重建钢板联合术后早期功能训练治疗肩胛骨骨折的临床研究

肩胛骨骨折由于其解剖位置的特点,多在遭受高能量暴力的情况下发生,占所有骨折的1%[1]。多数肩胛骨骨折保守治疗可以获得满意的治疗效果,但对于不稳定的肩胛骨骨折,通常需要切开复位内固定[2],重建钢板固定肩胛骨骨折疗效可靠,为早期开展肩关节功能训练提供了条件。

siRNA抑制人高迁移率族蛋白1表达对前列腺癌PC-3增殖的影响

目的:研究小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因的表达对人前列腺癌细胞PC-3增殖的影响。方法:构建真核表达载体Pgenesil-1/HMGB1 siRNA,在脂质体Lipofectamine 2000的介导下转染前列腺癌PC-3细胞株,通过RT-PCR和Western Blot检测HMGB1的mRNA及蛋白质的变化;流式细胞仪检测细胞周期;噻唑蓝(MTT)检测细胞生长曲线。观察转染后PC-3细胞HMGB1基因表达和体外增殖活性的变化。结果:成功构建siRNA表达载体Pgenesil-1/HMGB1 siRNA,所获表达载体转染可使PC-3细胞HMGB1 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05),并能有效抑制PC-3增殖活性(P<0.05)。结论:应用siRNA干扰技术能有效的抑制HMGB1基因的表达,同时也可有效抑制癌细胞的体外增殖活性,为肿瘤的生物学治疗提供新思路。

关节镜下治疗不同时期胫骨髁间棘骨折

目的评价关节镜治疗早期及延期胫骨髁间棘骨折的手术方法及疗效。方法关节镜下治疗33例胫骨髁间棘骨折,其中早期手术（≤2周）17例,延期手术（〉2周）16例,比较两组膝关节功能恢复程度。结果 33例均获随访,时间26~28个月。骨折临床愈合时间6~9个月。无感染、关节强直等并发症发生。X线片显示33例均达解剖复位。关节功能恢复按Lysholm标准评定：早期手术组优秀15例,满意2例;延期手术组优秀8例,满意6例,差2例;两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论关节镜下治疗胫骨髁间棘骨折是一种非常有效的方法,早期手术（≤2周）比延期手术（〉2周）膝关节功能恢复更好。

有限切开手术治疗老年股骨髁上骨折的临床研究

目的探讨有限切开锁定钢板和逆行髓内钉手术治疗老年人股骨髁上骨折的疗效。方法 2000年1月至2008年1月,治疗老年人闭合性股骨髁上骨折69例,采用有限切开锁定钢板治疗37例,男性15例,女性22例,年龄61～82岁,平均71.5岁,受伤至手术时间3～9 d,平均6 d;采用有限切开逆行髓内钉治疗32例,男性19例,女性13例,年龄60～86岁,平均73岁,受伤至手术时间3～7 d,平均5 d。结果 69例均获随访,随访时间25～39个月,平均28个月,无内固定断裂、感染。参考K ilm er评价标准评分,有限切开逆行髓内钉组优19例,良11例,一般2例,优良率93.75%;有限切开锁定钢板组优14例,良17例,一般6例,优良率83.78%;差异有统计学意义(P<0.05)。有限切开逆行髓内钉组手术时间(73±28)min,出血量(530±140)mL,术后并发症4例;有限切开锁定钢板组手术时间(55±23)min,出血量(180±50)mL,无术后并发症,差异有统计学意义(P<0.05)。结论有限切开锁定钢板和逆行髓内钉是治疗老年人股骨髁上骨折的有效方法,逆行髓内钉的疗效优于锁定钢板,但锁定钢板手术简单、出血量和并发症少,因此老年患者应根据临床特点灵活选择,以减少手术不良反应,提高疗效。

下调人高迁移率族蛋白1对人前列腺癌细胞PC-3的影响

目的研究小干扰RNA(siRNA)抑制高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因对PC-3侵袭和转移的影响。方法构建真核表达载体Pgenesil-1/HMGB1siRNA,转染PC-3细胞系,通过RT-PCR和Western blot检测HMGB1的mRNA及蛋白;通过细胞划痕、transwell和明胶酶谱分析检测PC-3体外侵袭能力。结果成功构建siRNA表达载体Pgene-sil-1/HMGB1siRNA,可使PC-3细胞HMGB1mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05),并能有效抑制PC-3体外侵袭和转移活性(P<0.05)。结论应用siRNA技术能有效的抑制基因的表达,同时也能有效抑制PC-3细胞的体外侵袭和转移,为肿瘤的生物学治疗提供了新思路。

有限元法分析不同截肢术后胫腓骨远端的应力和位移变化

建立小腿传统截肢和骨肌肉成形切断术两种手术的动物模型,在Simpleware 6.0和Abaqus 6.12软件中建立两种实体模型和有限元模型。通过模拟生理条件下应力做加载,进行有限元分析,计算表明在相同的负载条件下,骨肌肉成形切断术残端胫腓骨的相对位移在对抗屈曲、伸直、压缩载荷时比传统截肢术明显减少;胫腓上联合的相对位移在对抗屈曲、伸直、外展载荷时比传统截肢术明显减少,而对抗内收载荷时则明显增加。骨肌肉成形切断术残端在对抗屈曲、伸直、外展、压缩和旋转载荷时腓骨承受的应力比传统截肢术明显增加,而胫腓上联合的应力比传统截肢术明显降低。因此,骨肌肉成形切断术利用腓骨骨桥增加腓骨承受力并稳定上胫腓联合,消除腓骨在受力时存在的不稳定,具有良好的生物力学效果。

YIGSR抑制骨肉瘤细胞分泌MMP-2和MMP-9的实验研究

[目的]研究酪氨酸-异亮氨酸-甘氨酸-丝氨酸-精氨酸五肽(YIGSR)对人骨肉瘤细胞MG-63分泌基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的抑制作用。[方法]在MG-63细胞中加入0、50、100μg/ml的YIGSR,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、免疫组化和明胶酶谱分析检测MMP-2和MMP-9的变化。[结果]免疫组化结果显示随YIGSR剂量增加,MMP-2、MMP-9平均光度递减,胞浆着色变浅;RT-PCR结果显示,随YIGSR剂量增加,MMP-2、MMP-9对应电泳条带亮度逐渐减弱;明胶酶谱分析也表明,随YIGSR剂量的增加,负染条带平均光度越来越低。结果均有显著性差异(P<0.05)。[结论]YIGSR能有效抑制人骨肉瘤细胞MG-63分泌MMP-2和MMP-9,在抑制骨肉瘤的侵袭与转移中可能会发挥一定作用。

YIGSR五肽对骨肉瘤细胞分泌VEGF和MMP-3的抑制作用

目的 探讨酪氨酸 异亮氨酸 甘氨酸 丝氨酸 精氨酸(YIGSR)抑制肿瘤侵袭与转移可能的机制。方法 在培养 的人骨肉瘤细胞MG 63中分别加入不同量的YIGSR,用免疫组化法和逆转录聚合酶链反应分别定性和半定量检测血管内皮 生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶 3(MMP 3)表达的变化。结果 加入不同量YIGSR的骨肉瘤细胞表达的VEGF和MMP 3也不同,加入YIGSR的量越多,VEGF和MMP 3的蛋白和mRNA的量就越少,呈剂量依赖性(P<0.05)。结论 YIGSR能有 效地抑制骨肉瘤细胞VEGF和MMP 3的分泌,在抑制骨肉瘤的侵袭与转移中可能发挥了一定的作用。

RNAi下调Six1基因对人骨肉瘤细胞增殖和转移能力的影响

背景与目的:Six1(sine oculis homeobox homolog1)基因的编码产物属于复合同源异型蛋白家族一员,主要参与中枢神经系统、眼、肾、肌肉等组织器官的发育。最新的研究表明Six1也参与了调控转录和细胞周期,进而发现与恶性肿瘤的发生及转移相关。在骨肉瘤中,Six1的功能还未完全明确。本研究拟对Six1在人骨肉瘤细胞增殖和转移中所发挥的作用进行初步探讨。方法:以人骨肉瘤MG-63细胞系为研究对象,针对其Six1基因序列设计小干扰RNA片段,筛选出能高效沉默目标基因的片段序列后,重组其短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达载体,转染入细胞,筛选出稳定表达干扰质粒的细胞克隆。用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western blot)方法分别检测转染后Six1的mRNA和蛋白的表达水平,四甲基偶氮唑蓝法检测增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,并将肿瘤细胞注入裸小鼠体内进行肿瘤转移的观察。结果:RT-PCR和Western blot显示shRNA对Six1在基因和蛋白水平均有显著的下调作用。骨肉瘤细胞的生长速度减慢,处于G2-M期的细胞比例由25.62%±1.81%下降为18.25%±1.56%,处于G1期的细胞比例由57.31%±2.11%上升到65.51%±2.65%。裸鼠转移瘤实验发现转移瘤的抑制率为69.5%。结论:下调Six1基因后,骨肉瘤细胞的增殖和转移能力都得到了明显的抑制,有可能成为临床治疗骨肉瘤的靶点之一。

AO/ASIF锁骨钩钢板治疗锁骨远端骨折和肩锁关节脱位术后的早期功能训练

目的:评估术后早期功能训练对AO/ASIF锁骨钩钢板治疗锁骨远端骨折和肩锁关节脱位的疗效。方法:18例锁骨远端骨折和肩锁关节脱位的患者采用AO/ASIF锁骨钩钢板联合术后早期功能训练;对照组16例仅采用常规的AO/ASIF锁骨钩钢板手术治疗。分别于术后14d和术后半年对患者的疗效进行评定。结果:术后14d,早期行功能训练患者疗效明显优于单纯手术患者,患肩活动范围的改善程度也明显优于单纯手术患者;术后半年,虽然两组疗效差异无显著性意义,但早期行功能训练患者患肩外展上举范围仍较单纯手术患者有明显的改善。结论:AO/ASIF锁骨钩钢板术后早期功能训练是治疗锁骨远端骨折和肩锁关节脱位的有效方法,患者症状缓解更快。

复杂性粉碎性肩胛骨骨折的手术治疗

[目的]本文着重讨论复杂性不稳定性肩胛骨粉碎骨折的手术治疗方法和效果。[方法]分析2003年1月～2007年6月在本科用不同内固定手术治疗的12例复杂性不稳定肩胛骨粉碎骨折的临床资料,其中骨折同时涉及肩峰,肩锁关节,喙锁韧带,肩袖,肩胛盂、颈,岗上、岗下肩胛体者8例,骨折涉及肩胛颈、盂、体部者4例,均Ⅰ期手术后随访肩关节功能恢复程度。[结果]12例患者均复位和固定满意,按Karlsson术后疗效分级标准,肩关节功能恢复优11例(88.89%),满意1例(11.11%),差0例。[结论]及时手术是治疗肩胛骨复杂性不稳定性粉碎性骨折的一种有效方法。

不同浓度血清对大鼠骨骺干细胞向软骨细胞分化的诱导效果比较

背景:血清成分复杂,其中不仅存在促细胞生长因子,同时也存在细胞生长抑制因子,因此合适的血清浓度对于体外培养细胞的增殖和分化至关重要。目的:比较不同浓度的胎牛血清对大鼠骨骺干细胞向软骨细胞分化的影响。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-03/10在华中科技大学同济医学院附属同济医院矫形外科研究室完成。材料:纯系清洁级新生24h内的SD大鼠8只,用于制备骨骺干细胞。胎牛血清为Gibco公司产品。方法:免疫磁珠分离纯化FGFR-3阳性的骨骺干细胞,稳定传至第3代后,分别用含1.25%,2.5%,5%,10%胎牛血清的软骨诱导培养基进行干预,诱导14d。主要观察指标:BrdU-ELISA法检测细胞增殖活性。应用免疫荧光染色和RT-PCR法检测细胞Ⅱ型胶原的表达。结果:骨骺干细胞向软骨细胞诱导14d后,10%胎牛血清组细胞增殖活性显著高于1.25%,2.5%,5%胎牛血清组(P<0.05);10%胎牛血清组Ⅱ型胶原免疫荧光染色阳性程度及Ⅱ型胶原mRNA的表达均明显强于其他3组。结论:含10%胎牛血清的软骨诱导液更有利于骨骺干细胞向软骨细胞方向分化。

体外RNA干扰抑制Ezrin表达对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的影响

背景与目的:细胞膜-细胞骨架联接蛋白(埃兹蛋白,Ezrin)参与了许多细胞的功能,包括细胞黏附、细胞运动以及细胞的生存。最近的许多研究表明Ezrin参与调控了肿瘤的侵袭与转移。然而,在骨肉瘤中,Ezrin所扮演的重要角色还没有被很清晰的阐明。本研究拟探讨Ezrin蛋白对人骨肉瘤细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:以骨肉瘤MG-63细胞系为研究对象,针对Ezrin编码基因设计小干扰RNA片段,重组其shRNA(short hairpin RNA)表达载体转染入细胞,筛选稳定表达的克隆,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western-Blot)方法检测转染后Ezrin的mRNA和蛋白的表达水平,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,Transwell法检测侵袭能力的变化。结果:RT-PCR和Western blot检测显示shRNA对Ezrin在基因和蛋白水平均有显著下调作用。骨肉瘤细胞生长速度减慢,处于分裂期的细胞比例有明显的下降,由25.05%下降到18.36%,而G1期细胞比例则由60.57%上升到67.65%。穿过人工基底膜的细胞数量也明显减少,由35.9±5.6减少为22.5±2.8(P<0.01)。结论:Ezrin在骨肉瘤的增殖和侵袭过程中发挥有重要作用,可能成为抑制肿瘤增殖和转移的关键性分子。

不同骨转移潜能人前列腺癌细胞亚株的筛选

背景与目的:前列腺癌具有很高的骨转移率,是导致患者死亡的主要原因,但是其机制仍不清楚。利用裸鼠肿瘤转移模型筛选人前列腺癌不同骨转移潜能的细胞亚株,通过分析其细胞生物学特性,将为今后探索前列腺癌骨转移机制提供模型。方法:采用人前列腺癌细胞系PC-3左心室注射法制作裸鼠肿瘤转移模型,分别获取骨和淋巴结转移灶内的肿瘤细胞,经体外培养及造模,筛选高、低骨转移潜能的细胞亚株。结果:筛选出具有高、低骨转移潜能的细胞亚株T3B和P24,其裸鼠体内骨转移率分别为8/10(80%)、1/10(10%),与母系PC-3细胞6/15(40%)比较差异有显著性(P<0.05);细胞生物学特性分析显示T3B、P24和PC-3的体外黏附率分别为112%±8%、80.3%±2.7%和77%±4%,侵袭能力分别为53±6个/视野、31±3个/视野和24±5个/视野,T3B的细胞黏附和侵袭能力均显著高于P24和PC-3(P<0.01),三者体外细胞增殖率、软琼脂克隆形成率、裸鼠皮下成瘤率及瘤体大小的差异无显著性(P>0.05)。结论:运用裸鼠肿瘤转移模型反复筛选,获得高(T3B)、低(P24)骨转移潜能的人前列腺癌PC-3细胞系亚株。

大鼠骨骺干细胞的分离鉴定及其永生化细胞株的构建

[目的]分离、鉴定大鼠骨骺干细胞并建立永生化的大鼠骨骺干细胞株,为细胞移植和转基因治疗提供稳定的细胞来源。[方法]采用Percoll不连续密度梯度离心法分离骨骺干细胞,利用电穿孔转染技术将含有猿肾病毒40大T抗原基因(SV40Tag)的质粒pCMVSV40T/PUR转染骨骺干细胞,经嘌呤霉素筛选,抗性克隆扩大培养。应用FGFR-3抗体和PCNA抗体进行免疫细胞化学染色,观察细胞的形态及其生长状况并绘制细胞生长曲线。用免疫细胞化学法和RT-PCR检测SV40Tag在转染细胞中的表达。[结果]转染后获得一个阳性细胞克隆,免疫细胞化学结果显示FGFR-3抗体染色阳性。SV40Tag抗体染色和RT-PCR结果显示SV40Tag已稳定转染入骨骺干细胞。转染细胞经扩大培养,命名为永生化骨骺干细胞。[结论]成功纯化大鼠骨骺干细胞并构建了SV40Tag永生化的骨骺干细胞株。

人前列腺癌骨转移动物模型的建立

目的建立人前列腺癌裸鼠骨转移动物模型。方法采用人前列腺癌细胞系PC-3细胞悬液，分别通过胫骨髓腔注射、左心室注射及尾静脉注射3种方法接种于裸鼠体内，定期进行影像学观测；8～16周后处死动物行病理切片检查，观察骨转移情况。结果经影像学检查和病理组织学鉴定，PC-3细胞经胫骨髓腔注射后，该组裸鼠于第2周出现骨转移表现，转移率为100％（7／7）；左心室注射后，至第12周影像学检测到骨转移率为28．6％（2／7），处死动物后经病理学检查骨转移率为42．9％（3／7）；而尾静脉注射组影像学和组织病理学检查均未见骨转移（0／7）。结论胫骨髓腔注射和左心室注射两种方法均能在短期内建立人前列腺癌骨转移动物模型。

鸡血藤对骨质疏松性骨折大鼠内固定术后恢复的作用及机制

目的研究鸡血藤对骨质疏松性骨折大鼠内固定术后恢复的作用及机制。方法60只大鼠随机分为对照组、模型组、鸡血藤低、中、高剂量组5组,每组12只。除对照组外,其余大鼠采用卵巢摘除法建立骨质疏松大鼠模型,然后进行开放性右侧股骨中段骨折,并用克氏针行髓内固定术治疗,术后第二天开始,鸡血藤低、中、高剂量组根据大鼠体重分别按照50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg灌胃给予大鼠鸡血藤提取物,对照组及模型组灌胃给予等量生理盐水,所有组别每天给药1次,连续给药8周后,测定大鼠右侧股骨骨折端骨密度、骨生物力学,苏木精-伊红染色进行组织病理学观察,Western blot检测大鼠股骨骨折组织中LRP5、β-catenin、Runx2蛋白水平。结果与对照组相比,模型组及鸡血藤低、中、高剂量组大鼠全身骨密度均显著降低(P<0.05),连续给药8周后,与模型组相比,鸡血藤各剂量组大鼠股骨骨折端骨密度、最大载荷和抗弯强度均显著升高(P<0.05),组织病理学变化明显改善,鸡血藤各剂量组大鼠股骨骨折组织中LRP5、β-catenin、Runx2蛋白水平均显著升高(P<0.05),且各项指标的变化与鸡血藤的剂量表现出依赖性。结论鸡血藤能够促进骨质疏松性骨折大鼠内固定术治疗后骨密度、骨生物力学等的恢复,其作用机制可能与调节Wnt/β-catenin信号通路有关。

受强力霉素调控的永生化骨骺干细胞株的建立

目的:建立受强力霉素调控高表达外源基因的真核表达体系-永生化骨骺干细胞株,为调控甲状旁腺相关肽的不同片断在骨骺干细胞中的表达打下基础。方法:实验于2006-09/2007-03在同济医学院矫形外科实验室完成。①实验材料:SD大鼠的乳鼠由华中科技大学同济医学院动物实验中心提供,雄鼠4只,雌鼠6只。②实验方法:取SD大鼠的乳鼠10只,显微镜下选取LaCroix环处的软骨及软骨前体细胞(骨骺干细胞),采用磁性细胞分选的方法,分离出原代骨骺干细胞,并用PCMVSV40质粒将其永生化。用脂质体介导法将pTet-on质粒转染已永生化的骨骺干细胞,通过G418筛选并经有限稀释法进行单克隆化,得到稳定转染的抗性克隆并将其分别扩增培养。将pTRE2hyg-luc质粒瞬时转染扩增后的单克隆细胞,加入终浓度为1mg/L的强力霉素诱导剂培养,48h后逐一检测每个细胞株的荧光素酶表达活性,逐一筛选强力霉素调控高表达外源基因的永生化骨骺干细胞株。③实验评估:将挑选出的第23号克隆扩增培养,加入0.01,0.1,0.5,1,5mg/L强力霉素进行诱导培养,并设置3组对照,一组为空白对照(蒸馏水),一组为未转染Tet-on系统的骨骺干细胞(均加入1mg/L0.1mg/强力霉素诱导),另一组为转染后的骨骺干细胞不加入强力霉素诱导。观察强力霉素对骨骺干细胞的最优诱导质量浓度。结果:第23号克隆的细胞经诱导后荧光素酶的表达活性为85790,而非诱导状态下该细胞株的活性为437,诱导后的活性增加196.3倍。强力霉素质量浓度梯度实验提示,强力霉素的最优诱导质量浓度是1mg/L左右,质量浓度过高可导致细胞死亡,过低时诱导效率降低。结论:永生化骨骺干细胞株可用于真核调控高表达,为研究甲状旁腺相关肽的不同功能片断与骨骺干细胞的分化机制的关系打下了基础。

下调Ezrin表达对前列腺癌细胞增殖和运动能力的影响

目的研究Ezrin蛋白对前列腺癌细胞增殖和运动能力的影响。方法采用前列腺癌PC-3细胞系作为研究对象,针对Ezrin蛋白的编码序列设计小干扰RNA片段,重组为shRNA表达载体转染入细胞,筛选出稳定表达的细胞克隆,RT-PCR和Western blot分别检测Ezrin在基因和蛋白水平表达的变化,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,Transwell法检测侵袭能力的变化。结果PCR和Western blot显示shRNA对Ezrin在基因和蛋白水平均有显著的下调作用,转染后的前列腺癌细胞生长速度明显减慢,细胞周期显示处于分裂期的细胞比例由(24.58±4.23)%下降到(18.65±2.21)%,处于G1期的细胞数量则由(58.69±3.48)%上升到(66.54±4.13)%。穿过人工基底膜的细胞数量也由(38.6±5.4)减少为(24.5±2.7)(P<0.01)。结论Ezrin对于前列腺癌细胞的增殖和运动能力有重要影响,可能成为肿瘤治疗的重要靶点。

超低频电磁场对硝普钠诱导的软骨细胞凋亡的影响

目的:研究超低频电磁场对硝普钠诱导的SD大鼠肋骨骨骺软骨细胞凋亡的影响。方法:不同浓度硝普钠诱导软骨细胞凋亡,检测不同时间软骨细胞半数致死量(LD50)的硝普钠浓度;观察超低频电磁场对软骨细胞凋亡的影响。结果:半数软骨细胞致死的硝普钠浓度呈时间依赖性下降;经超低频电磁场和硝普钠同时作用后的细胞凋亡率明显低于单纯硝普钠作用的细胞凋亡率(P<0.05);单纯硝普钠诱导的细胞在超微结构上有典型的凋亡改变,超低频电磁场能在一定程度上恢复软骨细胞的正常结构。结论:超低频电磁场能抑制硝普钠诱导体外培养的大鼠软骨细胞的凋亡。