低氧状态下IL-6对骨细胞表达RANKL的影响

目的探讨低氧状态下炎症因子白介素-6(IL-6)对骨细胞分泌核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的影响及相关机制。方法建立大鼠下颌截骨术模型,应用IL-6和氯化钴(CoCl2)建立体外低氧炎症微环境培养MLO-Y4小鼠长骨骨细胞系,采用苏木素-伊红(HE)染色、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色和免疫荧光染色观察术后大鼠下颌骨破骨细胞活化情况和低氧诱导因子(HIF-1α)、RANKL的表达水平;利用实时荧光定量聚合酶链反应(RT qPCR)、细胞免疫荧光、蛋白质印迹(Western blot)和小干扰RNA(si RNA)转染实验检测低氧状态下IL-6对MLO-Y4小鼠长骨骨细胞系细胞分泌HIF-1α和RANKL的影响。结果术后2周及4周大鼠下颌骨破骨细胞活化水平和HIF-1α、RANKL表达水平均提高。低氧状态下,IL-6可使MLO-Y4细胞HIF-1α、RANKL的表达水平提高。低氧状态下IL-6转染组的HIF-1α和RANKL蛋白表达水平均低于转染对照组和对照组。结论低氧状态下IL-6可以通过上调MLO-Y4细胞的HIF-1α表达水平促进RANKL的分泌。

低氧状态下HIF-1α对骨细胞凋亡的影响

目的:探究低氧状态下低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)对骨细胞凋亡的影响。方法:用氯化钴(cobalt dichloride,CoCl2)刺激骨细胞系MLO-Y4建立体外低氧骨细胞培养体系。CCK-8实验检测CoCl2对MLO-Y4细胞增殖活性的影响;Hoechst 33342及TUNEL染色检测CoCl2处理后的MLO-Y4细胞的凋亡情况;利用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹(Western blot)和细胞免疫荧光检测CoCl2作用下MLO-Y4细胞表达HIF-1α与凋亡相关因子Caspase-3及Bcl-2的情况;检测HIF-1αsiRNA转染对MLO-Y4细胞表达HIF-1α和促凋亡相关因子Caspase-3的影响。结果:200μmol/L CoCl2作用24 h后,MLO-Y4细胞的增殖率显著下降,并呈浓度和时间依赖性。200μmol/L CoCl2作用24 h可上调MLO-Y4细胞HIF-1α的表达,并促进MLO-Y4骨细胞凋亡;siHIF-1α转染后,MLO-Y4细胞HIF-1α表达下降,促凋亡基因Caspase-3也表现为相同的下降趋势,骨细胞凋亡减少。结论:HIF-1α在体外化学模拟低氧条件下,可促进骨细胞凋亡。