脓毒症大鼠来源的外泌体对WJ-MSC的免疫调控能力的影响

目的探究脓毒症大鼠外周血来源外泌体对人脐带华通胶来源间充质干细胞(WJ-MSC)免疫调控能力的影响。方法采用盲肠穿孔结扎(CLP)方法建立脓毒症大鼠模型,分别提取对照组(假手术组)和实验组(CLP模型组)大鼠外周血的外泌体,鉴定其表面标志物及形态特征,并分别处理WJ-MSC,CCK8检测WJ-MSC的细胞活性,Annexin-VFITC/PI检测凋亡细胞比例,q PCR检测细胞因子(IL-10、TNF-α)的mRNA水平;分别将两组外泌体处理后的WJ-MSC与LPS刺激后的人单核巨噬细胞(THP-1)共培养,q PCR检测THP-1细胞中细胞因子(IL-6、IL-10、TNF-α、IL-1β)的mRNA水平变化。结果两组外泌体在表面标志物和形态特征上无明显差异;实验组外泌体不影响WJ-MSC的增殖活性,但可抑制其凋亡,同时能够上调IL-10的mRNA表达,下调TNF-α的mRNA表达;经过两组外泌体处理后的WJ-MSC,均能够降低LPS刺激下THP-1细胞中促炎性细胞因子(IL-1β,TNF-α)的表达,两组无明显差异。结论脓毒症大鼠外周血来源的外泌体能够上调WJ-MSC中IL-10的表达,下调TNF-α的表达,可增强其免疫调控能力。

居家腹膜透析患者自我管理量表的编制及信度、效度分析研究

目的·完成腹膜透析(腹透)患者居家透析操作过程中自我管理水平量表的编制及信度、效度分析。方法·通过患者访谈、专家咨询、查阅文献等方式,在结合腹透患者管理临床经验的基础上完成对初始量表的编制。采用方便抽样的方式发放问卷,通过临界比值法、同质性检验筛选条目,探索性因子分析评估结构效度,最终确定量表共同因素数目及条目。计算Cronbach’sα系数、折半系数对量表信度进行分析。结果·初始量表由5个维度26个条目组成,共发放136份问卷,收集有效问卷132份。根据项目分析结果,除条目3未达到校正题项与总分相关性、共同性、因素负荷量的筛选条件外,其余条目均满足入选标准。因条目3是考察患者无菌意识的关键步骤,经专家咨询后保留该条目至因素分析。初始量表取样适切性量数(KMO)值为0.880,Bartlett’s球形检验χ2值为2272.938(P=0.000),提示总体的相关矩阵有共同因素存在,适合进行因素分析。根据量表初始设计条目初衷,限定萃取5个共同因素,采取直交转轴的最大变异法,最终删除条目7、11、16,根据各因素构面包含的条目变量特性,提取的共同因素分别命名为“对腹透并发症和腹透充分性评价的知晓度”“腹透规范化操作能力”“药物管理能力”“饮食管理能力”“腹透效果评估和监测能力”,形成5个维度23个条目的正式量表,各维度的特征值分别为4.604、3.286、3.207、2.817、2.140,累积方差贡献率为66.428%。最终总量表Cronbach’sα系数为0.930,折半系数为0.946。结论·腹透患者自我管理水平量表具有良好的信度和效度,可用于腹透患者自我管理能力测评。

BK通道抑制剂对人脐带华通胶来源的间充质干细胞的增殖、凋亡及细胞因子的影响

目的探究BK通道抑制剂对人脐带华通胶来源的间充质干细胞(WJ-MSC)的细胞活性、细胞凋亡、细胞因子分泌的影响。方法以组织贴壁法分离培养人WJ-MSC,Western-blot检测BK通道的表达;用不同浓度BK通道抑制剂处理后,CCK-8法检测细胞活性,Annexin-V-FITC/PI检测细胞凋亡,Elisa检测细胞因子(IL6、IL10)的表达。结果人WJ-MSC上存在BK通道的表达,BK通道抑制剂能够明显降低细胞活力(P<0.05);促进细胞凋亡(P<0.05);促进细胞因子(IL6)的分泌(P<0.05),但并不增加IL10的分泌。结论 BK通道抑制剂能够抑制人WJ-MSC的活性,促进细胞凋亡,促进IL6的分泌。

间充质干细胞外泌体对腹膜间皮细胞高糖损伤的作用研究

目的 探讨间充质干细胞来源外泌体(MSCs-Exo)对高糖致腹膜间皮损伤的影响。方法 将MET-5A细胞分成3组:正常对照组(不予处理)、高糖组(高糖处理)、共培养组(高糖和MSCs-Exo共培养),通过CCK-8法选用效果最明显的高糖浓度和MSCs-Exo浓度,各组分别处理24 h后收集细胞和上清液。CCK-8法测定各组细胞增殖活力,流式细胞技术检测细胞凋亡情况,qRT-PCR检测细胞因子IL-6、TNF-α的表达,ELISA检测培养上清液中IL-6的水平。结果高糖组细胞的增殖能力明显低于正常对照组(P<0.001),细胞凋亡率、IL-6和TNF-α的表达显著高于正常对照组(P<0.001);与高糖组相比,共培养组细胞增殖能力提高(P<0.001),细胞凋亡率、IL-6和TNF-α的表达则明显下调(P<0.05)。结论 高糖对腹膜间皮细胞有明显的促凋亡和促炎作用,MSCs-Exo可以促进腹膜间皮细胞的增殖,抑制高糖刺激下细胞凋亡的发生和炎症因子的表达。

腹膜透析滤出液外泌体miR-200a在不同腹膜转运特性患者中的表达差异及其生物学功能预测

目的·提取和鉴定腹膜透析滤出液(peritoneal dialysis effluent,PDE)外泌体,比较不同腹膜转运特性患者PDE外泌体miR-200a的表达水平,预测其潜在靶基因及参与的生物学过程。方法·将20例腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)患者按照腹膜平衡实验(peritoneal equilibrium test,PET)值分为H组(高转运/高平均转运)和L组(低转运/低平均转运)。每位患者收集500 mL留腹过夜PDE,浓缩后超速离心,透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)、纳米粒子跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)和Western blotting鉴定外泌体。提取外泌体miRNA,实时荧光定量PCR检测2组患者PDE外泌体miR-200a的表达水平,分析其与PET值和超滤量的相关性。利用Targetscan、miRmap和miRWalk数据库预测miR-200a的靶基因,用DAVID数据库进行基因功能(gene ontology,GO)富集分析。结果·浓缩的PDE超速离心后提取到的外泌体,TEM下呈双层膜包裹的圆形囊泡,NTA显示其直径大多在50~150 nm,表面具有外泌体标志蛋白CD9和CD63。L组中PDE外泌体miR-200a的相对表达量显著高于H组,并且与PET值呈负相关(r=-0.871,P=0.000),与4 h超滤量呈正相关(r=0.448,P=0.048),但与24 h超滤量无相关性(r=0.355,P=0.125)。生物信息学分析发现共有679种基因可由3个数据库共同预测到;GO分析显示这些靶基因不仅参与正向调控间充质细胞增殖,也在金属离子结合方面有一定富集。结论·PDE中存在外泌体,腹膜转运特性较低的患者PDE外泌体miR-200a相对表达量较高,其与PET值呈负相关,与4 h超滤量呈正相关。miR-200a的潜在靶基因众多,可能通过不同生物学过程影响腹膜转运特性。

以假性肠梗阻为首发表现的原发性干燥综合征合并桥本甲状腺炎并文献复习

干燥综合征是一种常见的系统性自身免疫性疾病,其特征为外分泌腺受累,常存在口眼干、疲劳和关节痛症状,并且这3种症状见于80%以上患者,极度影响了患者的生活质量。该病可单独存在,或合并其他器官自身免疫性疾病如甲状腺炎,此时称为原发性干燥综合征。慢性假性肠梗阻是指有肠梗阻的症状和体征,但临床上无机械性肠梗阻证据的任何证据,是干燥综合征少见的临床症状,常伴有泌尿系改变(如肾盂积水、输尿管扩张等),临床医师对本病相关知识的缺乏,造成患者错误接受剖腹探查术,甚至若得不到及时诊治,危及生命。本文报道本院收治的1例诊断为以假性肠梗阻为首发表现的原发性干燥综合征合并桥本甲状腺炎,分析其临床特征及诊疗过程,以提高临床医师对该病的认识,现报道如下。

大电导钙依赖性钾通道对LPS诱导THP-1来源巨噬细胞免疫活性的影响

为鉴定人单核细胞系THP-1中大电导钙依赖性钾通道(large-conductance calcium-activated potassium channel,BKca)蛋白的表达及其对THP-1细胞活性、极化及细胞因子分泌功能的影响,用佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)诱导人单核细胞系THP-1,使其成为具有贴壁能力的巨噬细胞,用Western blotting检测BKca蛋白的表达,先后应用LPS和BKca特异性抑制剂影响巨噬细胞上BKca的活性,用CCK-8检测细胞活性的变化,流式细胞仪检测巨噬细胞表型极化情况,qRT-PCR检测细胞因子mRNA(TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10)的表达。结果显示,Western blotting检测到人单核细胞系THP-1来源的巨噬细胞上存在BKca的表达,随着BKca特异性抑制剂浓度的增加,细胞活力明显降低(P<0.05)。应用LPS和BKca特异性抑制剂,可抑制BKca的表达,降低M1标志物CD80的表达,促进M2标志物CD206的表达(P<0.05),同时降低其分泌的促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6的水平,促进抑炎因子IL-10的分泌(P<0.05)。该研究提示,BKca参与LPS诱导的巨噬细胞的早期活化及M2/M1亚型的极化,介导炎症反应的发生、发展,可能是抗炎治疗的潜在靶点。

不同腹膜转运特性患者腹膜透析滤出液外泌体miR-503表达差异及生物信息学分析

目的比较腹膜透析滤出液(PDE)外泌体微RNA(microRNA,miR)-503在不同腹膜转运特性患者中的表达差异,并预测miR-503的靶基因及其可能的生物学作用,为其在腹膜转运特性方面的研究提供生物信息学数据。方法选取24例稳定维持性腹膜透析(PD)患者,根据腹膜平衡试验(PET)结果分为高转运(高/高平均转运组,n=12)和低转运(低/低平均转运组,n=12)两组。收集患者留腹过夜的PDE 500 ml,利用超滤杯进行浓缩后,超速离心法提取外泌体,重悬于磷酸盐缓冲液(PBS),通过透射电镜(TEM)、纳米粒子跟踪分析(NTA)、Western印迹和荧光染色鉴定外泌体的形态结构和功能。提取PDE外泌体miR,实时荧光定量PCR法检测两组PDE外泌体miR-503的表达水平,并分析miR-503的相对表达量与PET值和24 h超滤量的相关性。使用Targetscan和miRDB数据库预测miR-503的靶基因,运用富集分析工具DAVID(https://david.ncifcrf.gov/)进行基因本体(gene ontology,GO)功能富集和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)信号通路分析。结果PDE中提取到的外泌体透射电镜下呈杯状,直径100 nm左右,表达特异性表面标志CD63、CD81和热休克蛋白-70(HSP-70),可被间皮细胞内化吞噬。与低转运组相比,高转运组PDE外泌体miR-503的相对表达量较高(P=0.002),且PDE外泌体miR-503的相对表达量与PET值呈正相关(r=0.547,P=0.006),但与24 h超滤量无相关性(r=-0.297,P=0.159)。miR-503共有156个靶基因可通过2个不同数据库同时预测出,156个靶基因的GO分析显示主要富集在与蛋白激酶结合、调节蛋白修饰和代谢过程以及调控上皮细胞增殖方面。KEGG通路则富集了许多肿瘤相关和经典的信号传导通路,包括转化生长因子-β(TGF-β)通路和血管内皮生长因子(VEGF)信号通路,同时血管内皮生长因子A(VEGFA)也是miR-503的直接靶基因,与许多纤维化机制中的蛋白相关。结论PDE外泌体miR-503在高转运组中明显升高,并与PET值呈正相关。生物信息学分析提示其可能通过靶向VEGFA调控腹膜血管新生。