浅谈病死动物无害化处理体系建设现状

病死动物的无害化处理工作是当前畜牧业尤其是养殖环节存在的不容回避的问题,事关养殖业的可持续发展,事关环境污染,事关食品安全、民生民心。通过所在县市病死动物无害化处理体系的现状,分析了在病死动物无害化处理过程中存在的主要问题,并提出了针对性的建议。

浅谈病死动物无害化处理体系建设现状

河南省安阳市林州市是全国生猪调出大县，作为畜牧主导产业，2015年年底全市生猪存栏125万头，家禽出栏750万只，牛羊存栏18万头（只）。随着畜牧业的快速发展，在畜禽饲养、调运等过程中，由于疫病、技术等原因必然产生较大数量的病死畜禽。每年约有病死畜禽10万头只，其中能深埋处理的只占1／3，剩余2／3被养殖户随意丢弃，极易造成动物疫病的传播和环境污染问题。

探讨补阳还五汤通过AMPK/ULK1线粒体自噬通路抑制细胞焦亡治疗糖尿病周围神经病变

目的:观察补阳还五汤通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/UNC-51样激酶1(ULK1)线粒体自噬通路抑制细胞焦亡治疗糖尿病周围神经病变(DPN)的作用机制。方法:动物实验采用雄性SPF级SD雄性大鼠(6~7周)60只,按体质量进行编号,计算机产生随机数字法随机分为4组,分别为正常组、模型组、α-硫辛酸组(60 mg·kg^(-1))、补阳还五汤组(15 g·kg^(-1)),每组15只。通过注射链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病模型。造模成功后α-硫辛酸组和补阳还五汤组分别给与相应药物,正常组和模型组给予生理盐水。给药12周结束后检测感觉神经传导速度(SNCV)和机械性痛阈(PWT)。免疫组化和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测背根神经节(DRG)中磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、磷酸化UNC-51样激酶1(p-ULK1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、选择性自噬受体(p62/SQSTM1)、Beclin1、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)的表达。免疫荧光检测gasdermin D的N端(N-GSDMD)表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠空腹血糖显著升高(P<0.01),SNCV、PWT显著降低(P<0.01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1显著降低(P<0.01),p62、NLRP3、N-GSDMD/GSDMD、IL-1β、剪切的(cleaved)Caspase-1/Caspase-1显著升高(P<0.01);与模型组比较,各用药组SNCV、PWT显著升高(P<0.01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1明显升高(P<0.05,P<0.01),p62、N-GSDMD/GSDMD、cleaved Caspase-1/Caspase-1、NLRP3、IL-1β明显降低(P<0.05,P<0.01);与α-硫辛酸组比较,补阳还五汤组SNCV、PWT明显升高(P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p-ULK1/ULK1明显升高(P<0.05),NLRP3、N-GSDMD/GSDMD明显降低(P<0.05)。结论:补阳还五汤通过AMPK/ULK1通路调节线粒体自噬抑制细胞焦亡,防治DPN,其治疗效果较α-硫辛酸可能更好。

补阳还五汤对糖尿病大鼠周围神经线粒体运输的作用

目的:基于线粒体运输探讨补阳还五汤对糖尿病周围神经病变(DPN)的防治作用机制。方法:SD大鼠用高糖高脂饲料联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病。45只糖尿病大鼠随机分为DPN组、α-硫辛酸组、补阳还五汤组,每组15只,另设15只标准喂养大鼠为正常组。α-硫辛酸组、补阳还五汤组分别给与α-硫辛酸60 mg·kg^(-1)·d^(-1)、补阳还五汤15 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃治疗12周。给药结束后检测机械性痛阈(PWT)和运动神经传导速度(MNCV),取双侧坐骨神经及双侧L4-5的背根神经节。用50 mmol·L^(-1)葡萄糖和250μmol·L^(-1)棕榈酸钠干预NSC34细胞建立细胞损伤模型,随机分为空白组(10%空白血清)、DPN组(10%空白血清)、α-硫辛酸组(10%α-硫辛酸含药血清)、补阳还五汤组(10%补阳还五汤含药血清)、补阳还五汤加Compound C(CC)组(10%补阳还五汤含药血清+10μmol·L^(-1)CC),分别干预24 h。免疫荧光法、免疫组化法和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测各实验组磷酸化单磷酸腺苷活化蛋白激酶(p-AMPK)、磷酸化环磷腺苷效应元件结合蛋白(p-CREB)及线粒体运输蛋白驱动家族蛋白成员5A(KIF5A)、细胞质动力蛋白1中间链2(DYNC1I2)的表达。结果:动物实验中,与正常组比较,DPN组大鼠空腹血糖显著升高(P<0.01),MNCV、PWT均显著降低(P<0.01);KIF5A、p-AMPK/AMPK、p-CREB/CREB显著降低(P<0.01),DYNC1I2表达显著升高(P<0.01)。与DPN组比较,α-硫辛酸组及补阳还五汤组大鼠MNCV、PWT显著升高(P<0.01);KIF5A、p-AMPK/AMPK、p-CREB/CREB明显升高(P<0.05,P<0.01);DYNC1I2明显降低(P<0.05,P<0.01)。与α-硫辛酸组比较,补阳还五汤组MNCV、KIF5A表达明显升高(P<0.05),DYNC1I2表达显著降低(P<0.01)。细胞实验中,与空白组比较,DPN组KIF5A、p-AMPK/AMPK、p-CREB/CREB显著降低(P<0.01),DYNC1I2表达显著升高(P<0.01)。与DPN组比较,α-硫辛酸组及补阳还五汤组KIF5A、p-AMPK/AMPK、p-CREB/CREB明显升高(P<0.05,P<0.01),DYNC1I2显著降低(P<0.01)。与α-硫辛酸组比较,补阳还五汤组KIF5A表达明显升高(P<0.05)。与补阳还五汤组比较,补阳还五汤加CC组KIF5A、DYNC1I2、p-AMPK/AMPK、p-CREB/CREB显著降低(P<0.01)。结论:补阳还五汤可能通过AMPK/CREB通路调节线粒体顺行运输,发挥神经保护作用,从而防治DPN。