circAGFG1在皮肤鳞状细胞癌组织中的表达及其对SCC13细胞增殖、迁移的影响

目的:探讨circAGFG1在皮肤鳞状细胞癌组织中的表达及其对SCC13细胞增殖、迁移的影响及其可能作用机制。方法:收集2018年3月至2020年5月江南大学附属医院收治的46例皮肤鳞状细胞癌患者的癌组织及其相应癌旁组织标本,qRT-PCR法检测circAGFG1、miR-653-5p的表达量;采用Pearson法分析皮肤鳞状细胞癌组织中circAGFG1与miR-653-5p表达量的相关性;体外培养人皮肤鳞状细胞癌细胞SCC13,随机分为:si-NC组、si-circAGFG1组、miR-NC组、miR-653-5p组、si-circ-AGFG1+anti-miR-NC组、si-circAGFG1+anti-miR-653-5p组;CCK-8法、平板克隆形成实验、划痕实验与Transwell实验分别检测细胞增殖、克隆形成及迁移;双荧光素酶报告实验检测circAGFG1与miR-653-5p的靶向关系。结果:与癌旁组织比较,皮肤鳞状细胞癌组织中circAGFG1的表达量升高(P<0.05),miR-653-5p的表达量降低(P<0.05);circAGFG1与miR-653-5p呈负相关(r=−0.5717,P<0.001);与si-NC组比较,si-circAGFG1组miR-653-5p的表达量升高(P<0.05),细胞增殖抑制率升高(P<0.05),划痕愈合率降低(P<0.05),细胞克隆形成数和迁移细胞数减少(P<0.05);circAGFG1可靶向调控miR-653-5p的表达;与miR-NC组比较,miR-653-5p组细胞增殖抑制率升高(P<0.05),划痕愈合率降低(P<0.05),细胞克隆形成数和迁移细胞数减少(P<0.05);与si-circAGFG1+anti-miR-NC组比较,si-circAGFG1+anti-miR-653-5p组细胞增殖抑制率降低(P<0.05),划痕愈合率升高(P<0.05),细胞克隆形成数和迁移细胞数增多(P<0.05)。结论:下调circAGFG1表达可通过靶向调控miR-653-5p表达而抑制皮肤鳞状细胞癌细胞增殖、克隆形成及迁移。

低分子肝素对胃癌SGC-7901细胞增殖及其hTERT表达的影响

目的探讨低分子肝素(LMWH)对胃癌SGC-7901细胞增殖及其人端粒酶逆转录酶(hTERT)表达的影响。方法不同浓度LMWH作用于SGC-7901细胞不同时间后,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪分析细胞周期,RT-PCR检测细胞hTERT mRNA。结果LMWH作用后,SGC-7901细胞的生长受抑制,呈剂量和时间依赖性,细胞停滞于G1期,其hTERT mRNA表达下降。结论LMWH可抑制SGC-7901细胞的生长,其机制可能与阻滞细胞周期、降低hTERT mRNA的表达有关。

PDGF家族在原发性胃腺癌组织中的表达及其意义

目的:研究血小板衍生生长因子(PDGFs)家族在原发性胃腺癌组织中的表达,阐明其与原发性胃腺癌临床病理特征的关系。方法:选择手术切除并经病理证实的58例原发性胃腺癌癌组织及其对应的癌旁组织标本,采用RT-PCR方法检测组织中PDGF-A、B、C、D mRNA的表达情况,明确PDGF家族在mRNA水平的表达谱;免疫组织化学方法检测家族中重要成员PDGF-D蛋白的表达情况。结果:胃腺癌组织中PDGF-A、B、C、D mRNA阳性表达率分别为39.66%(23/58)、22.41%(13/58)、31.03%(18/58)和98.28%(57/58),与其相对应的癌旁组织的阳性表达率分别为12.07%(7/58)、10.34%(6/58)、17.24%(10/58)和72.41%(42/58),在胃腺癌组织中PDGF-D mRNA阳性表达率显著高于PDGF其他亚型(P<0.01),且PDGF-D mRNA的表达率显著高于癌旁正常组织(P<0.05);PDGF-D蛋白在胞膜/胞质均有表达;有淋巴结转移、远处转移及复发的胃腺癌组织PDGF-D mRNA的表达水平高于无转移或无复发组织(P<0.05)。结论:PDGF-D是PDGF家族中最重要的与胃腺癌关系密切的因子,提示检测PDGF-D的表达可以作为判断胃腺癌转移和预后的指标之一。

谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的研究

采用MTT方法观察一定浓度的谷氨酸对PC12细胞活性的影响,结合凝胶电泳和荧光显微镜观察细胞有无DNA断裂和凋亡形态学改变。结果发现谷氨酸确有兴奋毒作用,细胞死亡机制主要为凋亡。

外源性PDGF-DD蛋白对肝癌细胞株BEL-7402的体外作用

目的:探讨外源性PDGF-DD蛋白对PDGF-D和β-PDGFR阳性表达的人肝癌细胞株BEL-7402增殖和转移相关基因VEGF及CXCR4表达的影响。方法:浓度为0～100pg/mL PDGF-DD蛋白作用于肝癌细胞株BEL-740248h,MTT检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期;RT-PCR检测VEGFmRNA和CXCR4 mRNA表达。结果:外源性PDGF-DD蛋白干预细胞后,可促进细胞增殖,且在0～100pg/mL范围内呈剂量依赖性;周期分布显示G0/G1期细胞比例下降,S期细胞比例增多;且上调VEGFmRNA和CXCR4 mRNA的表达。结论:外源性PDGF-DD能促进BEL-7402细胞增殖,上调VEGF、CXCR4 mRNA的表达。提示PDGF-D及其信号传导系统在肝癌的发生、发展及转移中可能发挥重要的作用,可作为肝癌预后预测指标和治疗靶点。

低分子肝素对胃癌SGC-7901细胞株生长和VEGF表达的影响

目的:探讨低分子肝素对胃癌SGC-7901细胞株的生长以及其血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:采用MTT方法观察一定浓度速碧林(低分子肝素钙注射液)作用于SGC-7901细胞12h,24h,48h后细胞的生长情况。用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析SGC-7901细胞VEGF mRNA表达的变化,同时用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞上清中VEGF的蛋白表达量。结果:速碧林对SGC-7901细胞的生长有抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;与对照组相比,速碧林能降低SGC-7901细胞VEGF mRNA以及蛋白的表达。结论:低分子肝素能抑制SGC-7901细胞的生长以及VEGF的分泌。

塞来昔布对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B生长及其VEGF表达的影响

目的研究塞来昔布对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B的生长及其血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法应用不同浓度的塞来昔布作用于HEC-1-B细胞,MTT法检测塞来昔布作用于HEC-1-B细胞24、48、72h后,对HEC-1-B细胞增殖的影响。用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析其对HEC-1-B细胞VEGF mRNA表达的影响,同时用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测HEC-1-B细胞上清中VEGF蛋白表达量。结果塞来昔布对HEC-1-B细胞的生长有抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;与对照组相比,塞来昔布能降低HEC-1-B细胞VEGF mRNA及蛋白的表达。结论塞来昔布能抑制HEC-1-B细胞的生长及VEGF的分泌。

胍基丁胺对谷氨酸诱导PC12细胞DNA损伤的影响

探讨了胍基丁胺对谷氨酸诱导PC12细胞DNA损伤的影响。在用一定浓度的谷氨酸诱导PC12细胞DNA断裂的同时,观察胍基丁胺对其DNA断裂和线粒体功能的影响,发现胍基丁胺能明显减轻谷氨酸诱导PC12细胞DNA断裂并能改善线粒体功能。这说明胍基丁胺具有抑制PC12细胞DNA损伤的作用,其机制可能与其拮抗NMDA受体,改善线粒体功能和减轻谷氨酸的氧化毒性有关。

XRCC 1 Arg399Gln基因多态性对铂类药物化疗胃癌患者预后的影响

目的:研究DNA修复酶X射线损伤交叉互补蛋白1(X-ray repair cross-complementary protein1,XRCC1)基因Arg399Gln多态性对接受铂类药物辅助化疗的胃癌患者预后的影响。方法:选取经病理学确诊的胃癌患者84例,采用含铂类药物的联合化疗方案进行辅助化疗。化疗前采集患者外周血,采用聚合酶链反应-连接酶检测反应(polymerase chain reaction-ligation detection reaction,PCR-LDR)技术检测XRCC1基因Arg399Gln的多态性。结果:84例胃癌患者中,49例(58.3%)携带XRCC1的399Arg/Arg基因型,30例(35.7%)携带Arg/Gln基因型,5例(6.0%)携带Gln/Gln基因型;截止到随访结束,分别有63.1%(53/84)和55.2%(43/84)的患者出现复发和死亡,其中携带Arg/Arg基因型的胃癌患者复发率和死亡率均显著低于携带Arg/Gln或Gln/Gln基因型患者(P<0.05)。COX多因素分析显示,携带Arg/Arg基因型的患者具有较好的无复发生存期和总生存期预后(P<0.05)。结论:XRCC1Arg399Gln基因多态性与术后胃癌患者接受铂类药物化疗后的预后有关,可以在一定程度上判断术后胃癌患者接受铂类药物化疗的预后情况。

ERCC1 mRNA表达及基因多态性对胃癌辅助化疗预后的影响

目的:探讨切除修复交叉互补基因(ERCC1)mRNA表达及118C/T基因多态性与胃癌对奥沙利铂辅助化疗预后的关系。方法:根治术后胃癌患者62例,采用奥沙利铂为主的方案进行辅助化疗。采用半定量RT-PCR方法检测胃癌组织中ERCC1 mRNA水平。采用PCR-LDR(连接酶检测反应)检测ERCC1118C/T基因多态。结果:62例胃癌组织ERCC1 mRNA表达水平的中位值为0.672;ERCC1118C/C、C/T和T/T基因型分别占51.6%(32/66)、43.5%(27/62)和4.8%(3/62)。ERCC1 mRNA高表达组(>0.672)无复发生存率和总生存率均显著低于低表达组(P<0.05);携带C/T和T/T基因型患者与C/C基因型患者的无复发生存率和总生存率差异无显著性(P>0.05)。多因素分析结果显示ERCC1 mRNA水平是影响患者预后的独立危险因素(P<0.05),而ERCC1118C/T多态与预后无关(P>0.05)。结论:ERCC1 mRNA表达水平与接受奥沙利铂为主辅助化疗胃癌患者的预后有关,可用于其预后预测。

血小板衍生生长因子-D在肝细胞肝癌中的表达及其临床意义

目的研究血小板衍生生长因子(PDGF)D在肝细胞肝癌(HCC)中的表达及其与临床病理指标的关系。方法用RT-PCR方法检测PDGF-A、B、C、D及其受体PDGFRα和PDGFRβ基因在40例肝癌组织及对应的30例癌旁组织和10例正常肝组织标本中mRNA的表达。结果HCC组织中PDGF-A、B、C、D及其受体PDGFRα和PDGFRβ阳性表达分别为37.5%(15/40)、70%(28/40)、52.5%(21/40)、92.5%(37/40)、22.5%(9/40)、42.5%(17/40);与其相对应的癌旁组织的阳性表达率分别为23.3%(7/30)、16.7%(5/30)、16.7%(5/30)、26.7%(8/30)、13.3%(4/30)、16.7%(5/30);而正常肝组织中未见表达。在HCC组织中PDGF家族的表达均显著高于癌旁组织和正常组织,三组比较差异有统计学意义(P<0.01),且PDGF-D的阳性表达显著高于PDGFs其他亚型(P<0.05)。在HCC、癌旁、正常肝脏组织中PDGF-D平均光密度值为0.5900±0.0364、0.3954±0.0654、0,三者比较差异有统计学意义(P<0.01)。HCC组织中PDGF-D的阳性表达与肿瘤的分化程度、淋巴及转移有关(P<0.05);与年龄、性别、肿瘤大小、血清AFP的值及门静脉癌栓无关(P>0.05)。结论PDGF家族中以PDGF-D表达率最高且与肿瘤的分化程度和转移相关,提示PDGF家族,尤其是PDGF-D在HCC的发生、发展和转移中可能发挥着重要的作用,可作为肝癌辅助诊断指标和治疗靶点。

IQGAP1通过mTOR信号通路促进肝癌细胞增殖

目的:研究IQGAP1(IQ domain GTPase-activating proteins,IQGAP1)对肝癌细胞株增殖及mTOR信号转导通路的影响,阐述其诱导细胞增殖的机制。方法:Western blot检测IQGAP1在肝癌细胞株HepG2、Huh-7中的表达。选择高表达IQGAP1的细胞株,针对IQGAP1基因的mRNA序列合成siRNA,采用脂质体转染法将其转入HepG2细胞;采用MTT法分析细胞的增殖;流式细胞仪检测细胞周期变化;免疫印迹法观测IQGAP1、mTOR和p-mTOR蛋白表达的变化。结果:IQGAP1在HepG2和Huh-7细胞中均表达,且在HepG2细胞中表达高于Huh-7细胞。IQGAP1 siRNA转染HepG2细胞后,抑制细胞的增殖;DNA合成前期(G_0/G_1期)细胞比例上升,合成期(S期)细胞比例下降;mTOR表达变化不明显,而p-mTOR的表达下降。结论:IQGAP1促进肝癌细胞的增殖,其机制可能是通过mTOR相关信号通路实现的。

PDGF-D对人肝癌细胞增殖及VEGF表达影响研究

目的:研究血小板源性生长因子D(PDGF-D)对人肝癌细胞株BEL-7402增殖及其血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:体外培养肝癌细胞株BEL-7402和肝癌旁非瘤性细胞株QSG-7701,采用RT-PCR方法检测PDGF-D与PDGFRβmRNA在BEL-7402和QSG-7701的表达情况;将浓度分别为0(对照)、5、10、20、50、100、200μg/mL的人重组PDGF-DD蛋白加入BEL-7402中,采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测肝癌细胞的生长曲线;流式细胞仪检测细胞周期变化;半定量RT-PCR检测VEGF及PDGFRβmRNA表达情况,ELISA检测PDGF-DD干预细胞后培养上清中VEGF蛋白的表达情况。结果:PDGF-D及PDGFRβmRNA在BEL-7402中高表达,与QSG-7701相比差异有统计学意义(P<0.05)。PDGF-DD干预细胞后,可促进人BEL-7402增殖,浓度为100μg/mL时达最高峰;细胞周期分布变化,G_0/G_1期细胞数减少,S期细胞数增加,与对照组相比差异有统计学意义;RT-PCR结果显示,VEGF及PDGFRβ RI值,实验组(除5μg/mL组外)与对照组相比差异有统计学意义;ELISA结果显示,加入PDGF-DD各浓度组VEGF蛋白浓度较对照组增高,差异有统计学意义,并呈量效依赖性关系。结论:PDGF-DD能促进BEL-7402的增殖,上调PDGFRβ及VEGF的表达。PDGF-D及其信号传导系统在肝癌的发生、发展中可能发挥重要的作用,可作为肝癌预后预测指标和治疗靶点。

tktl1在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

目的:研究转酮醇酶样基因1(tktl1)在肝细胞肝癌(HCC)中的表达及其与临床病理的关系。方法:RT-PCR法检测转酮醇酶基因家族各成员(tkt、tktl1、tktl2)mRNA在42例HCC及癌旁组织中的表达并研究其与临床病理参数间的关系。结果:HCC组织中tktl1阳性表达率明显高于tkt和tktl2的阳性表达率(P<0.05)。tktl1在HCC中的阳性表达率明显高于癌旁组织(P<0.05);而tkt和tktl2阳性表达率在肝癌及癌旁组织间无明显差异(P>0.05)。HCC中tktl1的高表达同肿瘤分化程度,静脉癌栓,CLIP评分有关(P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤大小、肝内及淋巴转移、AFP水平无关(P>0.05)。结论:tktl1与HCC的发生发展有关,影响肝癌的分化、转移及患者预后,有望成为HCC治疗的新靶点。

PDGF-D对人胃癌细胞株SGC7901的作用

目的:探讨血小板衍生生长因子-D(PDGF-D)及其受体PDGFRβmRNA在人胃癌细胞株SGC7901中的表达及其意义。方法:用RT-PCR方法检测人胃癌细胞株SGC7901中PDGF-D及PDGFRβmRNA的表达,将人重组PDGF-D蛋白分别以0、20、50、100、500、2 500、25 000、250 000 pg/mL浓度加入人胃癌细胞株SCG7901中,采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测胃癌细胞株SCG7901的增殖情况并画出生长曲线;采用流式细胞仪检测细胞周期变化。结果:PDGF-D及PDGFRβmRNA在胃癌细胞株中表达。MTT检测发现外源性PDGF-D蛋白可以促进SGC7901细胞增殖(P<0.05)。细胞周期分析显示外源性PDGF-D蛋白干预细胞后实验组G0/G1期细胞比例下降,S期细胞比例上升(P<0.05)。结论:PDGF-D在胃癌的发生、发展中可能起着重要的作用。PDGF-D可能成为治疗胃癌的新的靶点。

奥曲肽对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖及其血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨奥曲肽对人子宫内膜癌细胞增殖及其血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法加入不同浓度的奥曲肽对HEC-1-B细胞进行培养。细胞增殖用MTT法检测,细胞中VEGF的表达采用RT-PCR技术及酶联免疫吸附试验(ELISA)检测。结果加入奥曲肽培养后,HEC-1-B细胞的增殖受抑制,而且其VEGFmRNA指数降低,VEGF蛋白表达减少。结论奥曲肽能抑制人子宫内膜癌细胞增殖及VEGF的分泌。

实时荧光PCR技术定量检测乳腺癌患者血浆循环DNA

目的建立一种实时荧光定量PCR方法,并用该方法检测乳腺癌患者血浆循环DNA水平。方法用QIAamp血液DNA抽提试剂盒提取61例乳腺癌患者和25例健康妇女血浆循环DNA,用实时荧光定量PCR技术(SYBR Green I染料法)进行定量,结果用设定临界域值时的循环数的值(Ct值)表示,并对定量结果进行ROC曲线分析。结果:乳腺癌患者Ct值(27.71±1.41)显著低于健康对照(30.37±1.32,P<0.001),说明乳腺癌患者血浆循环DNA水平显著高于健康对照组;ROC曲线下面积为0.921。结论应用实时PCR技术检测乳腺癌患者血浆循环DNA水平有可能成为一种无创性乳腺癌分子诊断方法。

CYP2B6 Q172H和K262R基因多态性对乳腺癌患者环磷酰胺化疗预后的影响

目的探讨CYP2B6 Q172H和K262R基因多态性与乳腺癌环磷酰胺类药物辅助化疗预后的关系。方法 100例确诊的乳腺癌患者,采用环磷酰胺类药物为主的方案进行辅助化疗;用聚合酶链反应-连接酶检测反应检测CYP2B6 Q172H和K262R基因多态。结果 100例乳腺癌患者中,携带Q172H(516G>T)GG、GT和TT基因型的患者分别占59%、38%和3%;携带K262R(785A>G)AA、AG和GG基因型的分别占47%、43%和10%。携带Q172HGT和TT基因型的患者无复发生存率显著高于携带GG基因型的患者(P<0.05);携带K262RAG和GG基因型的患者无复发生存率显著高于携带AA基因型的患者。多因素分析结果显示,Q172H多态是影响患者复发的独立危险因素(P<0.05)。结论 Q172HGT和TT基因多态与接受环磷酰胺药物辅助化疗的乳腺癌患者的预后有关。

PDGF-D及其受体在胃癌组织中的表达及意义

目的探讨血小板衍生生长因子-D(PDGF-D)及其受体PDGFRβ mRNA在胃癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法用RT-PCR方法检测58例胃癌及相对应的癌旁标本中PDGF-D及PDGFRβ mRNA的表达,分析其与临床病理特征的关系。结果 PDGF-D及PDGFRβ在胃癌组织中的阳性表达率(98.28%,72.41%)均高于癌旁组织(87.93%,53.45%),P均<0.05。PDGFRβ与PDGF-D的表达呈正相关(r=0.40,P<0.05)。PDGF-D mRNA的表达水平与胃癌的淋巴结及远处转移和复发有关(P<0.05),与其他临床病理特征无关(P>0.05)。结论 PDGF-D在胃癌的发生、发展和转移、复发中可能起着重要的作用,可作为预测胃癌转移和复发的有意义指标。

节拍器化疗对鼻咽癌CNE-1细胞周期和凋亡的影响

目的探讨顺铂节拍器化疗对人鼻咽癌细胞CNE-1细胞周期和细胞凋亡的影响。方法采用MTT方法,检测顺铂对鼻咽癌细胞株CNE-1的半抑制浓度(IC50),相当于临床中采用6 mg/m2顺铂小剂量连续化疗的血浆浓度。以低于此浓度的0.10μg/ml作为顺铂节拍器体外化疗参考剂量,采用流式细胞术检测0.10μg/ml顺铂连续作用12 h和96 h细胞周期和细胞凋亡的变化情况。结果MTT法检测顺铂半抑制浓度IC50为0.19μg/ml,0.10μg/ml顺铂作用12 h后检测细胞周期变化,与对照组比较无显著变化;而作用96 h后与对照组相比进入G2/M期细胞比例显著增多,两者差异有统计学意义(P<0.05),但作用12 h和96 h后均未检测到明显细胞凋亡现象。结论采用小剂量顺铂作用足够长时间,可以诱导鼻咽癌CNE-1细胞周期发生变化,但是并不能诱导细胞凋亡。细胞周期同步化于G2/M期,为节拍器化疗与放疗的联用提供了可能。