氯仿法提取蜡梅花被片表层蜡质的研究

以山蜡梅、"金蓓"素心蜡梅及"扬州黄"素心蜡梅为试材,使用扫描电子显微镜观察,研究了氯仿加热不同时间处理对蜡梅盛开期花被片蜡质提取效果的影响。结果表明:山蜡梅花被片蜡质提取最适条件为氯仿60℃处理30s,表层蜡质含量约为1 034.33μg/cm2;素心蜡梅"金蓓"和"扬州黄"花被片蜡质提取最适条件均为氯仿60℃处理20s,"金蓓"素心蜡梅花被片表层蜡质含量约为651.33μg/cm2,"扬州黄"素心蜡梅花被片表层蜡质含量约为1 057.33μg/cm2。

素心蜡梅水孔蛋白基因的克隆与序列分析

以素心蜡梅为试材,根据已建立的素心蜡梅转录组数据库已知序列设计特异引物,采用PCR技术,克隆并分析了素心蜡梅盛花期花被片水孔蛋白基因序列和氨基酸结构特征,对得到的基因和数据库中的cDNA进行比对,并通过多种生物信息学方法对其编码序列、蛋白结构和进化关系进行了分析预测。结果表明:该试验成功克隆得到长2 264bp的水孔蛋白基因,命名为CpAQP3。经序列比对,蜡梅CpAQP3基因含5’非编码区50bp,3’非编码区165bp,开放阅读框长2 049bp,编码248个氨基酸。该基因含2个内含子,长度分别为708bp和594bp,3个外显子,长度分别为127、250、370bp。预测该蛋白有多个跨膜螺旋结构,具较强疏水性。该基因属于MIP家族中的TIP亚族,具有家族典型的保守结构域,预测其结构与运输水分具有显著关系。该试验首次从素心蜡梅中克隆得到水孔蛋白基因序列,与已知从磬口腊梅中获得的水孔蛋白序列有明显不同。

蜡梅花青素苷合成相关基因CpTT8的克隆和功能分析

以蜡梅(Chimonanthus praecox L.)‘H29’为试材克隆得到1个bHLH类转录因子的全长编码序列,命名为CpTT8。对其生物信息学特征、时空表达特性、基因功能、蛋白互作、蛋白–DNA互作等进行了分析。CpTT8的ORF为2130 bp,编码709个氨基酸,含有典型的bHLH结构域;蜡梅CpTT8与桃PpbHLH3、苹果MdbHLH3同源性最高。实时荧光定量PCR结果表明CpTT8在早期花芽中表达量最高;在根、茎、叶、果实中也有表达,以果实中的表达量最高。在拟南芥Col-0和tt8突变体中超量表达CpTT8有利于花青素苷和原花青素的积累,说明CpTT8是花青素苷合成过程中的正调控因子。酵母双杂交实验和双荧光素酶分析揭示了CpTT8需与MYB转录因子互作才能激活下游结构基因ANS的表达。