葛根菊苣茯苓方对高尿酸血症大鼠的作用与机制研究

目的通过建立高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)大鼠模型,探讨葛根菊苣茯苓方的降尿酸作用与可能机制。方法将42只SD雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、葛根菊苣茯苓方低、中、高剂量(6.15 g/kg、12.3 g/kg、24.6 g/kg)组,别嘌醇组(0.03 g/kg),正常+葛根菊苣茯苓方组(正常给药组)。除正常组与正常给药组外,其余各组大鼠每日灌胃氧嗪酸钾1.5 g/kg、腺嘌呤0.1 g/kg建立HUA模型,连续21 d。从第8天开始,除正常组与模型组外,其余各组大鼠每日灌胃葛根菊苣茯苓方及别嘌醇干预治疗,持续14 d。造模结束后,采集大鼠血液,测定血尿酸(serum uric acid,SUA)、血肌酐(serum creatinine,SCr)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、腺苷脱氨酶(adenosine deaminase,ADA)、黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)含量;取大鼠肝脏及肾脏,计算肾脏系数;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色观察肾脏、肝脏病理变化;Western blot检测肾脏中有机阴离子转运体(organic anion,OAT)1、OAT3、尿酸转运体(recombinant urate transporter,URAT)1、三磷酸腺苷结合转运蛋白(ATP-binding cassette sub-family G member,ABCG)2、葡萄糖转运蛋白(glucose transporter type,GLUT)9蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠肾脏表面皱缩,色泽变浅,肾小管代偿性扩张,可见尿酸盐结晶;肾脏质量增加(P<0.05),肾脏系数增大(P<0.05);血清SUA、BUN、XOD、SCr、ADA含量与肾脏组织URAT1、GLUT9蛋白表达显著上升(P<0.05);ABCG2、OAT1、OAT3蛋白表达显著降低(P<0.05)。与模型组比较,治疗组大鼠上述指标有明显改善,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论葛根菊苣茯苓方可以通过调节尿酸盐转运相关蛋白降低HUA大鼠的高尿酸水平。

慢性间歇性低氧暴露对大鼠肝脏铁代谢的影响及机制研究

目的:通过建立慢性间歇性低氧(CIH)大鼠模型,探讨CIH暴露对肝脏铁代谢的影响及可能的机制。方法:将20只SD大鼠随机分为常氧对照组(对照组)和模型组(CIH组),将模型组大鼠置于动物间歇性低氧舱内,前1.5min向舱内充入100%氮气使氧气浓度降至5%,后1.5min充入100%氧气使氧气浓度升至21%,每一循环3min,8h/d,35d;常氧对照组大鼠置于相同舱内,充入正常空气。HE染色观察肝脏损伤情况,比色法检测血清铁和总铁结合力(TIBC);普鲁士蓝染色观察肝脏铁含量;Western blot检测肝脏二价金属转运蛋白[DMT1(+ire)、DMT1(-ire)]、膜铁转运蛋白(FPN1)、转铁蛋白受体1(TfR1)、铁蛋白(FTL)、p-STAT3、STAT3蛋白表达;Q-PCR检测肝脏铁调素(hepcidin)、DMT1(+ire)、DMT1(-ire)、FPN1、TfR1、白细胞介素-6(IL-6)mRNA表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠肝脏细胞结构紊乱,出现脂肪空泡、细胞核萎缩;与对照组相比,模型组大鼠TfR1和DMT1(+ire)mRNA及蛋白表达显著上升(P<0.05),FPN1蛋白表达明显下降(P<0.05);与对照组相比,模型组大鼠铁沉积显著增多,血清铁含量和转铁蛋白饱和度显著下降(P<0.01),FTL蛋白表达升高(P<0.05);与对照组相比,模型组大鼠肝脏中hepcidin及IL-6 mRNA表达升高(P<0.05),p-STAT3/STAT3蛋白表达比值升高(P<0.05)。结论:CIH暴露可能通过IL-6/STAT3通路调控hepcidin-FPN1系统造成肝脏中的铁沉积。

半夏厚朴汤通过抑制炎症反应改善CIH小鼠肺脏损伤的机制研究

目的本研究旨在观察半夏厚朴汤(Banxia houpu decoction,BHD)对慢性间歇性低氧(Chronic intermittent hypoxia,CIH)暴露小鼠肺脏损伤的改善作用,并探讨其可能的分子机制。方法将30只健康的6-8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分成:常氧组(CON)、慢性间歇性低氧暴露组(CIH)、慢性间歇性低氧+半夏厚朴汤组(CIH+BHD)。CON组暴露于常氧环境,CIH组与CIH+BHD组暴露于间歇性低氧的环境中。其中,CIH+BHD组于每日放入低氧舱前30 min给予半夏厚朴汤灌胃(7 g·kg^(-1)·d^(-1)),而CIH组与CON组给予同等体积生理盐水。造模5周结束后取材,应用HE染色观察各组小鼠肺脏的病理学改变;免疫组化方法检测各组小鼠NF-κB、IL-6、TNF-α的蛋白表达情况;Westernblot检测NLRP3炎性小体(包括NLRP3、ASC、caspase-1)、IL-6、TNF-α、TLR4/MyD88/NF-κB、TXNIP和IL-18的蛋白表达。结果CIH处理后,小鼠肺组织病理学改变为肺泡壁增厚、炎性细胞浸润;免疫组化结果显示CIH暴露后NF-κB、IL-6、TNF-α蛋白表达升高;Western blot检测CIH暴露后NLRP3炎性小体(包括NLRP3、ASC、caspase-1)、IL-6、TNF-α、TLR4/MyD88/NF-κB、TXNIP和IL-18的蛋白表达升高。与CIH组相比,CIH+BHD组小鼠肺脏病理切片可见肺泡壁厚度大致正常,炎性细胞浸润情况改善;免疫组化和Western blot中检测的相关指标均有下降的表现。结论半夏厚朴汤可能是通过抑制炎症反应改善CIH暴露后小鼠肺脏损伤。

半夏厚朴汤通过抑制内质网应激改善慢性间歇性低氧引起的小鼠心脏损伤

目的观察半夏厚朴汤对慢性间歇性低氧(chronic intermittent hypoxia,CIH)模型小鼠心脏损伤和内质网应激水平的调节作用。方法将30只SPF级雄性小鼠随机分为正常组、CIH模型组、半夏厚朴汤治疗组(治疗组),每组10只。使用慢性间歇性低氧舱建立CIH动物模型,治疗组给予半夏厚朴汤灌胃7.02 g/(kg·天),造模21天后取材。(1)小动物B超检测各组小鼠心功能,包括射血分数(ejection fraction,EF)、左心室收缩末期内径(LV-End systolic diameter,LVESD)、左心室舒张末期内径(LV-End diastolic diameter,LVEDD)。(2)使用全自动生化分析仪测定各组小鼠肌酸激酶(creatine kinase,CK)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase-MB,CK-MB)、乳酸脱氢酶同工酶1(lactic dehydrogenase isoenzyme 1,LDH1)的含量。(3)使用比色法检测各组小鼠组织中超氧化物歧化酶(superoxide Dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、过氧化氢酶(catalase,CAT)的含量。(4)Western blot检测各组小鼠心脏组织中葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)、内质网氧化还原1样蛋白(endoplasmic reticulum oxidoreductin-1-like protein,ERO1L)的表达。(5)TUNEL染色观察心肌细胞中凋亡小体数量。结果(1)与正常组相比,模型组小鼠心脏左心室EF下降,LVESD、LVEDD均有不同程度的升高(P<0.05);与模型组相比,治疗组可以改善心功能(P<0.05)。(2)与正常组相比,模型组小鼠心脏CK、CK-MB、LDH1等心肌酶水平明显上升(P<0.05);与模型组相比,治疗组心肌酶水平明显下降(P<0.05)。(3)与正常组比较,模型组小鼠血清中SOD和CAT活性明显下降,MDA含量明显上升(P<0.05);与模型组相比,治疗组小鼠SOD和CAT活性上升,MDA含量减少(P<0.05)。(4)与正常组比较,模型组小鼠GRP78、CHOP、ERO1L等蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,治疗组小鼠蛋白水平明显下调(P<0.05)。(5)与正常组相比,模型组小鼠凋亡小体数量明显增加;与模型组相比,治疗组小鼠心脏中凋亡小体数量明显减少。结论半夏厚朴汤可能通过抑制慢性间歇性低氧暴露引起的内质网应激,进而减轻心脏细胞凋亡,改善心功能。

铁代谢的中医病机探讨与中药干预机制研究进展

铁稳态在维护机体正常的生长发育和生理代谢中发挥着重要作用。铁的平衡极为重要,缺铁和铁超载均对机体有害,铁稳态失衡可导致多种疾病的发生、发展。中医药具有多靶点、多通路等优势,在铁代谢的调控以及相关疾病治疗中起到重要作用。本文阐述了铁代谢的吸收、代谢及调控相关机制,总结了铁缺乏、铁过载等不同铁稳态失衡条件下中医药证型的分布以及与证素的相关性,同时探讨了中药单体及中药复方对铁代谢调控的研究成果,为不同疾病铁代谢失衡的治疗提供一定参考。

从病机探讨五苓散的适用病症

五苓散出自东汉张机《伤寒杂病论》,是针对“气化不利,客水停留,真水不布”这一病机而设定的方剂。其选药配伍及煎服方法皆针对此病机而设。六经辨证涉及太阳与太阴两经。临证中无论何病何种表现但诊见此病机皆有投用此方之道理。读方悟法,由点及面,推而广之,以病机之不变应病候之万变。

半夏厚朴汤及其拆方改善慢性间歇性低氧小鼠机体铁代谢

目的观察半夏厚朴汤(BHF)及其拆方对慢性间歇性低氧(CIH)小鼠机体铁代谢的调节作用。方法42只雄性C57BL/6N小鼠随机分为常氧对照组(Con)、CIH模型组(CIH)、全方组(CIH+BHF)、苏叶组(CIH+苏叶)、厚朴组(CIH+厚朴)、行气组(CIH+厚朴、苏叶)、化痰饮组(CIH+半夏、茯苓、生姜),每组6只。连续CIH暴露和灌胃给药处理21 d后检测相关指标。比色法检测血清铁,HE染色观察肝脏及十二指肠形态结构、Perls'染色观察肝脏、脾脏、十二指肠铁含量,Western Blot及免疫组织化学染色检测肝脏铁调素(hepcidin)、转铁蛋白受体1(transferrin receptor 1,TfR1)、铁泵蛋白1(ferroportin 1,FPN1)、铁蛋白轻链(ferritin light chain,FTL)蛋白表达。结果与Con组比较,CIH组小鼠血清铁含量降低,小肠黏膜(十二指肠)与肝脏组织结构损伤,肝脏、小肠铁沉积增加(P<0.05),脾脏铁含量减少(P<0.05),肝脏TfR1、FTL、hepcidin蛋白表达升高(P<0.05),FPN1蛋白表达下降(P<0.05)。与CIH组比较,全方组、行气组小鼠血清铁水平上调(P<0.05),全方组、苏叶组、厚朴组、行气组小肠黏膜与肝脏组织形态较为完整,肝脏、小肠铁沉积减轻(P<0.05),全方组、行气组脾脏铁含量回升(P<0.01,P<0.05),全方及行气组肝脏hepcidin、TfR1、FPN1和FTL蛋白表达紊乱改善(P<0.05)。结论半夏厚朴汤及其拆方能够不同程度改善CIH暴露引起的铁代谢紊乱,其中行气药可能发挥重要作用。

半夏厚朴汤治疗呼吸系统疾病研究进展

呼吸系统疾病是一类临床常见病、多发病,且患病率逐年递增,日益成为严重影响公共卫生健康的问题。中医辨证其主要病位在肺,“肺主气,司呼吸”又为“储痰之器”,临床常以“痰”“气”见治。半夏厚朴汤出自《金匮要略》,最早主治“梅核气”,全方由半夏、厚朴、茯苓、生姜、紫苏叶组成,痰气交阻为此方所治核心病机,具有行气散结,降逆化痰之功效,这正与肺脏的病理特性基本相应。临床研究证实,半夏厚朴汤原方加减用药,或单独应用,或与西药联合应用治疗慢性咽炎、哮喘、慢性阻塞性肺疾病、肺炎、阻塞性睡眠呼吸暂停及上气道咳嗽综合征等呼吸系统疾病具有显著效果,可有效改善疾病症状体征、降低复发率等。基础研究表明,其可通过调节多通路靶点起到抗炎、抗氧化应激、抗凋亡、调节自噬、调节铁超载等作用。该文通过梳理近年来相关文献,就半夏厚朴汤方证探析、临床治疗研究及作用机制研究等三方面进行了系统综述,以期为该方治疗呼吸系统疾病的作用机制研究并扩展其临床应用提供理论依据和参考。

补中益气汤基于ACE2-Ang(1-7)-Mas轴减轻CIH诱发的肺脏炎症损伤

目的:探讨补中益气汤对慢性间歇性低氧(CIH)小鼠肺脏炎症的干预作用,并初步阐明其作用机制。方法:将40只健康的6~8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分成:常氧组、模型组(CIH)和补中益气汤低、中、高剂量组。常氧组暴露于常氧环境中,模型组与补中益气汤低、中、高剂量组暴露于间歇性低氧环境中。其中,补中益气汤低、中、高剂量每日放入低氧舱前30 min给予补中益气汤灌胃(低、中、高剂量分别为8.1、16.2、32.4 g·kg^(-1)·d-1),而模型组与常氧组给予同等体积生理盐水。造模5周后,应用EMKA型动物肺功能仪检测小鼠肺功能,肺功能检测完毕后取材。应用苏木素-伊红(HE)染色观察各组小鼠肺脏的病理学改变;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和肺组织中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管紧张素(1-7)[Ang(1-7)]的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)及免疫组化检测IL-6、IL-8、TNF-α、血管紧张素转化酶2(ACE2)、线粒体组装受体(Mas)蛋白的表达。结果:与常氧组比较,模型组小鼠肺功能出现明显异常(P<0.05,P<0.01),肺组织出现肺泡壁增厚、炎性细胞浸润等改变;血清中IL-6、IL-8、TNF-α和肺组织中AngⅡ的含量显著上升(P<0.01),Ang(1-7)含量显著下降(P<0.01),IL-6、IL-8、TNF-α蛋白表达显著升高、ACE2、Mas蛋白表达明显下降(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,中药组小鼠肺功能有所改善(P<0.05,P<0.01),肺脏HE染色可见肺泡壁厚度大致正常,炎性细胞浸润减少;免疫组化和Western blot检测炎症相关蛋白表达明显下降(P<0.05,P<0.01),ACE2、Mas蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:补中益气汤可通过调节ACE2-Ang(1-7)-Mas轴抑制炎症反应改善CIH暴露后小鼠的肺脏损伤。

半夏厚朴汤对慢性间歇性低氧引起的机体铁代谢失衡影响

目的:研究半夏厚朴汤能否改善慢性间歇性低氧(CIH)暴露后小鼠机体铁代谢紊乱情况。方法:30只小鼠随机分为常氧对照组(Con)、间歇性低氧处理组(CIH)、CIH+半夏厚朴汤治疗组(BHD)。连续CIH暴露和灌胃给药处理21 d,比色法检测血清铁;普鲁士蓝染色观察肝脏和脾脏铁含量;Western Blot检测肝脏铁调素(hepcidin)、膜铁转运蛋白(FPN1)、铁蛋白轻链(FTL)和铁蛋白重链(FTH)蛋白,脾脏中血红素加氧酶1(HO-1)、FPN1、FTL和FTH蛋白表达;免疫组化分析肝脏hepcidin、脾脏FPN1及十二指肠缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)、二价金属离子转运体1(DMT1)、FPN1蛋白表达。结果:与Con组比较,CIH小鼠血清铁显著降低(P<0.01),给予半夏厚朴汤后显著回升(P<0.01);CIH小鼠肝脏铁含量显著增加(P<0.05),伴随hepcidin表达升高(P<0.01),FPN1表达下降(P<0.05),FTL表达上调(P<0.01),而半夏厚朴汤治疗后显著下调hepcidin(P<0.05),上调FPN1同时抑制FTL表达(P<0.05),减轻肝脏铁沉积(P<0.05);CIH小鼠脾脏铁含量明显减少,FPN1表达显著上升(P<0.01),FTL、FTH及HO-1表达受抑制(P<0.05,P<0.01),而给予半夏厚朴汤后均显著改善(P<0.05,P<0.01)。CIH小鼠十二指肠内HIF-2α、DMT1显著升高(P<0.01,P<0.05),FPN1表达下降(P<0.05),而半夏厚朴汤治疗后下调了HIF-2α、DMT1表达(P<0.05),提升了FPN1水平(P<0.05)。结论:半夏厚朴汤改善了CIH暴露引起的血清铁下降,肝、脾、十二指肠铁代谢异常,有效促进了CIH小鼠机体铁的吸收和动员。