生理浓度氨基酸对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响

猪作为模式动物由来已久，相比小鼠等模式生物在生理学、解剖学和疾病发生机理等方面都与人类极为相似，使其比其他动物模型在生物和医学研究领域中都具有更为重要的研究和应用价值。体外成熟卵母细胞是进行转基因猪、克隆猪等研究的重要支持，

通过集成CRISPR/Cas9、受精卵注射和核移植技术快速高效制备胰腺缺陷小型猪模型

小型猪在体型大小,生理特点上与人类具有的很大的相似性,因此愈来愈多的应用于人类疾病模型及再生医学相关模型.多能性细胞的分化潜能赋予了其器官再生的能力,继大小鼠器官异种再造后人类器官在猪模型中的制备已经成为近几年的研究热点.为了得到胰腺缺陷小型猪,本研究应用CRISPR/Cas9技术,受精卵胞质注射技术联合核移植技术快速高效地获得了基因型相同的胰腺缺陷的小型猪模型,为小型猪疾病模型的制备,人类器官异体再造提供了借鉴意义.

不同培养体系对鼠-猪异种嵌合胚胎发育和嵌合能力的比较

近年来,随着干细胞分化与再生医学研究的不断深入,异种嵌合已成为当前干细胞和再生医学领域的热点问题,并有望为未来解决器官移植供体来源严重短缺等再生医学难题开辟新的方向。异种嵌合以及异种器官再造过程中面临众多科学问题和技术难题,而异种嵌合过程中嵌合胚胎时期的选择,后续培养液的选择以及这些环节所造成的供体细胞与受体胚胎之间的发育平衡成为建立异种器官再造的第一个科学问题。猪由于具有与人类器官大小相似、繁殖快等特点,成为异种嵌合最适合的潜在研究对象。为了提高鼠-猪异种嵌合胚胎中小鼠供体细胞——诱导多潜能干细胞(Induced pluripotent stem cells,i PSCs)的存活率和增殖率,我们尝试以i PSCs培养液(N2B27)以及N2B27→PZM-3梯度更换的培养液(N2B27(3.5 h))作为研究异种嵌合胚胎体外发育培养的对象,并与猪胚胎培养液(PZM-3,Porcine zygotic medium)体系下发育进行比较,从而评价了这3种培养液在8-细胞和囊胚期注射后,对嵌合胚胎后续发育的影响及嵌合情况。结果显示,8-细胞期注射后,PZM-3不仅对嵌合胚胎的后续发育较为有利,更有利于小鼠i PS嵌合到猪胚胎中;囊胚期注射后3种培养体系下GFP阳性嵌合率差异不显著,但其嵌合率显著低于8-细胞期嵌合率。结果表明,PZM-3培养体系更有利于鼠-猪异种嵌合胚胎的体外发育,对8-细胞期胚胎进行嵌合操作有益于提高鼠-猪异种嵌合后胚胎的嵌合率。