浮膜培养人内皮细胞及其整装电镜标本制作技术的研究

用Falcon塑料培养器皿的原料,自制一种支持膜(PF),经明胶处理后,首次用于浮膜培养人内皮细胞。细胞生长至亚融合时,以高锰酸钾混合固定液固定、消化细胞以保存细胞的膜系统。将固定后的细胞连同pF贴附于铜网上,干燥后在TEM80kv条件下,细胞的内质网及线粒体等超微及立体超微结构可被清楚地观察到。还讨论了本方法的优缺点并与文献中的其它整体细胞方法做了比较。

ER和MDM2及ERK1／2信号通路与卵巢癌耐药关系的研究

目的:探讨ER、MDM2和ERK1/2信号通路在卵巢癌中的相关性及与卵巢癌耐药的关系。方法:采用免疫组织化学SP法检测40例卵巢癌标本中ER、MDM2及P-糖蛋白(P-gp)的表达水平;采用MTT比色分析法检测该40例标本对紫杉醇(PTX)、表柔比星(EADM)、顺铂(DDP)和卡铂(CBP)的药物敏感性;通过酶活性测定,检测ERK1/2酶活性。结果:PTX和EADM耐药者ERK1/2酶活性分别增高1.5倍,P值分别为0.015和0.004;ERK1/2酶活性与PTX和EADM的抑制率负相关,r分别为-0.531和-0.488,P<0.01;ER和MDM2不同表达水平间ERK1/2酶活性差异均有统计学意义,P值分别为0.001和0.034;P-gp阳性组ERK1/2酶活性是阴性组的1.4倍,P=0.022;P-gp阴性组PTX和EADM的抑制率分别是阳性组的1.5和2.0倍,P值分别为0.021和0.004;P-gp与MDM2的表达正相关,r=0.396,P<0.05;MDM2不同表达水平,PTX和EADM抑制率的差异有统计学意义,P值分别为0.024和0.039;ER与MDM2的表达正相关,r=0.671,P<0.01;DDP和CBP在本实验中差异无统计学意义。结论:ER、MDM2及ERK1/2激酶活性之间存在正相关性;ERK1/2激酶活性和MDM2的表达均与P-gp的表达正相关;卵巢癌PTX和EADM耐药的产生与ERK1/2酶活性的升高和P-gp及MDM2表达的增强有关。

乳腺癌组织突变型p53和抑癌基因PTEN表达及其临床意义的研究

目的:探讨乳腺癌中是否存在突变型p53的过度表达和抑癌基因PTEN的失活,及其对预后的影响。方法:SP免疫组化法检测260例乳腺癌患者中突变型p53和PTEN的表达情况。结果:乳腺癌中突变型p53阳性率44.62%(116/260),阳性患者5年生存率(52.59%)低于阴性患者(65.97%),差异有统计学意义,χ2=4.26,P=0.039。抑癌基因PTEN的阳性率为69.23%,阳性患者5年生存率(65.00%)高于PTEN阴性患者(48.75%),差异有统计学意义,χ2=5.44,P=0.0197。抑癌基因PTEN与突变型p53共同阳性69例,共同阴性33例,两者之间呈负相关,χ2=25.924,P=0.0000。结论:p53基因的突变和PTEN基因的失活可能与乳腺癌发生密切相关,且均与预后相关,可作为预后评估指标之一。

感染HCMV的腮腺导管上皮细胞CK和EMA丢失

目的 研究人类巨细胞病毒 (HCMV)感染对腮腺导管上皮细胞表型产生的影响。方法 用免疫组化方法检测腮腺巨细胞包涵体病石蜡包埋组织中巨细胞病毒以及早期抗原、CK、EMA等的表达。结果 腮腺导管上皮细胞感染人巨细胞病毒后 ,作为上皮性标志物的CK和EMA表达呈阴性。结论 人巨细胞病毒感染腮腺导管上皮细胞使其CK和EMA丢失。

p16和cyclinD_1在乳腺导管非典型增生癌变过程中的表达

目的 探讨乳腺导管非典型增生癌变过程中 p16和cyclinD1的变化及其相互关系。方法 应用免疫组织化学方法检测 p16、cyclinD1在乳腺各组病变中的蛋白表达情况。结果 乳腺导管单纯性增生、非典型增生组织中 p16蛋白表达率明显高于乳腺癌组织 ,差异有显著性。cyclinD1在中、重度非典型增生组表达最为明显 ,且与乳腺导管单纯性增生组及轻度非典型增生组比较 ,差异均有显著性。p16、cyclinD1蛋白在乳腺各组病变中表达呈负相关关系。结论 p16、cyclinD1在乳腺增生性病变中呈现不同程度表达 ,其表达强度在一定程度上与细胞的恶性倾向有关 ,检测其表达水平可作为乳腺导管非典型增生组织恶性转化的一个客观检测指标。其中 ,cyclinD1蛋白可能是乳腺癌发生过程中的早期分子事件 。

乳腺癌中耐药蛋白P-gp、GST-π、Topo-Ⅱ的表达

目的明确乳腺癌中是否存在P-gp、GST-π、TopoⅡ三种原发耐药蛋白;三种耐药蛋白的表达与乳腺癌的组织类型、细胞分化程度、TNM分期是否相关;是否影响乳腺癌患者的预后。方法采用S-P免疫组化方法,检测260例乳腺癌患者中P-gp、TopoⅡ、GST-π的表达情况,同时取10例乳腺病及10例癌旁乳腺组织作对照。结果乳腺癌中三种耐药蛋白呈异质性表达。P-gp、GST-π和TopoⅡ在良性病变中弱表达,在伴有早期浸润的乳腺导管内癌和乳腺浸润性导管癌中的表达同样明显高于乳腺导管内癌;其中P-gp和GST-π表达和预后相关,差异显著(P<0.01,P<0.05)。结论乳腺癌在发生早期浸润的同时就伴随着耐药的发生;P-gp和GST-π是乳腺癌患者预后的影响因素,综合检测优于单一检测。

p38信号蛋白在乳腺癌组织中表达的研究

目的检测p38信号蛋白在人乳腺癌组织中的表达,探讨其与乳腺癌发展的关系。方法采用免疫组织化学S-P法,检测60例乳腺癌组织中p38信号蛋白的表达。结果38例有淋巴结转移的乳腺癌病例中29例p38表达阳性,阳性率76.3%;22例无淋巴结转移的病例中9例p38阳性表达,阳性率40.9%,两者差异有显著性(P<0.01)。p-p38在有淋巴结转移的病例中阳性率68.4%,在无淋巴结转移的病例中阳性表达率36.4%,差异有显著性(P<0.05)。结论p38信号传导途径在乳腺癌侵袭与转移中起关键作用,其蛋白表达与乳腺癌临床分期有关。

磷脂酰肌醇3-激酶在人乳腺癌中的活化

背景与目的:磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol3-kinase,PI3-K)可被多种有丝分裂信号刺激活化,它参与有关细胞生长信号的调控,但其在人类肿瘤中的作用尚不清楚。本研究旨在探讨人乳腺癌中PI3-K的蛋白表达、mRNA表达和激酶活性变化情况。方法:应用Westernblot、免疫沉淀、激酶活性测定和RT-PCR方法检测37例人乳腺癌及其周围非癌组织中PI3-Kp85亚单位的表达及PI3-K活性变化。结果:与周围非癌组织相比,37例人乳腺癌中,32例(86.49%)PI3-Kp85亚单位蛋白表达显著增加;35例(94.59%)PI3-Kp85亚单位mRNA水平明显增高;25例(67.57%)PI3-K激酶活性亦显著增高。结论:人乳腺癌中PI3-K被活化,提示PI3-K参与乳腺癌细胞的信号转导;它有可能成为人乳腺癌治疗的新靶点。

血脂康对培养的家兔主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 :探讨调脂中药血脂康对血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的影响。方法 :在培养的家兔主动脉VSMC中加入不同浓度的血脂康共同孵育 2 4h ,分别采用细胞计数及3H 胸腺嘧啶核苷 ( 3H TdR)掺入实验观察血脂康对VSMC增殖及DNA合成的影响。结果 :血脂康明显抑制VSMC增殖 (P <0 .0 5 )和DNA合成 (P <0 .0 1)。结论 :血脂康既具有降低血脂作用 ,又可能通过抑制VSMC增殖而防止动脉粥样硬化病变恶化及血管成形术后血管再狭窄等作用。

ERK PI3-K在乳腺癌及癌前组织中的表达及相关性

目的:分析乳腺癌、癌前病变及正常组织中ERK和PI3-K的mRNA、蛋白表达及激酶活性,探讨其在乳腺癌发生和发展中的作用和相互关系。方法:应用RT-PCR方法检测mRNA表达;Westernblot检测蛋白表达;激酶活性检测其磷酸转移酶效率。结果:乳腺癌中ERK2mRNA和蛋白表达均增加(100%,37/37);激酶活性增加(75.68%,28/37)。有32例PI3-KmRNA表达增加(86.49%);35例蛋白表达增加(94.59%);25例激酶活性增加(67.57%)。ERK在乳腺癌和癌前病变中均处于活化状态,PI3-K只在乳腺癌中处于高表达。相关性分析表明,乳腺癌中ERK2与PI3-K激酶活性呈负相关。结论:ERK和PI3-K途径在乳腺癌发生过程中均存在异常且两者可能存在某种协调关系。

端粒酶基因与凋亡相关基因在乳腺导管非典型增生中表达的相关性研究

背景与目的:近年研究表明端粒酶的激活及凋亡抑制基因的过度表达与多种肿瘤发生有关,本研究观察端粒酶基因(hTR,hTRT)、凋亡相关基因(p53,bcl-2)在乳腺导管非典型增生中的表达及相互关系,旨在探讨端粒酶活性及凋亡相关基因的变化在乳腺导管非典型增生上皮癌变过程中的作用和意义。方法:应用原位杂交方法检测端粒酶基因(hTR,hTRT)和凋亡相关基因(p53,bcl-2)mRNA在44例乳腺导管非典型增生组织中的表达,应用免疫组化方法检测p53蛋白在上述病例中的表达,并与6例良性乳腺增生及26例乳腺癌病例进行了比较。结果:端粒酶基因(hTR,hTRTmRNA)在乳腺导管重度非典型增生组织中表达增强(60.9%,52.1%),其表达与在轻、中度非典型增生(22.2%,11.1%;33.3%,25.0%),乳腺癌(88.5%,80.8%)组织中的表达差异显著(P<0.05)。p53mRNA在乳腺导管非典型增生组织中的表达随着异型性的增加而下降(轻度:55.6%;中度:41.7%;重度:26.1%),而p53蛋白则相应增加(轻度:11.1%;中度:25.0%;重度:34.8%)。bcl-2在乳腺导管非典型增生组织中呈中度表达,其中以在重度非典型增生组织中表达明显。结论:端粒酶基因(hTR,hTRT)的表达与乳腺非典型增生细胞的恶性转化密切相关,同时可检测到p53mRNA的表达缺失、p53蛋白突变及bcl-2mRNA的过表达。

SLE模型新西兰小鼠高IgG血症易感基因的定位

目的 :定位自发性SLE模型——— (NZB×NZW)F1 小鼠高IgG血症的遗传易感基因。方法 :建立 (NZB×NZW )F1 ×NZW回交小鼠模型 ,采用覆盖小鼠 19条染色体的多态性微卫星遗传标记及数量性状位点 (QTL)分析进行基因定位。结果 :高IgG血症易感基因与小鼠第 1条染色体末端 92 .3cM处微卫星遗传标记D1Mit36肯定连锁 (Lods值 >3) ,该位点附近 92 .0cM处存在Fcgr2b基因 ,且回交小鼠Fcgr2b基因B W型组血清总IgG水平明显高于W W型组 (P <0 .0 0 0 1)。结论 :(NZB×NZW)F1

乳腺导管非典型增生上皮细胞的超微结构研究

目的 :观察乳腺导管单纯性增生、非典型增生、乳腺癌细胞超微结构特点 ,研究乳腺导管非典型增生上皮细胞恶性转化过程中的形态结构特点及变化规律。方法 :应用透射电子显微镜观察乳腺增生症 2 0例 (其中导管单纯性增生 4例 ,轻度非典型增生 5例 ,中度非典型增生 5例 ,重度非典型增生 6例 )及乳腺癌 10例细胞的超微结构。结果 :乳腺导管非典型增生上皮超微结构变化介于单纯性增生及乳腺癌细胞之间 ,表现为微绒毛紊乱 ,数量减少。细胞间缝隙连接、镶嵌连接及桥粒数量减少及结构发育不良。细胞器数量增多 ,但发育不全。细胞核增大不规则 ,染色较深 ,增生细胞间可见肌上皮细胞。这些改变与乳腺导管单纯性增生、乳腺癌组织明显不同 ,但重度非典型增生细胞改变接近癌细胞。结论 :乳腺导管非典型增生细胞是从良性向恶性过渡的中间细胞 ,重度非典型增生细胞超微结构接近乳腺癌细胞 ,说明这些细胞已具备潜在的恶性趋势。要从整体形态分析 。

乳腺癌信号转导途径中Akt的激活及意义

目的：明确乳腺癌中是否存在Akt的过度表达以及对预后的影响。方法：采用SP免疫组化方法，检测260例乳腺癌患者中Akt的表达情况。结果：乳腺癌中Akt阳性率50．00％（130／260）。Akt在乳腺浸润性导管癌中的表达高于乳腺导管内癌，差异有统计学意义，X^2=4．02，P=0．0450；Akt在体积＜2cm^3的肿瘤和体积≥5cm^3的相比，差异有统计学意义，X^2=11．66，P=0．0006；Akt在无淋巴结转移的病例与伴有1～3个或3个以上淋巴结转移情况相比差异均有统计学意义（X^2=23．78，P=0．0000；X^2=31．61，P=0．0000）；Akt阳性患者5年生存率49．23％（64／130）低于阴性患者70．77％（92／130），差异有统计学意义，X^2=11．68，P=0．0006。结论：Akt基因的激活可能与乳腺癌发生机制密切相关，且与预后相关，可作为预后评估指标之一。

非小细胞肺癌中COX-2蛋白对细胞凋亡的抑制作用

背景与目的从凋亡的角度看,肿瘤的发生是由于凋亡机制受抑,从而使变异细胞积聚形成肿瘤。本研究的目的是探讨非小细胞肺癌组织中细胞凋亡和COX-2蛋白表达情况及其对预后的影响。方法应用DNA缺口末端标记技术和免疫组化方法检测111例非小细胞肺癌组织中细胞凋亡和COX-2蛋白表达水平,应用CD34标记血管来计数肿瘤组织的微血管密度。结果111例非小细胞肺癌中,COX-2蛋白阳性表达者75例(67.6%),细胞高凋亡水平者53例(47.7%)。COX-2蛋白的表达与肿瘤TNM分期(P=0.025)和淋巴结转移情况(P=0.018)有密切关系,且COX-2阳性表达的非小细胞肺癌组织中微血管密度明显高于阴性表达者(P=0.000)。COX模型多因素分析显示,淋巴结转移(P=0.006)和COX-2蛋白阳性表达(P=0.000)是非小细胞肺癌患者的不良预后因素。结论COX-2阳性表达可能抑制肿瘤细胞凋亡,可作为判断非小细胞肺癌患者预后不良的潜在指标。

肺癌组织中突变型p53与Cox-2蛋白的相关性

目的探讨突变型p53和Cox-2蛋白在肺癌组织中表达的相关性及其对预后的影响。方法应用免疫组化SP法检测116例肺癌患者组织中突变型p53和Cox-2蛋白表达水平,并用CD34标记血管来计数肿瘤组织的微血管密度。结果116例肺癌中,突变型p53蛋白阳性47例(40.52%),Cox-2蛋白阳性78例(67.24%)。Cox-2蛋白的表达与肿瘤TNM分期(P=0.014)及其中的淋巴结转移情况(P=0.006)密切相关,且阳性表达的肺癌组织中微血管密度明显高于阴性表达者(P=0.000),有统计学意义。COX模型多因素分析显示,淋巴结的转移(P=0.004)和Cox-2蛋白的阳性表达(P=0.000)是肺癌患者的预后不良因素。结论突变型p53与Cox-2蛋白的表达有关,Cox-2可作为判断肺癌患者预后不良的潜在指标。

p-Bad112/136、p-Akt、p-Erk在乳腺癌癌变过程中的表达及意义

目的:研究p-Bad112/136、p-Erk、p-Akt在乳腺癌癌变过程中,即乳腺正常组织、普通导管增生、轻中度不典型导管增生、重度不典型增生及导管原位癌、乳腺浸润性导管癌中的表达及意义。方法:用免疫组织化学S-P法检测131例乳腺石蜡包埋组织、WesternBlotting法检测27例乳腺浸润性导管癌及癌旁乳腺组织中p-Bad112/136、p-Akt、p-Erk的表达情况。用χ2和t检验等方法分析四种蛋白在乳腺癌组织中表达的意义及其与临床病理特征间的关系。结果:免疫组化结果显示在乳腺癌癌变过程中这四种蛋白表达阳性率呈递增趋势,其中四种蛋白在乳腺普通导管增生和重度不典型增生及原位癌间阳性表达率差异有统计学意义(P值分别为0.034、0.023、0.001、0.001);p-Bad112/136蛋白在重度不典型增生及原位癌组与浸润性导管癌组间差异有明显统计学意义(P=0.002,0.004)。统计分析显示在乳腺浸润性导管癌中这四种蛋白与患者的年龄、临床分期、肿瘤大小无明显关系,但均与组织学分级相关(P值分别为0.039、0.026、0.038、0.026)。同时p-Erk、p-Akt蛋白的表达与腋窝淋巴结转移有关(P值分别为0.041、0.016)。WesternBlotting结果显示四种蛋白含量在乳腺癌与癌旁乳腺组织的差异有明显的统计学意义(P值分别为0.002,0.001,0.002,0.003)。在乳腺癌组织中p-Bad112与p-Erk及p-Bad136与p-Akt蛋白表达量呈正相关性(P值分别为0.034、0.020)。结论:这四种蛋白表达水平在一定程度上提示了乳腺导管非典型增生向乳腺癌的转化潜能,并且提示MAPK/Erk及PI3-K/Akt传导路径在乳腺癌癌变过程中具有重要作用。

MTT比色分析法检测卵巢癌药物敏感性

目的探讨四氮唑蓝比色分析法(MTT法)用于指导临床个体化化疗药物选择的实用性,为卵巢癌临床化疗用药提供参考。方法采用常用的12种化疗药物对65例卵巢癌进行MTT法药物敏感试验。结果不同类型的卵巢癌及同一类型的不同个体对化疗药物的敏感性差异较大。卵巢癌对紫杉醇、表阿霉素、卡铂和顺铂中度敏感,平均抑制率分别为(67.3±4.6)%、(54.5±4.8)%、(52.0±4.3)%和(50.8±4.5)%;对鬼臼乙叉甙、烃基喜树碱和长春地新低度敏感,平均抑制率分别为(39.6±3.8)%、(39.3±4.3)%和(30.7±2.6)%;而对丝裂霉素C、噻替哌、5氟尿嘧啶、长春新碱和氨甲喋呤则耐药,平均抑制率均小于30%。结论卵巢癌化疗敏感性个体差异较大。MTT法是一种简便而快速的肿瘤体外药物敏感实验方法,可为卵巢癌临床个体化化疗方案的选择提供客观依据。

树脂包埋结肠粘膜上皮细胞内β－葡萄糖醛酸酶免疫电镜定位观察

树脂包埋结肠粘膜上皮细胞内β－葡萄糖醛酸酶免疫电镜定位观察张弘，于安民，宋继谒，杨波，王世贤，闫玲许多研究用生物化学的方法，证实了一些细胞中含有值得重视的溶酶体酶，这些酶与炎症反应、细胞毒性、抗原改变等有关［１］。有的文献提示溶酶体酶在某些细胞的活动...