CHMP4A真核表达载体的构建及其对肾透明细胞癌的影响

背景肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)的靶向治疗可显著改善晚期ccRCC患者的预后,寻找新的治疗靶标可为开发新型治疗药物提供依据。目的构建真核表达载体pcDNA3.0-Flag-CHMP4A。在体外细胞实验中检测CHMP4A对ccRCC 786-O细胞增殖和迁移的影响,分析CHMP4A在ccRCC中的表达及对ccRCC患者预后的影响。方法利用PCR技术从乳腺文库中扩增目的基因CHMP4A,通过同源重组将CHMP4A与载体pcDNA3.0连接。786-O细胞转染pcDNA3.0-Flag-CHMP4A后,Western blot方法检测CHMP4A的蛋白表达,CCK-8、克隆形成及划痕实验检测CHMP4A对786-O细胞增殖和侵袭的影响。检索TCGA数据库中ccRCC转录组数据,分析CHMP4A在肿瘤不同分期、分级和淋巴细胞转移组中的表达,应用Kaplan-Meier法分析CHMP4A表达与ccRCC预后的关系。结果成功构建了pcDNA3.0-Flag-CHMP4A真核表达载体,并在786-O细胞中成功表达,体外实验发现Flag-CHMP4A可抑制ccRCC 786-O细胞的增殖和迁移(P<0.05);TCGA数据库显示,CHMP4A是mRNA表达水平与ccRCC患者的分期、分级及淋巴结转移强相关(P<0.01)。CHMP4A高表达组有较长的无病生存期和总生存期(P<0.01)。结论CHMP4A在抑制肿瘤细胞增殖和迁移中发挥了重要作用,其表达与ccRCC患者的预后呈正相关。本研究为ccRCC的治疗提供了潜在靶标。

丙酮酸脱氢酶E1亚基α1在肾透明细胞癌中的表达及影响

背景肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)的代谢特征之一是进行有氧糖酵解,探讨糖代谢通路的关键蛋白对ccRCC的影响具有重要临床意义。目的探究丙酮酸脱氢酶E1亚基α1(pyruvate dehydrogenase E1 subunit alpha 1,PDHA1)在ccRCC中的表达及对ccRCC预后的影响,并在体外细胞实验中检测PDHA1对ccRCC细胞系786-O生长、增殖和迁移的影响。方法检索TCGA数据库中的转录组数据,分析PDHA1在ccRCC和癌旁组织中的表达水平,并根据肿瘤分期、分级和淋巴细胞转移情况,比较PDHA1表达差异。应用Kaplan-Meier法分析PDHA1表达与肿瘤预后的关系,通过基因富集分析,预测PDHA1在肿瘤中发挥功能的信号通路。体外细胞实验,Western blot验证786-O转染后PDHA1的蛋白表达情况。通过CCK-8法、克隆形成及划痕实验,检测PDHA1对786-O细胞生长、增殖和迁移的影响。结果TCGA数据库显示,相比于癌旁组织,ccRCC组织的PDHA1 mRNA水平明显下降,PDHA1的mRNA水平也与ccRCC的分期和分级有关(P<0.01)。PDHA1高表达组有较长的无病生存期和总生存期(P<0.01);体外细胞实验结果表明,与空载体相比,高表达PDHA1后,786-O细胞增殖、克隆形成和迁移能力均明显减弱(P<0.01)。结论PDHA1表达与ccRCC患者预后正相关,在抑制肿瘤细胞生长、增殖及迁移中发挥了重要作用。

真核表达的人Y盒结合蛋白1(YB-1)促进人HepG2肝癌细胞的增殖和迁移

目的构建带有FLAG标签的Y盒结合蛋白1(YB-1)真核表达载体,转染至HepG2肝癌细胞探究YB-1对肝癌细胞增殖和迁移的影响。方法以人卵巢文库为模板并采用PCR扩增出YB-1基因片段,经双酶切后与pcDNA3.0-FLAG载体连接,构建pcDNA3.0-FLAG-YB-1真核表达载体;将其转染至HepG2细胞,通过Western blot法验证YB-1在HepG2细胞的表达;CCK-8法和集落形成实验验证YB-1对HepG2细胞生长的影响;划痕实验验证YB-1对HepG2细胞迁移的影响。结果成功构建出pcDNA3.0-FLAG-YB-1真核重组表达载体,且能在HepG2细胞中表达YB-1蛋白;YB-1能够促进HepG2细胞的增殖和迁移。结论YB-1促进HepG2细胞的增殖和迁移。