重组角蛋白单体外源表达、纯化及鉴定

为了制备具有生物活性的可溶性重组角蛋白单体,构建能够外源表达重组角蛋白的重组菌株BL21(DE3)-pET32a(+)-Keratin。使用最适诱导条件(0.5 mmol/L IPTG,18℃培养15 h)诱导重组角蛋白基因表达,经Ni柱亲和层析法纯化得到蛋白产量约为40 mg/L,浓度约为2 mg/mL,Western Blot证实此蛋白是重组角蛋白。S.maltophilia DHHJ在重组角蛋白M9培养基中能够正常生长且不会产生絮状沉淀,与化学法制备的角蛋白相比,重组角蛋白溶解性更高。这更有利于S.maltophilia DHHJ降解角蛋白分子过程的研究。

角蛋白降解能力差异菌株筛选体系的建立

以微生物降解为主的羽毛生物炼制是资源化利用其的重要手段之一,但机理不明是限制其进一步应用的瓶颈。突变体库筛选性状变异菌株的正向遗传学是研究分子机理的常用方案,该方案要求高效可靠的筛选方法。然而,目前依靠测酶活方法来决定降解能力,费时费力,难以用于大规模筛选。本文通过优化羽毛培养基成分及接种菌浓度,建立了一种用于筛选不同角蛋白降解能力微生物的筛选体系。利用该体系分析由mini Tn10构建的S. maltophinia DHHJ突变体库,得到了6株羽毛角蛋白降解能力减弱的突变体,筛选结果与酶活测试100%一致。该研究结果为寻找与角蛋白降解相关基因奠定了基础。

一株降解煤油菌株的筛选与鉴定

本文通过从污水处理厂活性污泥中分离得到一株高效降解轻油(煤油)细菌5092-2,通过形态学、16S rRNA鉴定该菌为Mangroveibacter sp.。进一步对其生长条件进行了研究,发现该菌在23℃到38℃、pH为5.0到9.0范围内生长无明显差异。在温度为35℃,pH 7.2~7.4,160 r/min培养7 d,菌株降解煤油的能力达到52.3%,具有进一步研究的价值。