IL-33在哮喘合并间歇性缺氧发病过程中的作用

目的探讨白介素-33(Interleukin-33,IL-33)在哮喘合并间歇性缺氧发病过程中的作用。方法32只雌性C57BL/6J小鼠随机分为对照组(NS-RA组),间歇性缺氧组(NS-IH组),哮喘组(OVA-RA组)和哮喘合并间歇性缺氧组(OVA-IH组),采用qRT-PCR以及Western Blot测定各组小鼠肺组织中IL-33和血管内皮生长因子(VEGF)的表达,通过ELISA法测定肺组织中炎症因子IL-33、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,采用HE染色、Masson染色分析小鼠肺组织病理变化以及胶原沉积情况。结果与NS-RA组相比,其余3组小鼠肺组织中IL-33与VEGF mRNA和蛋白表达均增加,其中OVA-IH组增加最显著,差异有统计学意义(P<0.001)。与NS-RA组相比,其余3组小鼠肺组织中IL-33和IL-6水平升高,其中OVA-IH组升高最明显(P<0.01~0.05);与NS-IH组相比,OVA-IH组小鼠肺组织中TNF-α水平升高且差异有统计学意义(P<0.05)。小鼠肺组织中IL-33和TNF-α(r=0.5760,P<0.01)、IL-33和IL-6(r=0.7653,P<0.0001)均呈中度正相关。除NS-RA组外,其余3组小鼠气道增厚,支气管壁结构受损,血管壁增厚,支气管以及血管周围有大量炎性细胞浸润和蓄积。与NS-RA组相比,其余3组气道黏膜中的胶原纤维表达增加,并有明显的蓝色胶原沉积。结论IL-33可能参与了哮喘合并间歇性缺氧的发病过程,考虑与IL-33和炎症因子协同作用并导致VEGF的表达增加有关。

细粒棘球蚴抗原B和钙结合蛋白1调节小鼠免疫性血小板减少症机制研究

目的探讨细粒棘球蚴抗原B(AgB)和钙结合蛋白1(CBP1)在小鼠免疫性血小板减少症(ITP)模型中基于TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路的保护作用及机制。方法42只健康雌性BALB/c小鼠随机分为对照组、ITP组、AgB组、AgB+ITP组、CBP1组、CBP1+ITP组,每组7只。AgB组和AgB+ITP组小鼠每天腹腔注射AgB100μg(200μl),CBP1组和CBP1+ITP组小鼠每天腹腔注射CBP1100μg(200μl),对照组和ITP组小鼠每天腹腔注射PBS 200μl;均连续5 d。随后ITP组、AgB+ITP组、CBP1+ITP组小鼠每天腹腔注射抗CD41单克隆抗体3μg(200μl)进行ITP造模,对照组、AgB组、CBP1组小鼠每天腹腔注射PBS 200μl;均连续注射5 d。检测造模前1天(D0)、造模期间(D1~D5)、造模结束次日(D6)小鼠外周血血小板计数的变化;造模结束次日安乐死处死小鼠,取脾脏和肝脏,称重并计算脏器指数;逆转录实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测小鼠脾组织Toll样受体4(TLR4)、NOD样受体热蛋白结构域蛋白3(NLRP3)、凋亡点状蛋白(ASC)、IL-1βmRNA相对转录水平;蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测小鼠脾脏TLR4、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、核因子κB(NF-κB)、天冬氨酸蛋白水解酶1(caspase-1)的相对表达水平。组间比较采用单因素方差分析,多组间两两比较采用LSD-t检验。结果ITP组小鼠D1~D6的血小板计数分别为(102.1±6.8)×10^(9)/L、(234.7±18.1)×10^(9)/L、(229.7±45.8)×10^(9)/L、(316.7±26.8)×10^(9)/L、(320.6±60.5)×10^(9)/L、(179.1±22.2)×10^(9)/L,均低于对照组的(526.6±90.4)×10^(9)/L、(679.3±58.5)×10^(9)/L、(828.0±61.0)×10^(9)/L、(855.3±101.9)×10^(9)/L、(784.1±177.7)×10^(9)/L、(877.4±107.5)×10^(9)/L(LSD-t=-4.2、-5.5、-6.9、-6.3、-3.9、-4.8,均P<0.05);AgB+ITP组和CBP1+ITP组D6的血小板计数为(512.6±100.5)×10^(9)/L、(511.1±114.8)×10^(9)/L,均高于ITP组(LSD-t=2.3、2.3,均P<0.05)。ITP组小鼠脾脏指数为12.1±1.2,高于对照组的6.3±0.4(LSD-t=6.8,P<0.01);AgB+ITP组脾脏指数为9.0±0.3,较ITP组下降(LSD-t=-3.6,P<0.01)。qRT-PCR结果显示,ITP组脾组织TLR4、NLRP3、ASC、IL-1βmRNA相对转录水平分别为7.5±2.1、5.3±1.5、3.6±0.7、4.0±0.9,均高于对照组的1.3±0.3、1.2±0.2、1.2±0.3、1.0±0.1(LSD-t=4.8、4.5、4.2、5.2,均P<0.01);AgB+ITP组的相对转录水平为1.7±0.3、0.6±0.1、1.0±0.3、0.7±0.1,CBP1+ITP组为1.7±0.1、1.0±0.3、1.1±0.4、0.4±0.1,均较ITP组下降(LSD-t=-4.6、-5.1、-4.5、-5.9,-4.5、-4.7、-4.4、-6.3,均P<0.01)。Western blotting结果显示,ITP组脾组织TLR4、iNOS、NF-κB p65、caspase-1的相对表达水平为0.7±0.1、0.5±0.0、1.4±0.2、1.5±0.2,均高于对照组的0.2±0.0、0.3±0.0、0.9±0.2、0.8±0.2(LSD-t=8.6、6.5、3.1、3.5,均P<0.01);AgB+ITP组相对表达水平为0.4±0.0、0.4±0.0、0.9±0.1、1.0±0.1,CBP1+ITP组为0.2±0.1、0.2±0.0、0.6±0.1、0.7±0.1,均较ITP组下降(LSD-t=-6.1、-2.8、-3.1、-2.3,-8.9、-7.1、-4.9、-4.2,均P<0.05)。结论AgB和CBP1对小鼠ITP具有保护作用,其作用机制与TLR4/NF-κB/NLRP3通路的调节有关。