探讨质谱MRM方法对于糖化血红蛋白准确测定的应用

目的应用质谱多反应监测扫描(MRM)技术准确测定糖尿病患者体内糖化血红蛋白的水平。方法在国际临床化学和实验室医学联盟(IFCC)推荐的质谱法测定糖化血红蛋白参考方法的基础上,利用IFCC参考实验室一级校准物质绘制标准曲线,使用质谱单离子检测扫描(SIM)和MRM 2种模式测定IFCC参考实验室国际比对样本及临床患者标本,计算2种方法的均值、精密度和偏倚,评价质谱MRM方法测定糖化血红蛋白的优势。结果在SIM和MRM 2种监测模式下,均以峰面积为计算依据,横坐标为峰面积比值,纵坐标为浓度CONC比值,绘制标准曲线,在给定的浓度范围内,2种检测方法r^2分别为0.998 8和0.999 2;测定IFCC参考实验室国际比对样本中糖化血红蛋白的水平,SIM模式下,精密度为0.77%～1.81%,偏倚为-0.35～0.30mmol/mol;MRM模式下,精密度为0.81%～1.84%,偏倚为-0.20～0.40mmol/mol。结论在质谱法测定血液样本中糖化血红蛋白水平时,应用MRM监测模式可以获得与SIM模式一致的结果,检测值和精密度等监测结果均符合IFCC参考实验室国际比对要求,同时灵敏度和信噪比进一步提升,抗干扰能力更好,应用前景广阔。

探讨Lys-C胰蛋白酶对于质谱法测定糖化血红蛋白的应用价值

目的探讨Lys-C胰蛋白酶在国际临床化学组织(International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine,IFCC)推荐的质谱法测定糖化血红蛋白的参考方法中的应用价值。方法分别用两种特异性蛋白水解酶(GLU-C胞内蛋白酶和Lys-C胰蛋白酶)酶解血红蛋白后,进行SDS-PAGE电泳,衡量蛋白酶解的效率,再将消化后的血红蛋白进行质谱分析,测定标本中糖化血红蛋白的浓度。结果在相同的电泳条件下,Lys-C胰蛋白酶酶解血红蛋白的效率优于GLU-C;酶解后的血红蛋白标本经质谱方法分析可知,两种蛋白酶用于检测糖化血红蛋白浓度时,可以得到基本一致的结果,由两种方法绘制的标准曲线r2分别为0.929和0.998。结论在IFCC推荐的糖化血红的蛋白参考测量方法中,一直使用GLU-C胞内蛋白酶酶解血红蛋白,该研究尝试通过Lys-C胰蛋白酶的使用,降低整个实验成本。经结果分析,证实应用这两种特异性的蛋白酶检测糖化血红蛋白时,可以得到基本一致的结果,推荐使用文中所列方法将Lys-C胰蛋白酶作为酶解糖化血红蛋白的特异性蛋白酶。

糖尿病合并微血管病变患者血小板参数改变的临床意义

目的探讨糖尿病合并微血管病变患者血小板参数,包括PLT(血小板计数)、PCT(血小板压积)、MPV(平均血小板体积)、PDW(血小板分布宽度)变化的临床意义。方法采用BECKMAN COULTER ACT5diff AL全自动血液分析仪,分别对22例糖尿病合并微血管病变患者、60例单纯糖尿病患者、50例健康对照者的PLT、PCT、MPV、PDW进行测定,并分组比较,统计学采用方差检验。结果(1)糖尿病组(单纯糖尿病患者及糖尿病合并微血管病变组)与健康对照组比较PLT减低(P<0.05),MPV、PDW显著增高(P<0.01),PCT差异无统计学意义。(2)糖尿病合并微血管病变组与单纯糖尿病组相比PLT减低(P<0.05),MPV、PDW显著增高(P<0.01)。结论糖尿病患者与健康对照组比较,血小板数目减少,MPV、PDW明显增高,并且糖尿病合并微血管病变患者与单纯糖尿病组比较,血小板数目减少,MPV、PDW显著增高,提示检测血小板参数(PLT、MPV、PDW)对于监测糖尿病患者有无微血管病变的发生具有一定的临床意义。

糖尿病微血管病变血清Hcy水平和MCV监测意义

目的探讨糖尿病微血管病变患者血清同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)水平和平均红细胞体积(mean cor-puscular volume,MCV)改变的临床意义。方法选择2009年5月～2010年4月我院收治的糖尿病120例(糖尿病组),依据有无微血管病变分为糖尿病微血管病变组60例和单纯糖尿病60例,选择同期健康体检者50例(健康对照组)。对各组血清Hcy水平和MCV进行测定。结果糖尿病组血清Hcy水平增高,MCV明显增大,与健康对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。糖尿病微血管病变组血清Hcy、MCV与单纯糖尿病组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论检测血清Hcy水平和MCV对于监测糖尿病微血管的发生具有一定的临床意义。

以转化医学的观点探讨临床实验室的发展

转化医学（translational medicine）作为医学研究的重要分支,强调在基础研究与临床应用之间建立直接联系,并倡导多学科的协作。随着转化医学的重要性在临床应用中不断提升,吸引了众多基础科研工作者和临床医师的广泛关注,

血清C反应蛋白水平在鉴别不同类型腹泻中的意义

目的:探讨急性腹泻患者C反应蛋白(CRP)的变化。方法:270例成人急性腹泻患者为观察组又分为轻度脱水组、中度脱水组及重度脱水组或细菌感染腹泻组、病毒感染腹泻组及非感染性腹泻组;行常规体检的健康成人80例作为对照组,所有受检者于入院时或体检当日采集空腹静脉血并分离血清,采用免疫比浊法检测患者血清CRP水平,计算CRP阳性率(血清CRP>10 mg/L),分析不同脱水程度及是否发生感染和感染类型对患者血清CRP水平的影响。结果:与对照组比较,不同程度脱水组或不同类型感染组患者血清CRP水平及阳性率明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);重度脱水组与中度脱水组患者或非感染组组与病毒感染组患者的CRP水平及阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);重度脱水组与中度脱水组患者的CRP水平及阳性率高于轻度脱水组,细菌感染组患者的CRP水平及阳性率高于非感染组组与病毒感染组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:中重度脱水腹泻患者或细菌感染性腹泻患者血清CRP水平升高明显,血清CRP水平可用于指导临床用药。

糖化血清白蛋白联合糖化血红蛋白检测在糖尿病肾病患者中的应用价值分析

目的:分析糖化血清白蛋白(GA)联合糖化血红蛋白(HbA1c)检测在糖尿病肾病(DN)患者中的应用价值。方法:选取2019年5月—2021年4月北京市房山区良乡医院和门头沟区中医医院内分泌科住院的糖尿病患者256例为观察对象,按疾病诊断分为DN组127例和非DN组129例;选取同期本院健康体检人群99例为健康对照组。测定并分析HbA1c、GA,计算GA∶HbA1c,采用多因素回归分析评价DN的预测因素。结果:DN组尿素氮、肌酐、尿酸、低密度脂蛋白胆固醇高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。DN组GA和GA∶HbA1c高于非DN组,差异有统计学意义(P<0.05)。GA和GA∶HbA1c分别与DN患者的年龄、血糖、有无视网膜病变进行多因素相关分析。GA和GA∶HbA1c预测DN比值分别为2.61和1.96,95%CI分别为1.18,3.89和1.01,2.26,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:GA联合HbA1c检测对DN的诊断有一定的应用价值。

两款糖化血红蛋白床旁分析仪的正确性评价

目的借助二级参考测量程序(SRMP),探讨两款床旁(point-of-care testing,POCT)糖化血红蛋白(HbA1c)分析仪的正确性。方法依据美国临床和实验室标准化协会(CLSI)Ep9-A2选取40份临床EDTA抗凝静脉全血样本,用比对的方式,分别评价两款POCT HbA1c分析仪与SRMP间的偏倚。结果POCT-1和POCT-2相关方程分别为,Y=1.0424X-0.3144和Y=1.0054X-0.2242相关系数(r)分别为0.9959和0.9469。临床各诊断切点处,偏倚小于美国国家糖化血红蛋白标准化计划(NGSP)和美国病理家协会(CAP)的要求(±6%)。结论两款POCTHbA1c分析仪与溯源到IFCC参考方法的SRMP比对具有良好的正确性,可以满足临床使用。

3款床旁糖化血红蛋白检测系统社区人群适用性研究

目的研究3款血红蛋白(Hb A1c)床旁检测(Point of care testing,POCT)系统在社区医疗机构的适用性。方法收集658例社区临床机构EDTA抗凝全血标本,借助可溯源的二级参考测量程序(SRMP)结果将人群进行分组比较,得出3款POCT Hb A1c检测系统在临床检测的一致性。并采用受试者工作曲线(ROC)评价各检测系统在临床诊断关键点的灵敏度和特异性。结果 POCT Hb A1c-1、2、3与溯源到IFCC参考方法的SRMP检测结果 Kappa一致性分析结果为,κ_(POCT-1)=0.828、κ_(POCT-2)=0.794、κ_(POCT-3)=0.756;ROC曲线下面积(AUC)分别为0.900、0.901、0.898;在临床诊断切点6.5%处,灵敏度分别为87.0%、83.8%、84.8%,特异性分别为78.8%、81.9%、81.0%;结论 3款POCT Hb A1c检测系统在社区人群检测中,均具有良好的灵敏度、特异性和检测一致性,适用于临床使用。

CD34^+细胞含量在细胞移植治疗心力衰竭中的作用

目的:探讨CD34+细胞含量在骨髓单个核细胞移植治疗心力衰竭中的作用。方法:选择缺血性心力衰竭患者30例,测定移植前骨髓单个核细胞中CD34+细胞含量。观察患者移植前和移植后3个月的心肌梗死缺损区面积、左室射血分数、每搏量的变化。结果:在移植后3个月,CD34+细胞<4.45×105者心肌梗死缺损区下降幅度、左室射血分数和每搏量上升幅度均明显小于CD34+细胞>4.45×105者(P<0.05)。结论:在骨髓单个核细胞移植治疗心力衰竭的过程中,细胞系中CD34+细胞含量多者,其心功能改善好于CD34+细胞含量少者。

糖化血红蛋白测定的标准化现状

糖化血红蛋白是目前国际上公认的用于评估糖尿病患者长期血糖状况的金标准，但是我国糖化血红蛋白测定标准化工作目前仍处于初级阶段，关于糖化血红蛋白检测结果的一致性和准确性仍存在亟须解决的问题。

两种蛋白酶对于质谱法测定糖化血红蛋白结果的比较研究

目的探讨两种常用的蛋白水解酶（Glu—C和Lys—C）在质谱法测定糖化血红蛋白（HbA1c）中的差异性研究。方法病例对照研究。收集2012年2至4月北京朝阳医院门诊和住院患者剩余血液合计200ml，患者来源中男90例，女70例，年龄20～60岁，平均年龄（44±16）岁。依据国际临床化学协会（IFCC）推荐的基于质谱法的HbA1c参考测量方法处理收集的血液样本（样本编号为：201201、201202、201203），分别应用两种常用的蛋白水解酶（Glu—C和Lys—C）酶解样本中的血红蛋白，使用固相萃取的方法进行质谱前处理，设定最适实验条件后，应用液相色谱串联质谱测定样本中HbA1c的含量。使用Sequest软件对制备的实验样本进行血红蛋白变异体的筛查，所有由液相色谱串联质谱获得的质谱结果都需使用Sequest软件针对人类国际蛋白指数（IPI）数据库搜索RAW文件，检索结果与血红蛋白变异体网站上公布的4种常见的血红蛋白变异体（HbS、HbC、HbD、HbE）进行比对。采用SPSS13．0统计软件和Excel2003对测量结果进行相关性分析，组问比较采用独立样本t检验。结果经液相色谱串联质谱检测结果可知，在检测HbA．。浓度时，分别用Glu—C和Lys—C酶解血液样本201201、201202、201203，其中经Lys—c酶解的样本HbA，C检测结果分别为（34．70±2．80）、（51．76±1．60）、（73．39±1．11）mmo／／mol，经Glu—c酶解的样本糖化血红蛋白检测结果分别为（33．12±1．48）、（54．54±2．50）、（75．40±3．60）mmol／mol，组间比较差异无统计学意义，两种方法测定结果绘制相关曲线，R^2均〉0．995。经Sequest进行人类数据库检索，未筛查出4种常见的血红蛋白变异体的存在。结论在质谱法检测HbA1c时，应用上述两种常用的蛋白水解酶酶解血液样本时，可以得到较为一致的结果，两种方法检测结果相关性良好。

采用4种方法评估临床实验室糖化血红蛋白检测的不确定度

目的比较4种方法评估临床实验室糖化血红蛋白(HbA1c)检测的不确定度,为临床实验室评估不确定度提供参考。方法根据《CNAS-TRL-001∶2012医学实验室测量不确定度的评定与表达》推荐的4种不确定度评估方法,即利用临床实验室至少6个月的室内质量控制(IQC)数据、1次正确度验证和1次室间质量评价(EQA)数据,分别评估2019年和2020年的33家和35家临床实验室低中高3个HbA1c浓度检测的相对和绝对不确定度。4种不确定度评估方法分别为利用IQC数据和正确度验证数据(方法1)、仅利用正确度验证数据(方法2)、利用IQC和EQA数据(方法3)及仅利用EQA数据(方法4),采用Friedman配对和Wilcoxon符号秩检验进行统计学分析。结果对于方法1,2019和2020年低中高HbA1c检测的相对不确定度和绝对不确定度范围分别为4.21%~9.24%和0.27%~0.64%。与方法1比较,方法2得到的相对和绝对不确定度均较小,差异均有统计学意义(P<0.0167,P<0.05)。与方法1比较,除2020年高浓度水平外,方法3和方法4得到的相对不确定度均较小,在6对(2年低中高浓度)比较中,分别有3对(2019年高浓度,2020年低和中浓度)和2对(2020年低和高浓度)差异有统计学意义(P均<0.0167)。结论临床实验室HbA1c检测不确定度评估应基于IQC和正确度验证数据进行。

北京地区142家医疗机构互认实验室临床化学和临床免疫及临床检验专业室内质量控制现况调查

目的：了解北京地区医疗机构互认实验室临床化学、临床免疫及临床检验专业的室内质量控制现状。方法采用问卷调查及现场调查相结合的方式，使用参考方法定值的新鲜冰冻血清和全血标本，对北京地区142家互认实验室临床化学、临床免疫，临床检验专业的室内质量控制的现状进行调查，并对结果进行分析。结果发放临床化学、临床免疫和临床检验专业调查问卷各142份，分别有120、97和101家实验室回报了问卷，信息回馈率分别为84．5％、68．3％、71．1％，各专业有效回馈率均为100％。问卷调查结果显示：各专业＞50％实验室设置了质量控制目标且大多为误差检出概率（Ped）95％，假失控概率（Pfr）5％；约70％实验室不同的检测项目使用相同的质控方案；使用最多的质控规则是12 s／13 s／22 s。现场调查结果显示，以临床化学专业为例，采用基于生物学变异的适当标准和WS／T 403－2012确定分析质量要求，发现在现有质量控制方法下，多数检测项目不能满足实验室所设置的质量控制目标要求，即Ped 95％，Pfr 5％。结论实验室需考虑实际情况，评估自身能达到的质量水平，为实验室设置合理的质量标准，制定适宜的个性化质量控制计划。

基于质谱的肿瘤标记物实验室检测方法的研究进展

生物标记物（biomarker）是近年来随着免疫学和分子生物学技术的发展而提出的一类与细胞生长增殖有关的标志物。生物标记物不仅可从分子水平探讨发病机制，而且在准确、敏感地评价早期、低水平的损害方面有着独特的优势，可提供早期预警、疾病的诊断、指导治疗，药物敏感度和判断预后等信息，很大程度上为临床医生提供了辅助诊断的依据【1】，其中应用最为广泛的是关于肿瘤标记物（tumormarker）的研究，肿瘤标记物是指由肿瘤组织产生或机体对肿瘤组织的反应而产生的异常表达的活性物质，包括激素、酶、特异性和非特异性的糖蛋白或糖脂等，可用于指示肿瘤的存在【2】。

血清IL-17、IL-4、IFN-γ和IL-33与支气管哮喘的相关性研究

目的：检测支气管哮喘（简称哮喘）患者血清 IL-17、IL-4、干扰素-γ（IFN-γ）和IL-33的水平，探讨其与哮喘的相关性。方法选择北京市房山区良乡医院2014年5月至2015年11月收治的93例哮喘患者作为观察组，根据患者的临床表现和分期分为急性发作期组52例和缓解期组41例，选择同期健康体检人群50名作为对照组，比较各组血清 IL-17、IL-4、IFN-γ、IL-33、免疫球蛋白 E （IgE）水平变化及患者的肺功能，分析细胞因子与患者肺功能的相关性。结果急性发作期、缓解期和对照组患者的血清 IL-17、IL-4、IFN-γ、IL-33及 IgE 水平逐渐降低，差异具有统计学意义（P 〈0.05）。急性发作期组患者的 PEF、FEV1及 FEV1/FVC 均明显低于缓解期组（P 〈0.05）。哮喘患者血清 IL-17、IL-4、IFN-γ和 IL-33水平与 PEF 和 FEV1均呈负相关（P 〈0.05）；而与患者 IgE值呈正相关（P 〈0.05）。结论哮喘是多种细胞因子参与的免疫炎症反应，不同细胞因子的水平升高会加重患者的肺功能障碍，相关细胞因子的监测对判断哮喘的发生、发展具有重要意义。

改善糖化血红蛋白床旁检测一致性的新方法

目的使用具有互通性的质控物质建立具有可操作性的糖化血红蛋白床旁检测量值溯源的新方法，以改善糖化血红蛋白床旁检测的正确性及与中心实验室检测结果的一致性。方法量值溯源研究。由具备IFCC参考网络实验室资质的北京市临床检验中心糖化血红蛋白参考实验室为人源基质冰冻全血样本赋值，然后采用赋值样本于2013年6月校准G8 HBA1c Variant检测系统。依据CLSI EP9－A2－IR指南，使用G8 HBA1c Variant检测系统和DCA Ventage床旁检测系统同时检测50份患者样本和2个浓度水平的糖化血红蛋白商品化质控物质，并分别建立外部校准标准曲线，以比较通过新鲜血和质控物质两种途径建立一致性的效果。再通过患者样本进行验证。采用配对T检验和Passing Bablok线性回归分析。结果实施外部校准前G8 HBA1c Variant 检测系统与DCA Ventage系统的线性回归方程为Y＝0．8995X＋0．3891（R2＝0．9910）。采用新鲜血外部校准后， DCA－G8的平均偏移由外部校准前的－0．40％±0．34％减小至外部校准后0．00％±0．29％。采用验证了互通性的质控物质外部校准后，DCA－G8的平均偏移由外部校准前的－0．40％±0．34％减小至外部校准后0．15％±0．29％。结论使用验证了互通性的质控物质可改善糖化血红蛋白的床旁检测结果与中心实验室检测结果的一致性。（中华检验医学杂志，2015，38：310－312）