乌梢蛇醇溶蛋白质提取工艺优化及其指纹图谱表征

目的优化乌梢蛇醇溶蛋白质提取工艺,并对其进行指纹图谱表征。方法在单因素试验基础上,以料液比、乙醇体积分数、提取温度、提取时间为影响因素,提取率为评价指标,响应面法优化提取工艺,再进行FTIR、SDS-PAGE分析。结果最佳条件为料液比1∶43.15,乙醇体积分数46.35%,提取温度37.53℃,提取时间250min,提取率为0.4072%。醇溶蛋白质在4000~400cm-1波数范围内有10个吸收峰,并且其种类丰富,分子量在11.19~158.10kDa范围内,其中26.48、19.67kDa为指纹图谱主峰。结论本实验可为乌梢蛇开发利用及分析鉴定提供依据。

僵蚕药材蛋白质分级指纹图谱建立及产地鉴定相关分子研究

建立云南与四川僵蚕药材的总蛋白质指纹图谱及分级指纹图谱,对比分析以发现其中的差异表达蛋白质分子并进行鉴定及生物信息学分析,探索其用于产地鉴定的可行性。提取两种僵蚕的酸溶、碱溶、水溶及醇溶性总蛋白质,对其进行丙酮分级沉淀,对所得样品进行SDS-PAGE指纹图谱对比分析,对所得差异条带进行LC-MS/MS分析,数据库检索后进行生物信息学分析。两种僵蚕的总蛋白质指纹图谱相似度很高,难以据此进行产地鉴定;两种僵蚕的分级指纹图谱则有较显著差异,有望用于产地鉴定;依据分级指纹图谱差异共鉴定出β-葡萄糖苷酶、抗胰凝乳蛋白酶、抗胰蛋白酶、含脂肪酶结构域蛋白等273种蛋白质。云南与四川僵蚕的蛋白质组成及其分级指纹图谱存在显著差异,有望用作产地鉴定的分子依据;醇溶蛋白质构建分级指纹图谱可以提供更加丰富的信息及更好的分辨率;分级指纹图谱技术具有简便易行、分辨率较高的优点,为其他中药材的产地鉴定研究提供了方法学思路。

响应面法优化金钱白花蛇醇溶蛋白提取工艺

以金钱白花蛇为原料,在单因素试验基础上采用响应面法优化其醇溶蛋白提取工艺,并进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、高效液相色谱(HPLC)、傅里叶变换红外光谱(FTIR)指纹图谱分析。结果表明:最佳提取工艺条件为乙醇体积分数40%、料液比1∶17(g/mL)、提取时间4 h、提取温度40℃,此时醇溶蛋白得率为0.51%。SDS-PAGE指纹图谱分析表明金钱白花蛇醇溶蛋白分子质量主要介于26.69~88.02 kDa,26.69~28.34 kDa和70.84~88.02 kDa处的蛋白质丰度较高,分别占蛋白质总量的55.2%和31.8%;HPLC结果表明,主要金钱白花蛇醇溶蛋白的保留时间为2.928和3.452 min;FTIR结果表明,金钱白花蛇醇溶蛋白在3526.67、2918.31、2357.83、1940.24、1354.05、841.90、546.07和444.52 cm^(-1)处有特征吸收峰。试验结果可为金钱白花蛇醇溶蛋白资源的开发利用及药理活性研究提供依据。

金钱白花蛇碱溶性蛋白质的提取工艺优化及其表征

目的:优化金钱白花蛇碱溶性蛋白质(bmASP)的提取工艺,并对其进行SDS-PAGE、HPLC、FTIR表征。方法:在单因素试验基础上,以提取pH值、料液比、提取时间和提取温度为自变量,bmASP提取率为因变量,基于Box-Behnken组合设计对提取工艺进行响应面优化,对提取产物进行HPLC、FTIR、SDS-PAGE分析。结果:最佳提取工艺条件为:提取pH值为8.0,料液比为1∶40(g/mL),提取时间为5.0 h,提取温度为45℃,bmASP提取率为5.96%。HPLC结果表明bmASP的保留时间为2.998、4.745、4.977、5.672 min;FTIR结果表明bmASP在3 551.45、3 575.95、3 413.06 cm^(-1)等处有特征吸收峰;SDS-PAGE指纹图谱结果表明bmASP分子量介于18.4~116 kDa,其中18.4~19.5 kDa、23.38~25.11 kDa、32.53~38.64 kDa、58.62~65.96 kDa的蛋白质含量丰富。结论:bmASP提取工艺的响应面模型可靠有效,结果稳定,可为金钱白花蛇药效物质基础的研究、资源开发利用及真伪鉴定提供实验依据。

白芷在斑马鱼中的降血糖作用及分子对接研究

目的:初步确定白芷对斑马鱼的降糖作用,并通过分子对接分析其降血糖作用的主要活性成分和关键的结合蛋白。方法:1%葡萄糖诱导6月龄雄性斑马鱼建立高糖模型,以二甲双胍(5 mg/L)为阳性对照药,白芷75%乙醇提物低剂量组(含生药量66 mg/L)和高剂量组(含生药量200 mg/L),连续给药7 d,断尾测血糖。分子对接中以白芷中含量较高的欧前胡素(1)、异欧前胡素(2)等16个化合物为配体,蛋白酪氨酸磷酸酶-1B(PTP1B)等6个蛋白为受体,采用AutoDock Vina软件进行对接,依据结合能虚拟筛选白芷中降血糖活性成分并初步确定降糖关键蛋白。结果:白芷有明显的降斑马鱼高血糖作用,低剂量组和高剂量组斑马鱼的血糖值较模型组分别降低了27.1%和41.2%。分子对接中香豆素类化合物1~5和9、倍半萜类化合物10的结合能较化合物11~16更高,其中氧化前胡素(4)与醛糖还原酶(AR)的结合力最强,结合能为-9.2 kcal/mol,欧前胡素(1)、珊瑚菜素(3)、白当归脑(6)与AR间的结合能也较高,均超过-9.0 kcal/mol。异欧前胡素(2)、水合氧化前胡素(5)与过氧化酶增殖受体(PPARγ)、二肽基肽酶-Ⅳ(DPP-Ⅳ)和PTP1B的结合能力也较强,均超过-7.5 kcal/mol。结论:白芷具有降血糖作用,其主要物质基础可能是香豆素类成分;蛋白AR、PPARγ、PTP1B、DPP-Ⅳ是其潜在的作用靶点。