利用CRISPR/Cas9构建敲除小鼠模型研究PPP2R3A基因对心脏功能的影响

目的 应用CRISPR/Cas9技术构建蛋白磷酸2调节亚基B″家族α亚型(PPP2R3A)基因敲除小鼠,从分子水平及组织水平上研究PPP2R3A缺失对心脏的影响。方法 将Cas9 mRNA和两个靶向PPP2R3A第3外显子翻译起始密码子附近区域的单导向RNA微注射到C57BL/6小鼠受精卵中。小鼠出生后取其基因组DNA进行聚合酶链反应(PCR)和测序以鉴定基因型,鉴定后,基因PPP2R3A缺失型小鼠为KO组,野生型C57BL/6小鼠为WT组(雄性3只,雌性2只)。小鼠心脏组织经甲醛固定并制成切片后分别进行苏木素-伊红(HE)染色和免疫组织化学染色。提取小鼠心脏组织总RNA和蛋白,应用荧光定量PCR和Western印迹验证基因敲除小鼠的有效性和检测互作蛋白表达。结果 获得F1代PPP2R3A杂合小鼠,PCR和测序结果表明突变小鼠的基因型存在113 bp的缺失突变。与WT组相比,KO组心脏组织中PPP2R3A mRNA和蛋白表达量明显下降(均P<0.05),参与心脏发育的G蛋白信号转导调控因子(RGS)19表达量明显升高(P<0.05)。PPP2R3A蛋白表达受损引起了心脏组织病理学变化。结论 PPP2R3A在体内可能通过与RGS19蛋白互作来参与心脏的发育并对心脏功能产生影响。

BacT/ALERT VIRTUO与BACTEC^(TM)FX血培养系统性能评价的方法改良

目的改进验证方案,体外模拟临床标本平行检测,评估不同血培养系统检测病原菌的差异。方法二十种不同病原菌采用两步/三步法稀释获得小于30 CFU/mL的菌悬液,平行接种1mL到不同类型培养瓶进行检测并记录。结果BacT/ALERT FA Plus培养瓶检测金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、新型隐球菌、马尔尼菲蓝状菌时报阳时间较短,BACTEC^(TM)FX血培养系统树脂需氧瓶检测肺炎链球菌、马尔尼菲篮状菌、树脂厌氧瓶检测产单核李斯特菌、脆弱拟杆菌报阳时间较短,检测其余十一种病原菌时两种培养系统报阳时间没有差异。结论两种血培养系统在检测不同种类病原菌时各有优势,BacT/ALERT VIRTUO血培养系统检测较低浓度马尔尼菲篮状菌时优势显著。

中国西部地区老年患者临床分离菌的耐药及分布特点

目的了解中国西部地区10所医院2016—2017年老年患者临床分离菌的分布特点及其对抗菌药物的耐药性。方法按统一方案,采用纸片扩散法或自动化仪器法进行细菌药敏试验,按照美国临床和实验室标准化协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)2017年标准判读结果。结果共收集临床分离菌121374株,其中老年患者41448株,占34.1%。其中革兰阳性菌9499株,占22.9%;革兰阴性菌31949株,占77.1%。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的检出率分别为37.1%和79.3%。未发现万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺耐药葡萄球菌。除四环素、克林霉素和利奈唑胺外,屎肠球菌对其他抗菌药物耐药率均高于粪肠球菌;两者中均有少数万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺耐药株,耐药率均<3%。碳青霉烯类抗生素依然对肠杆菌科细菌保持良好的抗菌活性,耐药率均<10%。肺炎克雷伯菌对亚胺培南、美罗培南的耐药率分别为7.1%和9.9%,比2011年明显升高。铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为18.9%和17.8%。鲍曼不动杆菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率均>60%,高于全国平均水平(60.0%,2016年)。结论老年患者临床分离菌的耐药及分布特点不同于全国平均水平。经验用药应参考老年人群耐药监测数据,根据药敏试验结果合理选用抗菌药物。

多重耐药鲍曼不动杆菌血流感染的危险因素和预后分析

目的探讨多重耐药(MDR)鲍曼不动杆菌血流感染的危险因素及其对患者预后的影响。方法采用病例对照的研究方法,回顾性收集昆明医科大学第一附属医院2013-2018年鲍曼不动杆菌血流感染患者142例(142株),以MDR鲍曼不动杆菌血流感染111例(111株)为观察组,非多重耐药(NMDR)鲍曼不动杆菌血流感染31例(31株)为对照组,进行血流感染的危险因素分析;按预后分为预后不良组81例和好转组61例,进行预后的危险因素分析。结果鲍曼不动杆菌对常用抗菌药物耐药率高,除替加环素外,MDR鲍曼不动杆菌组的耐药率均高于NMDR鲍曼不动杆菌组,差异均有统计学意义(P<0.05)。MDR鲍曼不动杆菌组病死率高于NMDR鲍曼不动杆菌组(43.2%比3.2%),差异有统计学意义(P<0.05);MDR鲍曼不动杆菌组预后不良发生率高于NMDR组(69.4%比12.9%),差异有统计学意义(P<0.05);多因素分析结果显示呼吸衰竭、初始抗感染治疗不当是MDR鲍曼不动杆菌血流感染的独立危险因素。呼吸衰竭、使用导尿管、初始抗感染治疗不当、肺部感染是影响鲍曼不动杆菌血流感染预后的独立危险因素。结论MDR鲍曼不动杆菌血流感染所致的病死率较NMDR鲍曼不动杆菌病死率高。呼吸衰竭、初始抗感染治疗不当是MDR鲍曼不动杆菌血流感染的独立危险因素。呼吸衰竭、使用导尿管、初始抗感染治疗不当、肺部感染是影响鲍曼不动杆菌血流感染预后的独立危险因素。

2013—2015年云南省三级医院尿培养病原菌分布及耐药性分析

目的分析云南地区尿路感染患者病原菌分布和对常见抗菌药物的耐药状况,为合理选用抗菌药物提供客观依据。方法按统一方案,采用纸片扩散法或自动化仪器法进行细菌鉴定及抗菌药物敏感试验,判定标准按CLSI 2016年版,统计分析使用WHONET 5.6软件进行。结果 2013年1月—2015年12月云南省35家三级医院临床尿标本分离出病原菌42232株,女性患者尿标本占55.4%,其中65.0%为大肠埃希菌,男性患者尿标本占44.6%,其中39.6%为大肠埃希菌。42232株菌中革兰阴性菌32786株,占77.6%,革兰阳性菌9446株,占22.4%;以大肠埃希菌最常见(53.8%),其余依次为肠球菌属细菌(13.9%)、克雷伯菌属细菌(8.3%)和变形菌属细菌(3.5%)等。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs检出率分别为52.3%和44.4%。大肠埃希菌对抗菌药物的敏感率前9位依次为:厄他培南(99.7%)、美罗培南(99.7%)、亚胺培南(99.6%)、头孢替坦(97.6%)、阿米卡星(96.7%)、磷霉素(94.3%)、哌拉西林/三唑巴坦(87.4%)、呋喃妥因(83.3%)和头孢哌酮/舒巴坦(64.9%);耐药率最高的抗菌药物为氨苄西林(89.9%)。肺炎克雷伯菌对厄他培南(6.5%)和美罗培南(9.9%)耐药率低于10.0%。除阿米卡星和呋喃妥因外,住院患者分离出的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对各种抗菌药物的耐药率均高于门诊患者。除利奈唑胺和四环素外,屎肠球菌对其他抗菌药物的耐药率均明显高于粪肠球菌。不同抗菌药物3年耐药率变化趋势有所不同。结论云南地区尿培养病原菌以大肠埃希菌、肠球菌属和肺炎克雷伯菌为主。不同年份、不同地区、不同科室、不同年龄、不同性别及不同标本中病原菌对抗菌药物的耐药率各不相同。临床应依据药敏结果或参照当地细菌耐药性资料合理选择抗菌药物。

成人金黄色葡萄球菌血流感染133例的危险因素及预后分析

目的探讨133例成人金黄色葡萄球菌血流感染的相关危险因素及对患者预后的影响。方法对2013年1月-2017年12月确诊为金黄色葡萄球菌血流感染133例患者进行回顾性调查分析。结果133例患者均系医院感染,其中36例检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),检出率为27.1%(36/133),97例检出甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA),检出率为72.9%(97/133)。除对甲氧苄啶-磺胺甲唑外,MRSA组对常用抗菌药物的耐药率均高于MSSA组,未发现对万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺耐药株。MRSA组年龄≥65岁,呼吸衰竭,住院急诊,入住ICU,手术,使用有创呼吸机、导尿管、中心静脉导管显著高于MSSA组(P均<0.05);MRSA组患者病死率高于MSSA组(25.0%比5.2%),差异有统计学意义(P<0.05);MRSA组预后不良发生率高于MSSA组(41.7%比24.7%)(P<0.05),差异有统计学意义;MRSA组总住院时间长于MSSA组(24d比16d),差异有统计学意义(P<0.05);多因素分析结果显示:年龄≥65岁、入住ICU是预后不良的独立危险因素。结论MRSA感染所致的病死率较MSSA高,MRSA血流感染增加患者住院时间,年龄≥65岁、入住ICU是预后不良的独立危险因素。

长链非编码RNAFENDRR对宣威肺癌XWLC-05细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:检测非编码RNA FENDRR长链在宣威肺腺癌XWLC-05株细胞与非小细胞肺癌(NSCLC)A549株细胞中的表达,及其对细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法:实时荧光定量PCR检测FENDRR基因在XWLC-05与A549细胞中的表达;构建过表达p EX-3-FENDRR质粒并转染XWLC-05细胞,慢病毒干扰LV3-FENDRR载体转染A549细胞,实时荧光定量PCR检测转染后XWLC-05和A549细胞内FENDRR的表达;MTS法检测细胞增殖;Transwell小室法检测细胞迁移及侵袭能力的变化。结果:XWLC-05细胞中FENDRR基因表达明显较A549细胞低,成功提高转染p EX-3-FENDRR的XWLC-05细胞和降低转染LV3-FENDRR质粒的A549细胞中FENDRR m RNA水平。与对照组相比,过表达FENDRR可明显抑制XWLC-05细胞增殖[(1.23±0.13)vs(1.46±0.25),P<0.05]并降低其迁移、侵袭能力(P<0.05);干扰FENDRR表达,能够促进A549细胞增殖[(0.85±0.02)vs(0.77±0.08),P<0.05]、迁移与侵袭能力(P<0.05)。结论:lnc RNA FENDRR表达下调与宣威肺腺癌的发生发展相关,其在肿瘤恶性化过程中抑制肿瘤细胞的增殖与转移。

呼吸道合胞病毒肺炎患儿特异性免疫应答指标的测定

目的探讨肺炎患儿外周血中免疫球蛋白和T细胞亚群的变化。方法采用流式细胞术对50例呼吸道合胞病毒（RSV）肺炎患儿及40例正常儿童外周血T细胞亚群进行检测，采用免疫比浊法对免疫球蛋白进行检测。结果肺炎组与对照纽的IgG，IgM，IgA组间比较差异均有统计学显著性意义（P〈0．05）。RSV肺炎组与对照组外周血T细胞亚群CD8差异无统计学显著性意义（P〉0．05），CD4，CD4／CD8比值RSV肺炎组高于对照组，差异有统计学显著性意义（P〈0．05）。结论RSV肺炎患儿存在比较明显的体波免疫功能和细胞免疫功能紊乱，提示这两者在RSV感染所致的肺炎的发病机制上有一定的临床意义，建议在治疗中可采用免疫干预措施纠正机体存在的免疫失衡，以达到预防RSV肺炎患儿复喘甚至发展成为哮喘疾病。

不同部位来源的耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌检出情况及耐药性分析

目的:分析本院2018~2020年临床不同部位来源的耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)的检出情况及耐药性,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法:采用标准纸片法或仪器法,按照统一技术方案,鉴定并完成细菌耐药性检测。药敏结果依据美国临床实验室标准化协会(CLSI)标准进行判读,采用WHONET 5.6分析数据。结果:2018~2020年共检出肠杆菌目细菌11389株,其中,检出CRE 1690株(14.84%),2018年657株、2019年555株、2020年478株,呈逐年下降趋势。2018~2020年CRE菌株排名前3位的均是肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、阴沟肠杆菌,共检出肺炎克雷伯菌1452株(占85.92%)、大肠埃希菌94株(占5.56%)、阴沟肠杆菌56株(占3.31%)。不同部位来源的肠杆菌目细菌中CRE的占比不同。其中,脑脊液中CRE的占比最高,连续3年均超过30%,且呈增长趋势;尿液中CRE占比最低,低于10%。未发现对替加环素耐药的CRE。CRE除对碳青霉烯类抗菌药物耐药外,对其他抗菌药物普遍耐药。对部分抗菌药物敏感的不同部位来源的CRE的耐药率不同。对部分抗菌药物敏感的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的耐药率高于碳青霉烯类耐药大肠埃希菌与碳青霉烯类耐药阴沟肠杆菌。结论:CRE的检出率呈逐年下降趋势,构成和耐药性变化不大。不同部位来源的CRE检出率不同,检出的CRE耐药性不同,临床需结合CRE来源部位制定抗感染方案。

遗传性白内障家系的候选基因突变筛查

目的:对散发遗传性白内障患者主要候选基因突变进行筛查。方法:收集2例蓝点状白内障、2例人字缝白内障、1例海马状白内障患者外周血标本,应用蛋白酶K法提取白内障患者血液中的DNA,针对α晶体蛋白(CRYAs)、β晶体蛋白(CRYBs)、γ晶体蛋白(CRYGs)、缝隙连接蛋白-50(GJA8)基因外显子区域,用Primer3.0软件设计引物,用聚合酶链反应(PCR)和DNA测序、BLAST比对等方法检测CRYAs、CRYBs、CRYGs、GJA8基因的突变。结果:在CRYBA1中,发现两名蓝点状白内障患者在第2内含子区域5′端+75位的变异T→G,另外3例患者(表型为人字缝、海马状)未找到该变异。结论:蓝点状白内障患者的变异属于内含子的多态性位点,系该两例患者的一种遗传标记。此5例散发性白内障的致病基因突变,不存在于CRYAs、CRYBs、CRYGs、GJA8基因上,需继续筛查其他候选基因。

42例布鲁菌病的临床分析

目的分析布鲁菌病患者的流行病学特征、临床表现、诊断及治疗效果,减少临床的误诊,为布鲁菌病的临床诊断及治疗提供实践基础和经验方法。方法根据42例布鲁菌病患者的性别、年龄、牛羊接触史,发热、出汗、关节肌肉疼痛等临床表现,以及诊断及临床治疗等相关资料,对上述流行病学特征和临床表现等资料进行回顾性分析。结果患者以中年男性居多,男35例,女4例,儿童3例,全年均有发病;39例患者有明确动物接触史,其中长期饲养猪、牛、羊者38例(90.5%);主要临床表现有发热42例(100.0%),乏力32例(76.2%),肌肉和关节疼痛18例(42.9%),多汗5例(11.9%),以发热症状最为常见。其他检查显示,脾肿大29例(69.0%)。病原学检查:均为血培养阳性,培养出"马尔他布鲁菌"。患者治疗以利福平联用多西环素最常见22例(52.4%),四环素治疗10例(23.8%)。32例患者治愈、好转(76.2%),8例门诊患者用药不祥,2例出院后门诊追踪治疗。结论布鲁菌病患者以男性多见,临床表现多样化,血培养阳性可明确诊断,临床医师应加强辨别,防止误诊,并根据患者情况进行及时、有效的治疗;同时应加强布鲁菌病的监管和宣教。

2017年-2021年云南地区无菌体液细菌的分布特征及耐药性分析

目的探讨云南省无菌体液标本(不含血液)细菌的分布及耐药情况。方法选取2017年至2021年云南省9家三级综合医院无菌体液标本,排除同一患者重复株,使用WHONET5.6软件对药物敏感性数据进行统计分析。结果腹水是菌株分离率最高的标本类型,占32.7%。所有标本中共分离出5305株菌,革兰阳性菌占53.3%,分离率第一为表皮葡萄球菌;革兰阴性菌占46.7%,以大肠埃希菌为主。耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药情况二者相当。屎肠球菌对于常用抗菌药耐药率呈下降的趋势。肺炎克雷伯菌对美罗培南和亚胺培南的耐药率分别为35.6%、40.3%,均高于2021年我国CHINET水平,且耐药率呈逐年升高的趋势。鲍曼不动杆菌仍保持耐多药的形式,尤其对碳青霉烯类药物耐药率高达82%。结论监测无菌体液病原菌来源广泛,不同菌属间碳青霉烯耐药形势严峻。仍需重点监测耐第三代头孢菌素的肠杆菌和耐碳青霉烯的肠杆菌、鲍曼不动杆菌。

工程机械产品质量检验风险决策系统的研究

基于运筹学和模糊数学的理论和方法 ,建立了工程机械质量检验风险决策系统模型 ,求出了质量指标的相对权重值 ,构造了质量判断矩阵和检验风险决策矩阵 ,求出了工程机械产品的生产方和使用方风险值的最优解 ,使风险决策系统最优化 ,并给出了实例 ,进行了量化处理。

ST2:新一代心衰管理标志物

心力衰竭(简称心衰)为各种心脏疾病的严重和终末阶段,发病率高,是当今最重要的心血管疾病之一。目前心衰的诊断和治疗已经取得很大进步,但心衰患者5年病死率仍可高达50%。寻找灵敏、特异的血清/血浆生物标志物对帮助诊断或鉴别诊断心衰、判断预后及危险分层具有重要的临床应用前景。目前,ST2作为新一代心衰管理标志物,具有不受年龄、种族、肾功能的影响以及单一阈值等特点,在心衰患者的诊断、治疗、预后评估及风险预测中发挥着重要作用。

ISO15189在临床微生物学检验技术教学管理中的应用

目的探讨ISO15189质量管理体系在临床微生物学检验技术专业进修医生教学管理中的应用,以提高检验医学专业的教学质量,培养高素质、复合型检验医学专业人才,不断持续改进检验医学教学质量。方法参照国内外医学实验室广泛认可的ISO15189质量管理体系培训和管理进修医生。首先,通过鼓励教师间经验交流、参加讲课比赛,提高教学质量;鼓励教师参加相关学术会议,并参与检验新项目的开展与科研项目的申报,强化师资队伍建设。其次,完善进修医生管理制度,优化进修医生档案管理细则,定期组织培训学习,进行问题式教学和立体化教学,完善导师带教制,规范结业鉴定。结果本科室培养的进修医生工作能力均较强,临床微生物学专业教学质量得到明显提高。结论应用ISO15189质量管理体系的进修医生能够掌握ISO15189的各要素,可以发现并解决临床工作中常见的专业问题,同时具备一定的科研能力。

一个常染色体显性遗传视网膜色素变性家系突变基因筛查

目的对一个四代常染色体显性遗传视网膜色素变性家系进行突变基因的筛查。方法选取了常见的11个视网膜色素变性（retinitis pigmentosa，RP）相关致病基因：视紫红质（rhodopsin，RHO，RP4）基因、视网膜变性慢蛋白（peripherin 2／retinal degeneration slow PRPH2／RDS，RP7）基因、视网膜色素变性1（retinitis pigmentosa 1，RP1）基因、前体mRNA处理因子31（pre—mRNA processing factor31，PRPF31，RP11）基因、次黄苷单磷酸脱氢酶1型（inosine monophosphate dehydrogenase 1，IMPDH1，RP10）基因、视杆外节蛋白1（rod outer segment protein 1，ROM1）基因、神经视网膜亮氨酸拉链（neural retina leucine zipper，NRL，RP27）基因、Pim1激酶相关蛋白1（piml—kinase associated protein1，PAP1，RP9）基因、视锥-视杆同源盒（cone—rod homeobox—containing，CRX）基因、前体mRNA处理因子3（pre—mRNA processing factor3，PRPF3，RP18）基因、前体mRNA处理因子8（pre—mRNA processing factor 8，PRPF8，RP13）基因。通过聚合酶链式反应扩增这11个RP相关致病基因的外显子和邻近拼接位点，扩增产物进行正、反双向测序。结果①对常见的11个RP相关致病基因的64个片段的研究显示，除了基因多态性和内含子的变异外，未发现与疾病有关的外显子或邻近拼接住点的突变。②首次在中国人种中发现RP9基因的c．629A→G，（Lys210Arg）变异。结论该文设计研究的突变基因未被检测到，表明此家系在11个RP相关致病基因的外显子和邻近拼接位点无基因突变。

296例成人大肠埃希菌血流感染的危险因素及预后分析

目的探讨成人产超广谱β内酰胺酶(ESBL)大肠埃希菌血流感染的危险因素及对患者预后的影响。方法采用病例对照的研究方法,回顾性收集2017年1月—2019年8月大肠埃希菌血流感染患者296例,其中产ESBL大肠埃希菌血流感染患者191例为观察组,以同期非产ESBL大肠埃希菌血流感染患者105例为对照组,进行血流感染的危险因素分析。按预后分为预后不良组53例和好转组243例,进行预后的危险因素分析。结果296例患者检出的296株大肠埃希菌中产ESBL检出率为64.5%。所有菌株对氨苄西林、头孢唑林、头孢呋辛、哌拉西林、四环素、氨苄西林-舒巴坦、头孢噻肟、头孢曲松和头孢哌酮的耐药率均大于60%;除碳青霉烯类、阿米卡星、甲氧苄啶-磺胺甲■唑和四环素外,产ESBL菌的耐药率均高于非产ESBL菌,差异均有统计学意义(P<0.05)。产ESBL菌感染组患者预后不良率高于非产ESBL菌感染组(21.5%比11.4%),差异有统计学意义(P<0.05)。多因素分析结果显示留置导尿管是产ESBL大肠埃希菌血流感染的独立危险因素。感染性休克、入住ICU、低血红蛋白血症、低白蛋白血症是影响大肠埃希菌血流感染预后的独立危险因素。结论留置导尿管是产ESBL大肠埃希菌血液感染的独立危险因素。感染性休克、入住ICU、低血红蛋白血症和低白蛋白血症是影响大肠埃希菌血流感染预后的独立危险因素,应引起重视以改善预后。

CRE对多粘菌素B的敏感性及两种检测方法的差异

目的采用两种不同方法分析耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)对多粘菌素B的敏感性,为实验室选择药敏方法和临床合理用药提供依据。方法收集昆明医科大学第一附属医院2018年1-12月分离的230株CRE菌株,分别采用E-test法和微量肉汤稀释(BMD)法检测CRE对多粘菌素B的敏感性,分析两种药敏方法之间的差异性。结果菌株主要来源以痰为主,占70.87%(163株),其次是血(33株,14.35%)和分泌物(15株,6.52%),病原菌分布以肺炎克雷伯菌为主(205株)。CRE菌株E-test方法的敏感率为96.52%,耐药率为3.48%;BMD法的敏感率为95.65%,耐药率为4.35%。两种方法的基本一致率为95.65%,分类一致率为99.13%,极重大误差为0.87%。结论多粘菌素B对CRE有较好的抗菌活性,E-test法操作简便,和BMD法一致性好,可应用于临床常规药敏试验。

昆明地区耐碳青霉烯类抗生素铜绿假单胞菌的分子流行病学特点及耐药特征分析

目的研究耐碳青霉烯类抗生素铜绿假单胞菌分子流行病学规律及耐药机制,为临床预防和治疗铜绿假单胞菌的感染提供理论依据。方法对多中心收集的耐碳青霉烯类抗生素铜绿假单胞菌(carbapenems-resistant Pseudomonas aeruginosa,CRPA)开展多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)和遗传信息研究,并对碳青霉烯酶基因与外膜孔蛋白OprD编码基因进行序列分析。结果多位点序列分型方法将81株CRPA分为36个ST型,总体以ST3390(41.98%,34/81)为主,其中有5种为新发现的ST型别;CRPA菌株中碳青霉烯酶基因的检出率较高(65.43%,53/81),尿液标本检出率最高(80.00%,28/35),其中IMP、VIM和NDM型碳青霉烯酶基因检出率分别为37.04%、27.16%和1.23%,未检测到KPC、GES、SPM和OXA-40型碳青霉烯酶基因;oprD基因的序列比对分析发现,高达96.29%(78/81)CRPA临床分离株发生了各种类型的突变,以单个或者多个碱基的插入或缺失为主(76.54%,62/81)。结论81株CRPA主要的耐药机制为膜孔蛋白基因突变和产碳青霉烯酶;存在ST3390克隆株的局部流行,应加强医院感染防控措施,防止暴发流行。

肠道定植耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌分子特征及其感染相关研究

目的通过对直肠拭子主动筛查出的耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(Carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE)和对应患者感染后分离出的CRE进行配对分析研究,以探讨CRE定植和感染之间的分子特征异同,为临床CRE感染的防控提供帮助和指导。方法采集2021年1月至2021年12月住院患者直肠拭子标本进行CRE菌株筛查。监测筛查阳性患者的感染发生情况,对感染菌株及其定植菌株同时进行多位点序列分型、耐药基因和毒力基因检测,并进行测序分析。结果CRE主动筛查定植率为2.41%(75/3116),其感染率为45.3%(34/75)。碳青霉烯酶耐药基因检出以bla_(KPC)为主:定植组bla_(KPC)(25/34)、bla_(OXA48)(9/34),感染组bla_(KPC)(25/34)、bla_(OXA48)(10/34),检出率P>0.05;ST分型以ST11型检出率最高,定植组ST11型(25/34)、ST231型(9/34),感染组ST11型(25/34)、ST231型(9/34),检出率P>0.05。毒力基因检出率较高的为:定植组mrkD(34/34)、uge(32/34)、fimH(33/34)、wabG(32/34)、entB(32/34),感染组mrkD(34/34)、fimH(31/34)、uge(34/34)、wabG(31/34)和entB(30/34),检出率P>0.05。定植菌是否发生感染与毒力基因uge、iucA、iutA、rmpA和iroB相关,P≤0.05。结论肠内定植CRE与其感染CRE之间高度同源,主动筛查是防控CRE感染的重要举措,通过CRE主动筛查对高危人群预防CRE感染意义重大。