牛乳中白色念珠菌和近平滑念珠菌双重定量PCR检测方法的建立

为建立生牛乳中白色念珠菌和近平滑念珠菌的快速检测方法,根据GenBank已公布的基因序列分别设计2种念珠菌的种特异性引物,采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法检测目标菌的基因组DNA,并进行特异性、敏感性和重复性试验,用该方法对含有目标菌的生牛乳样本进行检测。结果表明,该方法特异性强,与对照菌株光滑念珠菌、克柔念珠菌、热带念珠菌和烟曲霉等病原真菌无交叉反应;灵敏度高,对白色念珠菌和近平滑念珠菌的最低检出量均为10 CFU/mL;重复性好,T m值和Ct值变异系数分别在0.1%和2.5%之内。该方法操作简便、耗时短,2 h^3 h即可完成整个检测过程。建立的方法能用于生牛乳中白色念珠菌和近平滑念珠菌的一次性快速、准确和定量检测。

产蛋高峰期蛋鸡低产综合征调查

最近有些养殖企业或养殖户反映,220~240日龄蛋鸡,产蛋率低,在70%左右,鸡精神状态、采食和粪便未见异常,通过药物治疗,调整饲料配方等措施,虽有一定作用,但效果不明显。鉴于这种情况,河北省蛋、肉鸡产业体系蛋鸡高效养殖岗位专家,对蛋鸡养殖集中地区的石家庄、邢台和邯郸等区进行调查,旨在弄清低产原因,为该病防治奠定基础。1材料与方法1.1病料采取疑似病鸡剖检,观察大体病变并进行记录。

光滑念珠菌SYBR Green荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为建立光滑念珠菌快速准确灵敏的检测方法,根据GenBank已发表的光滑念珠菌rDNA内转录间隔区核苷酸序列设计1对特异性引物,应用SYBR Green实时荧光定量PCR方法检测光滑念珠菌,对临床分离的多株不同来源光滑念珠菌病料进行检测,通过临床常见的5种病原真菌对该方法的特异性进行检验,并用人工感染小鼠的血液、肝脏组织样本对所建方法进行检验。结果显示,该方法灵敏度高,光滑念珠菌的最低检出浓度为10 copies/μL,特异性强,与白色念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌、烟曲霉菌等病原菌无交叉反应。该方法操作简单,耗时短,只需1 h即可完成全部检测过程。上述结果表明,SYBR Green荧光定量PCR可应用于光滑念珠菌早期侵袭的快速检测,为光滑念珠菌病的及时正确防治提供了可靠依据。

不同序列型禽白念珠菌对鸡致病性的研究

为了探究不同禽类来源和序列型（STs）的白念珠菌菌株对鸡致病力的差异,以禽源白念珠菌多位点序列分型（MLST）中三个主要克隆群Group 25、Group 26和Group 34的发源序列型（founders）ST 3221、ST 3164和ST 3226的代表株BDK7、RZ-1和BYCSF为试验菌株,分别采用嗉囊注射和颈静脉注射接种途径感染蛋雏鸡,通过观察临床症状、剖检病变、组织病理学变化和生存统计分析,比较试验菌株对鸡致病力的差异。三个试验菌株均可对蛋雏鸡致病,侵染的主要靶器官是肝脏和脾脏;嗉囊接种组鸡的总死亡率仅9.3%（7/75）,远小于静脉接种组鸡的总死亡率61.3%（46/75）;从试验菌株致病力的比较来看,嗉囊接种组和静脉接种组的致病力排序分别为RZ-1〉BDK7〉BYCSF和BDK7〉RZ-1〉BYCSF。研究结果表明,不同禽类来源的白念珠菌试验菌株均可使蛋雏鸡致病;不同基因型菌株间的致病力差异显著;当感染途径不同时各试验菌株表现出的相对毒力也明显不同。

河北省鸡肉中四种主要致病菌的多重定量PCR检测方法的建立与应用

为了建立鸡肉中沙门菌、金黄色葡萄球菌、奇异变形杆菌和肠球菌等病原菌的快速检测方法。设计4种病原菌特异引物,建立多重SYBR Green Ⅰ定量PCR方法,对河北地区销售的鸡肉进行检测。结果,建立了多重定量PCR方法,与大肠杆菌、单增李斯特菌、副溶血性弧菌、志贺菌、绿脓杆菌、链球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽胞杆菌、阴沟肠杆菌等菌无交叉,最低检出浓度为10CFU/m L,重复试验的变异系数为0~0.1%。销售鸡肉中金黄色葡萄球菌、沙门菌、奇异变形杆菌、肠球菌的检出率分别92.1%、88.1%、72.3%和11.9%。本研究建立的多重定量PCR方法敏感、特异、稳定,可用于鸡肉中沙门菌、金黄色葡萄球菌、奇异变形杆菌和肠球菌的快速检测。

定量PCR快速鉴别念珠菌种方法的建立

由于禽类念珠菌种类多样,具有条件致病和感染症状非典型的特性,在临床上区分定植和感染状态并确诊何种念珠菌感染是困难的。为了快速准确地检测禽类念珠菌感染和鉴别病原种类,本研究借助Primer Express 6.0软件设计目标念珠菌基因组DNA的种特异引物,采用real-time qPCR技术,通过检测不同念珠菌种的菌株培养物而建立鉴别方法,并用人工感染鸡的血液和肝脏样本对建立的方法进行检验。结果,成功找出三种念珠菌(白色念珠菌、光滑念珠菌和热带念珠菌)的3对特异引物和1对共用引物;特异引物分别形成相应种的特异熔解曲线,共用引物形成对应于3个种且明显分开的三条熔解曲线,与参照病原菌无交叉反应;该方法对念珠菌样本检测最低限度可达1×10~1copies/L以下,敏感度高于常规PCR约100倍以上;同种念珠菌不同模板浓度Tm值不变,同一浓度3个重复C_t值的变异系数小于2.5%,说明离散度较低,重复性好。所建方法可以通过对感染鸡的血液和肝脏样本的检测确定目标念珠菌感染和病原种类,检测周期约2~3 h。综上,通过适当的引物设计,采用定量PCR技术可以在一定范围内快速、准确、定量地检测和鉴别感染样本中的目标念珠菌种类。