AMA-M2阳性的原发性胆汁性肝硬化患者生物化学指标特点分析

目的分析抗线粒体M2亚型抗体阳性(AMA-M2)的原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者生物化学指标特点,为临床PBC诊治提供帮助。方法对本院2010年8月-2012年3月280例AMA-M2阳性的PBC患者分别检测血清蛋白、脂类、胆红素及酶类等16项血清生物化学指标。采用毛细电泳技术,分析患者6种血清蛋白变化情况。采用光电比色法和发色(吸光度)法分别检测患者WBC、RBC、HGB、PLT以及PT等临床血液学指标。采用魏氏法检测患者血沉变化。结果生化指标检测结果显示,血清蛋白及脂类以ALB、TC异常率最高,分别为52%、40%。超过50%的患者出现酶类及胆红素代谢结果异常,异常率由高到低分别为GGT(96%)、ALP(93%)、TBA(81%)、AST(73%)、DB(66%)、CHE(66%)、LAP(63%)、ALT(61%)、TB(54%),其中以DB、GGT、TBA变化幅度最高[≥2倍正常值上限(ULN)],其次为ALP、TB、ALT、AST(1倍ULN),LAP低于1倍ULN。患者血清蛋白电泳结果异常主要体现在γ球蛋白和白蛋白百分比,异常率分别为71%和57%,且前者出现低于1倍ULN升高。近半数患者出现临床血液学指标变化,异常率由高到低是:ESR、HGB、RBC、PT、PLT、WBC,其中以ESR的异常率最为突出84%,其余依次为HGB(49%)、RBC(46%)、PT(44%)、PLT(41%)、WBC(39%),变化幅度以ESR最高(1倍ULN),其次为RBC、HGB、PT(≤1倍ULN)。结论 PBC患者血清蛋白和脂类、酶类和胆红素代谢以及血清蛋白分布等多种生化指标变化特点,结合临床血液学特点,将为PBC的临床诊断提供重要帮助。

化学发光酶免疫分析法定量检测人血清层粘连蛋白

目的建立检测人血清层粘连蛋白(LN)的化学发光酶免疫分析法(CEIA)。方法用3μg/mL抗人LN单抗包被微孔板制成固相抗体,辣根过氧化物酶标记抗人LN单抗浓度为1∶2 000,建立检测人血清LN浓度的CEIA法。评价该法的线性范围、灵敏度、稳定性等性能指标;并与ELISA法检测LN进行比对;初步检测100例健康献血员血清LN水平。结果该法线性范围为22～1 635 ng/mL,灵敏度为12.2 ng/mL,批内、批间变异系数均<10%,检测高、中、低值LN血清的回收率分别为100.9%、95.2%和105.0%;试剂在4℃和37℃条件下至少稳定7 d;健全性良好;与ELISA法检测LN结果差异无统计学意义(t=0.299,P>0.05);100例健康献血员LN水平为(44.9±16.3)ng/mL。结论成功建立定量检测LN的CEIA法,该法性能较好,可用于临床检测。

糖尿病性白内障超声乳化术后角膜水肿的观察及护理

目的:总结糖尿病性白内障超声乳化术后角膜水肿的观察要点及护理措施。方法:对2011~2013年我院收治的117例(159眼)糖尿病性白内障超声乳化术患者采取眼部观察、心理护理、一般护理及眼部护理等措施。结果:159眼术后发生角膜水肿38眼,发生率为23.9%。其中轻度24眼,中度11眼,重度3眼。结论:术前做好术前检查,控制血糖;术中积极配合;术后加强观察和护理,早期发现和及时处理角膜水肿,可降低角膜水肿的发生率。

翼状胬肉切除联合角膜缘干细胞移植效果观察

目的探讨翼状胬肉切除联合角膜缘干细胞移植治疗翼状胬肉的效果。方法随机选取我科2015年1月—2016年1月收治的翼状胬肉患者100例(118眼),按照治疗方法的不同分为观察组与对照组,观察组50例(62眼)采取翼状胬肉切除联合角膜缘干细胞移植术治疗,对照组50例(56眼)采取翼状胬肉切除联合结膜瓣转移术治疗,给予围术期综合护理干预。观察比较2组患者手术创面修复时间、治愈率以及术后不良反应情况的差异。结果观察组创面修复时间、术后不良反应少于对照组,治愈率高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论翼状胬肉切除联合角膜缘干细胞移植治疗翼状胬肉治愈率高,而且给予良好护理干预后不良反应较少,创面修复较快,安全有效。

TC/HDL-C比值及超敏C反应蛋白与糖尿病视网膜病变相关性研究

目的探讨血脂组分异常及超敏C反应蛋白(hs-CRP)与糖尿病视网膜病变进展的相关性。方法对2015年7月至2017年7月该院内分泌科糖尿病住院患者进行眼底检查,通过眼底荧光素钠造影根据病变程度分为3组,未发现视网膜病变组(A组),视网膜病变非增殖期组(B组),视网膜病变增殖期组(C组),检测3组的血脂组分及血清hs-CRP水平,并计算总胆固醇(TC)/高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)比值,用SAS9.4统计软件进行统计学处理。结果糖尿病视网膜病变患者TC/HDL-C比值及血清hs-CRP水平明显升高,3组的hs-CRP水平、TC/HDL-C比值分别与健康对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中A组分别与B组、C组的hs-CRP水平,TC/HDL-C比值比较,差异均有统计学意义(P<0.05);B组和C组的hsCRP水平,TC/HDL-C比值比较差异无统计学意义(P>0.05)。采用线性相关性分析血清hs-CRP水平和TC/HDL-C比值,发现两者具有正向相关性,推测有正向协同作用。结论血清hs-CRP的检测对糖尿病视网膜病变的发生、病情评估及预后具有重要的临床应用价值;TC/HDL-C比值所反映的血脂组分异常也是评估糖尿病视网膜病变发生进展的一个重要的因素。

亲和吸附纯化甲胎蛋白异质体方法的建立

目的利用小扁豆凝集素（LCA）建立基于微量离心柱的甲胎蛋白异质体L3（AFP—L3）的纯化方法。方法采用硫酸铵分级沉淀的方法由小扁豆中提取凝集素，偶联到活化的琼脂糖凝胶4B（sephrose4B）上，灌注离心柱，制备AFP—L3亲和吸附离心管。血清加入离心管后经吸附和洗脱，便可获得纯化的AFP—L3。随机选取10例AFP阳性患者血清，应用亲和吸附纯化法纯化AFP．L3后应用电化学发光法检测，并与传统的亲和免疫电泳方法相比较。结果10例患者血清经纯化后，AFP-L3检测结果有8例〉5ng／ml，亲和免疫电泳有6例呈现阳性反应。结论成功建立基于微量离心柱的亲和吸附纯化AFP—L3的方法，该方法具有较高的灵敏度，重复性好并且操作简便更利于临床实验室应用。

血清标志物GP73在原发性肝癌诊断中的作用

目的分析GP73在原发性肝癌诊断中的作用，探讨血清GP73和AFP联合检测对原发性肝癌诊断的意义。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）定量检测60例体检正常者（正常对照）、178例慢性肝炎或肝硬化（CH／LC）患者和194例原发性肝癌（PHC）患者血清中的GP73，同时采用电化学发光法检测血清中AFP的水平。结果经Kruskal—Wallis检验正常对照组、CH／LC组和PHC组GP73表达水平的差异有统计学意义（P〈0．001）且PHC组的GP73水平明显高于CH／LC组（P〈0．001）。以ROC曲线确诊PHC的GP73临界值为190．7ng／ml，AFP的临界值为35．2ng／ml，单项检测时，GP73的敏感度和特异度分别为66．5％和86．6％，AFP的敏感度与特异度分别为58．8％和83．7％。GP73和AFP联合检测时敏感度与特异度分别为85．6％和81．5％。结论GP73对PHC的诊断有较好的敏感度和特异性，血清GP73联合AFP检测能够有效地提高PHC的诊断效率。

高尔基体蛋白73原核表达系统的构建及单克隆抗体的制备

目的克隆、表达高尔基体蛋白73（GP73），并制备单克隆抗体。方法用逆转录聚合酶链反应法从人肝癌细胞系HepG2细胞中扩增GP73编码序列，将产物与pQE31载体连接，转化人大肠埃希菌BL21，诱导表达后通过His标签进行纯化，用纯化后的蛋白免疫BALB／c小鼠，采用常规的细胞融合技术制备单克隆抗体，并对其进行鉴定。结果重组载体经序列分析与报道序列同源性100％，并获得了重组蛋白。筛选出5株能稳定分泌抗GP73的单克隆抗体杂交瘤细胞株，免疫球蛋白类型有2株为IgGl类。WesternBlot印迹显示这些单抗能特异结合GP73蛋白。结论成功构建了人高尔基体蛋白73原核表达体系，并获得了单克隆抗体。

临床实验室仪器间比对实验探讨

目的按照ISO15189要求对两台强生VITROS3600化学发光分析仪上的相同项目进行比对试验，以评估检测结果的一致性。方法分别使用两台仪器对anti—HCV的精密度，准确度进行验证试验，并对临床收集的Anti-HCV阴性10份、阳性10份和弱阳性20份血清样本共40份进行比对试验，检测结果行统计学分析。结果两台仪器阴性和阳性质控品批内精密度变异系数分别为5％、4％、7．14％和7．23％，批间精密度分别为9．47％、7．7％和8．04％、7．6％，均小于IS015189要求的CV（15％），两仪器准确度为100％，质控品检测结果差异无统计学意义（P〈0．05）。临床样本检测结果相关性分析R^2=0．9984，具有良好的一致性。结论两台强生VITROS3600化学发光分析仪检测结果，一致性良好，具有可比性。

高尔基体蛋白73定量检测方法的建立

目的建立人血清中高尔基体蛋白73（GP73）的定量酶联免疫吸附试验（ELISA）检测方法。方法辣根过氧化物酶标记GP73单抗，优化各类反应液的工作浓度和各种反应条件，建立双抗体夹心的ELISA检测方法；同时评价所建立方法的灵敏度、线性范围、特异性、稳定性等性能指标。结果所建立方法的灵敏度为18．5ng／ml，线性范围为25～500ng／ml，批内、批间变异均〈10％。检测GP73临床高、中、低值血清回收率为分别为95．3％、92．6％和103．7％；在4℃和37℃条件下分别进行了3、5、7d的稳定性考察，线性相关系数均〉0．98，标准偏差〈10％。结论成功建立了定量检测血清中GP73的方法，该方法能够满足临床检测的需球。

两种不同方法检测HIV抗体结果的比较

目的对化学发光和酶联免疫法（ELISA）检测HIV抗体的方法进行评价，比较检测结果的差异，为HIV初筛的方法的选择和临床应用提供参考。方法以HIV抗体确认实验结果为金标准，对3000例我院就诊的患者同时应用两种方法检测，对两结果进行比较，评价两种检测方法筛查HIV感染者的特异性、灵敏度。结果ELISA检测法阳性率为0．93％，特异性为99．93％，灵敏度为89．66％，化学发光法阳性率为1．03％，特异性为99．93％，敏灵度为100％。结论两种方法均适合HIV的初筛，都具有较高的特异性，化学发光法的灵敏度要优于ELISA方法。

AMA-M2阳性的原发性胆汁性肝硬化患者免疫学特点分析

目的分析抗线粒体M2亚型抗体阳性(AMA-M2)的原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者免疫学等实验室诊断特点,推进临床PBC的早期诊断和治疗。方法对400例AMA-M2阳性的PBC患者采用间接免疫荧光法检测血清ANA、AMA、SMA、LKM和PCA等5种自身抗体。采用免疫印迹法检测患者血清7种主要肝抗原:Sp100、PML、gp210、LKM-1、LC-1、SLA/LP和Ro-52。应用全自动生化分析仪检测患者ALP、γ-GT等生化指标,全自动血细胞分析仪和凝血分析仪检测患者WBC、RBC、HGB、PLT和PT等血液学指标。结果患者自身抗体检测:ANA荧光模型主要包括核膜型、多核点型、着丝点型和胞浆颗粒型,阳性率分别为70%、52%、43%、3%。荧光模型组合方式包括:多核点型+核膜型、着丝点型+核膜型、着丝点型、多核点型、胞浆颗粒型以及仅AMA阳性者,阳性率分别为42%、28%、15%、10%、3%、2%,荧光滴度均≥1∶320。SMA、PCA、LKM阳性率均低于5%。患者主要肝抗原为Ro-52、gp210、PML和Sp100,阳性率分别为53%、44%、43%、24%,荧光滴度≥1∶320,而LKM-1、LC-1、SLA/LP阳性率均低于5%。PML、Sp100及Sp100+PML与gp210的阳性一致率分别为29%、11%、7%。临床血液检测结果显示有41%的患者WBC和RBC降低,53%的患者HGB降低,38%的患者PLT降低,而有42%的患者PT延长。生化检测结果显示有96%和93%的患者ALP和γ-GT升高。结论 AMA-M2阳性的PBC患者具有高滴度、特征性自身抗体荧光模型及自身肝抗原,结合临床血液及生化检测结果将为临床诊断提供重要帮助。

乙型肝炎病毒外膜大蛋白检测方法的建立

目的建立人血清中乙型肝炎病毒外膜大蛋白（HBV-LP）的酶联免疫吸附试验（ELISA）检测方法。方法辣根过氧化物酶标记HBV-LP单抗，优化各类反应液的工作浓度和各种反应条件，建立双抗体夹心的ELISA检测方法；同时评价所建立方法的灵敏度、特异性、稳定性等性能指标。结果所建立方法的灵敏度为5ng／ml，批内、批间变异均小于10％。在4℃和37℃条件下分别进行了3、5、7d的稳定性考察，线性相关系数均〉0．98，标准偏差〈10％。结论成功建立了血清中HBV—LP的检测方法，该方法性能能够满足临床检测的需求。

微孔板化学发光酶免疫分析法定量检测基质金属蛋白酶抑制剂-I的方法研究

目的建立定量检测人血清中金属蛋白酶抑制剂-I（TIMPI）的微孔板化学发光酶免疫分析方法。方法以辣根过氧化物酶标记TIMPI单抗，以过氧化氢（H2O2）一鲁米诺（1uminol）化学发光体系作为检测体系，采用双抗体夹心反应模式，优化筛选温育条件、抗体包被条件、酶标记物稀释度和发光反应时间等指标。同时进行了回收实验，热稳定性实验，并随机选取60例肝纤维化患者血清与进口试剂进行比对实验。结果所建立方法的线性范围为0．2—12rig／ml，相关系数0．996，检出限为0．12ng／ml，批内、批间变异均小于10％。检测TIMPI的临床高、中、低值血清回收率为分别为100．6％、96．5％和106．5％；在4℃和37℃条件下分别进行了3、5、7d的稳定性考察，线性相关系数均〉0．98，标准偏差〈6％；比对实验分析证明2种方法相关性具有统计学意义。结论成功建立定量TIMPI微孔板化学发光酶免疫分析方法，该方法具有较高的准确性、灵敏度及良好的重复性，并与进口试剂检测结果一致。

人基质金属蛋白酶抑制剂Ⅰ原核核表达系统的构建及单克隆抗体的制备

目的 制备针对人基质金属蛋白酶抑制剂Ⅰ （TIMP-Ⅰ）融合蛋白的单克隆抗体.方法 用逆转录聚合酶链反应法从纤维化的肝组织中扩增TIMP-Ⅰ编码序列,产物克隆入pQE31载体,转化大肠埃希菌BL21,诱导表达后通过6×His标签进行纯化,用纯化后的蛋白免疫BALB/c小鼠,采用常规的细胞融合技术制备单克隆抗体,并进行鉴定.结果 成功构建了TIMP-Ⅰ原核表达体系,并获得了重组蛋白.筛选出4株能稳定分泌抗TIMP-Ⅰ的单克隆抗体杂交瘤细胞株,免疫球蛋白类型有3株为IgGl类.Western Blot印迹显示这些单抗能特异结合TIMP-1蛋白.结论 成功构建了人基质金属蛋白酶抑制剂Ⅰ原核表达体系,并获得了单克隆抗体.

血清脂蛋白比值与糖尿病黄斑水肿发生及严重程度的相关性分析

目的探讨血清脂蛋白比值(ApoB/ApoA-1)与糖尿病黄斑水肿(diabetic macular edema,DME)的发生及进展关系。设计回顾性病例系列。研究对象2016年3月至2018年3月重庆渝北区医院眼科和内科住院的糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)患者279例,其中DME患者82例。方法对279例DR住院患者进行眼底检查和黄斑相干光断层扫描(optic coherence tomography,OCT),发现DME患者82例设为病例组(DME组),其余197例设为阳性对照组(非DME组),并设立健康对照组80例。82例DME患者再根据黄斑水肿程度,分为轻度(Ⅰ组)、中度(Ⅱ组)和重度组(Ⅲ组)。收集研究对象的身高、体重、糖化血红蛋白,及ApoB和ApoA-1等血脂指标,并计算体质指数、ApoB/ApoA-1比值。比较各组相关指标的差异。主要指标体质指数,糖化血红蛋白浓度,ApoB/ApoA-1比值和黄斑水肿分级。结果DME组、非DME组及健康对照组的体质指数、糖化血红蛋白、ApoB/ApoA-1比值的差异均有统计学意义(P均<0.001);轻、中、重度DME患者的ApoB/ApoA-1比值分别为1.01±0.07、1.18±0.04和1.32±0.08(F=142.04,P<0.001)。偏相关性分析排除混杂因素影响后,DME的严重程度与ApoB/ApoA-1比值成正相关(r=0.725,P<0.001)。结论血清脂蛋白比值增高是DME病情发生及进展的高危因素,合理控制血脂可能有利于降低DME的发病风险,ApoB/ApoA-1比值可以作为DME预测及治疗过程中的重要监控指标。

Ⅲ型前胶原氨基端肽的化学发光定量检测

目的建立人血清中Ⅲ型前胶原氨基端肽（PⅢNP）的定量微孔板化学发光酶免疫检测方法。方法辣根过氧化物酶标记PⅢNP单抗，选用鲁米诺化学发光体系检测，优化各类反应液的工作浓度和各种反应条件，建立双抗体夹心的检测方法；同时评价所建立方法的灵敏度、特异性、线性范围、稳定性等性能指标；并应用临床血清与进口试剂进行比对实验。结果所建立方法的线性范围为0．8—85ng／ml，灵敏度0．5rig／ml，批内、批间变异均〈10％。检测PⅢNP的临床高、中、低值血清回收率分别为96．2％、91．2％和101．1％；在4℃和37℃条件下分别进行了3d、5d．7d的稳定性考察，线性相关系数均〉0．99，标准偏差〈6％；比对实验分析显示与进口试剂相关性具有统计学意义。结论成功建立了定量PmNP化学发光酶免疫分析方法，并且有较好的准确性、灵敏度、重复性，与进口试剂检测结果等效。