木姜叶柯叶改善小鼠高尿酸血症肾病作用及其机制

目的探究木姜叶柯叶对小鼠高尿酸血症肾病(HN)肾功能和炎症的改善作用及潜在治疗机制。方法采用腺嘌呤和氧嗪酸钾联合给药建立HN模型,将小鼠随机分成正常对照组,模型对照组,苯溴马隆组,木姜叶柯叶大、中、小剂量组,分别给予不同药物,每周记录1次小鼠体质量,第21天采集并检测各组血清或尿液中尿酸(UA)、肌酐(Cr)、尿蛋白(UP)和血液尿素氮(BUN)、尿液尿素氮(UUN)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量;苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠肾组织损伤情况;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)测定肾组织中ABC转运蛋白G家族成员2(ABCG2)、尿酸转运蛋白1(URAT1)、葡萄糖转运体9(GLUT9)、核转录因子NF-κB p50(κB p50)。结果与正常对照组相比,模型对照组小鼠体质量在给造模药第2周后明显降低(P<0.05),UA、Cr、UP、BUN、UUN、TNF-α、IL-6含量及肾组织GLUT9、κB p50 mRNA表达含量显著升高(P<0.01或P<0.05)。与模型对照组相比,木姜叶柯叶大、中、小剂量组Cr、UP、BUN和UUN含量以及肾组织κB p50 mRNA表达显著降低(P<0.01或P<0.05),木姜叶柯叶大剂量组UA水平明显降低(P<0.05),中剂量组肾脏ABCG2 mRNA表达显著升高(P<0.01),小剂量组URAT1 mRNA表达显著降低(P<0.01)。结论木姜叶柯叶对小鼠高尿酸血症肾病有一定改善作用,其机制可能与调控肾脏尿酸转运蛋白、改善肾功能和抗炎有关。

葛根芩连汤含药血清对游离脂肪酸诱导的HepG2细胞脂肪堆积模型FXR通路相关信号因子的影响

目的利用体外游离脂肪酸(Free Fat Acid,FFA)诱导的HepG2细胞脂肪堆积模型,分析葛根芩连汤含药血清对FXR通路相关信号因子的影响。方法用1mmol/L FFA诱导HepG2细胞建立脂肪堆积模型,给予不同浓度的葛根芩连汤和吡格列酮含药血清进行干预。采用TG试剂盒法检测HepG2细胞脂肪变性状况。WB法检测HepG2细胞内FXR蛋白表达水平。qRT-PCR法检测各组HepG2细胞内FXR、CYP7A1、SHP、FGFR4和TGR5 mRNA表达程度。结果葛根芩连汤中剂量组、低剂量组的TG含量比模型组显著降低(P<0.01,P<0.05)。WB实验表明,与模型组相比,葛根芩连汤中剂量组与吡格列酮组FXR蛋白表达量显著增加(P<0.01,P<0.05)。qRT-PCR实验表明,与模型组相比,葛根芩连汤高、中、低剂量组FXR、SHP、FGFR4和TGR5 mRNA表达水平均显著升高(P<0.01),CYP7A1 mRNA表达水平均显著降低(P<0.01,P<0.05)。吡格列酮组内FXR、SHP、FGFR4和TGR5 mRNA表达水平显著升高(P<0.01,P<0.05),CYP7A1 mRNA表达水平显著降低(P<0.01)。结论葛根芩连汤能够减轻FFA诱导的HepG2细胞脂肪变性,其机制可能与FXR信号通路有关。

基于Nrf2/TXNIP信号通路探讨葛根芩连汤含药血清对非酒精性脂肪性肝炎的影响

目的:探讨葛根芩连汤(GGQLT)含药血清对游离脂肪酸(FFA)诱导人肝癌细胞HepG2非酒精性脂肪性肝炎(NASH)体外模型的影响。方法:建立HepG2细胞NASH体外模型,使用不同体积分数的GGQLT含药血清及白藜芦醇干预细胞。利用油红O染色检测各组细胞内脂质沉积;采用流式细胞术检测各组细胞内活性氧(ROS)水平;通过试剂盒检测各组细胞内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和甘油三酯(TG)、丙二醛(MDA)含量。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组HepG2细胞内核转录因子(NF)E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、NF-κB、白细胞介素-1β(IL-1β)、硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)的mRNA表达情况。运用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞Nrf2、TXNIP的蛋白表达情况。结果:FFA诱导引起细胞内脂质大量堆积。与正常组比较,模型组抗氧化酶GSH-Px和SOD的活性显著降低(P<0.01),TG、ROS和MDA含量明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,GGQLT各剂量组和白藜芦醇组均可不同程度地升高细胞内SOD的活性(P<0.05,P<0.01),明显降低细胞内ROS、MDA水平(P<0.05,P<0.01);GGQLD高、中剂量组和白藜芦醇组可显著升高GSH-Px的活性(P<0.01),GGQLD中、低剂量组和白藜芦醇组明显降低TG的含量(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,GGQLT高、中剂量组和白藜芦醇组可显著上调Nrf2、HO-1、NQO1的mRNA表达水平(P<0.01),GGQLT各剂量组、白藜芦醇组可明显下调TXNIP蛋白表达水平和Keap1、NF-κB的mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01)。Nrf2-小分子干扰核糖核酸(siRNA)转染细胞后发现,与相应剂量药物的阴性对照(NC)-siRNA组比较,其Nrf2-siRNA组细胞内Nrf2表达显著下调(P<0.01);GGQLT和白藜芦醇对TXNIP、IL-1β的抑制作用被减弱。结论:FFA诱导HepG2细胞内产生ROS和炎症因子,GGQLT可提高细胞的抗炎、抗氧化能力,其作用机制可能与调节Nrf2/TXNIP信号通路相关,进而达到改善NASH的目的。