为靶点的化合物提供良好的细胞模型。

Blau综合征动物模型的建立

目的建立稳定可靠的Blau综合征(Blau syndrome,BS)体内动物模型。方法C57BL/6J小鼠腹腔注射胞壁酰二肽(muramyl dipeptide,MDP)或L18-MDP建立BS系统性炎症模型,同时设置阳性药依那西普(etanercept,ETN)考察模型对药物的响应以评价其有效性;SD大鼠玻璃体腔内注射MDP建立BS相关的葡萄膜炎模型;ELISA法检测血清中TNF-α、IL-6和IL-8水平;HE染色法检测眼球病理学变化;免疫组织化学染色法检测玻璃体内p65、p-ERK、p-p38、p-JNK、TNF-α、IL-6和IL-8的表达情况。结果小鼠血清中TNF-α水平在腹腔注射MDP后出现上升(P<0.05),在注射L18-MDP后明显升高(P<0.01),同时血清中IL-6和IL-8水平亦被L18-MDP明显诱导(P<0.01)。ETN对L18-MDP诱导的上述细胞因子水平的升高均有明显抑制作用(P<0.05,P<0.01)。大鼠玻璃体腔内注射MDP后,视网膜及玻璃体中有大量炎性细胞浸润,视网膜损伤严重,眼球组织中p65、p-ERK、p-p38、p-JNK、TNF-α、IL-6和IL-8的染色明显增强。结论C57BL/6J小鼠腹腔注射L18-MDP可成功构建系统性BS动物模型,SD大鼠玻璃体腔内注射MDP可建立良好的BS相关葡萄膜炎动物模型,这为探索BS发病机制以及开展药效评价提供了操作简便、容易重复的较为理想的动物模型。

基于深度学习的无人机多光谱图像柑橘树冠分割

树冠信息的准确获取是研究柑橘树生长及产量预测的重要指标,但复杂的树木结构给树冠的准确提取带来一定影响,深度学习的快速发展为柑橘树冠信息准确获取提供了可能。采用一种新的基于深度学习的柑橘树冠自动提取方法,即将消费级无人机采集的多光谱图像与一种新的深度学习模型U2-Net结合,通过对获取的图像进行几何变换以构建柑橘树冠图像数据集。将U2-Net模型和当前3种主流深度学习模型(即PSPNet、U-Net和DeepLabv3+)分别在3个典型试验分区进行试验以提取柑橘树冠信息,并对提取结果进行对比分析。结果表明,在3个试验分区,U2-Net模型的柑橘树冠提取精度最高,其中交并比(IoU)、总体精度(OA)和F1分数(F1-score)分别为91.93%、92.34%和93.92%。与其他3种深度学习模型相比,U2-Net模型的IoU、OA和F1-socre分别提高了3.63%~8.31%、1.17%~5.25%和1.97%~4.91%。此外,U2-Net模型柑橘树冠提取面积和测量面积之间具有较高的一致性,3个试验分区决定系数(R2)均高于0.93,且与其他3种深度学习模型相比,U2-Net模型的错误率也较低,均方根误差(RMSE)为1.35 m2,均方误差(MRE)为8.15%。此研究将无人机多光谱图像与U2-Net模型相结合的方法能够实现柑橘树冠的精确提取,且提取树冠轮廓完整性较好,可为柑橘动态生长变化监测和产量预测提供基础数据与技术支撑。

Blau综合征细胞模型的建立

目的建立稳定可靠的Blau综合征(BS)体外细胞模型。方法以小鼠腹腔巨噬细胞系(RAW264.7)、原代骨髓巨噬细胞(iBMDM)和人急性单核细胞白血病细胞系(THP-1)为研究对象,用胞壁酰二肽(MDP)或MDP衍生物(L18-MDP)刺激细胞建立模型,同时设置TNF-α抑制剂依那西普(ETN)和R1P2抑制剂(GSK583)处理组考察模型对药物的响应以评价其有效性,22 h后收集细胞培养上清,ELISA检测细胞上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果经10μg/mL MDP刺激后,RAW264.7和iBMDM细胞上清中TNF-α含量显著升高(P<0.01),ETN和GSK583可降低MDP诱导的TNF-α水平升高(P<0.01)。THP-1细胞经PMA诱导为THP-1-Mφ细胞株后,0.2和1μg/mL L18-MDP均可增加上清中TNF-α的水平(P<0.01);在给予0.2μg/mL L18-MDP刺激的同时加入ETN可显著抑制TNF-α的分泌水平(P<0.001)。结论本实验用RAW264.7、iBMDM和THP-1细胞建立了良好的BS体外细胞模型,模型具有简单方便、容易重复操作以及可控性强的优点,这为进一步研究BS的发病机制以及筛选和评估治疗药物奠定基础。