一种高效稳定的微生物总RNA提取方法

本研究通过对玻璃珠-酚仿RNA提取方法进行改进优化,实现对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌这3类微生物RNA高效稳定的提取。结果表明,玻璃珠-酚仿提取法能有效提取的RNA最低菌体细胞量为1×107个,远低于试验所选商业化试剂盒所需细胞量。以1×107个细胞量为例,利用Beadbeater仪破碎30 s,使用直径100μm的玻璃珠破碎提取得到的细菌RNA浓度显著高于使用直径500μm的玻璃珠提取的。使用2种直径的玻璃珠所得酵母菌RNA浓度无显著性差异。在直径100μm的条件下,破碎30 s即可保证RNA的高效提取,对于长双歧杆菌、大肠杆菌和酵母菌,破碎时间长达150 s也不会引起RNA降解。本法所提RNA的A260/A280为1.96~2.10,A260/A230为2.03~2.44,浓度和纯度均优于试验所选商业化试剂盒所提的RNA。

副干酪乳杆菌L9安全性评价

本研究对益生菌菌株副干酪乳杆菌L9(Lactobacillus paracasei L9)进行了体外及体内的安全性评价。利用体外试验评价了L9的抗生素抗敏感性及生物胺的生成能力;体内试验评价了L9的经口毒性、正常状况下的易位风险及腹腔注射模拟的极端情况下的易位风险。结果表明,菌株L9不存在种属特有耐性以外的抗生素耐受性,不存在抗生素转移的风险;在脱羧酶培养基中培养未发现生物胺的产生;以108、109、1010 cfu/鼠灌胃28d,小鼠未发生不良反应,未发生向血液、肝脏、脾脏和肾脏的易位;109cfu/鼠腹腔注射发生易位现象,但未发生菌血症并且易位不会造成疾病或导致死亡,同时易位状况随时间有所缓解,表现为较高的易位安全性。试验结果证实副干酪乳杆菌L9具有较高安全性,可以直接应用于工业化生产。

具抗氧化功能益生菌菌株筛选及其对丙烯酰胺诱导肠上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的:以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率为指标,筛选抗氧化能力强的乳杆菌,并研究其对模拟胃肠道环境的耐受性及对丙烯酰胺所致肠上皮细胞氧化损伤的保护作用。方法:以DPPH自由基清除率为指标,筛选得到清除率高的2株乳杆菌GBE17和GBE29,并进行16S rDNA测序鉴定。构建丙烯酰胺诱导的Caco-2氧化损伤模型,通过形态学观察和测定细胞培养上清液、细胞裂解液中的抗氧化物相关物质及酶活,评价其不同处理方式对Caco-2细胞氧化损伤的保护作用,并分别测定其在pH 3.0、2.5及胆盐质量分数为0.05%、0.1%环境下处理1~4 h的活菌数变化。结果:植物乳杆菌GBE17和唾液乳杆菌GBE29发酵上清液的DPPH自由基清除率分别为89.44%、79.24%。GBE17的治疗组与干预组和GBE29的干预组均可降低乳酸脱氢酶的释放,提高细胞内外超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活性。2株乳杆菌在pH 3.0和胆盐质量分数0.1%的环境下处理4 h,存活数均高于107 CFU/mL。结论:植物乳杆菌GBE17和唾液乳杆菌GBE29通过提高细胞内抗氧化酶系的活性,有效地降低丙烯酰胺诱导肠上皮细胞的氧化损伤,且具有较好的胁迫耐受能力。

长双歧杆菌BBMN68菌株的耐氧驯化研究

双歧杆菌是一种经典的益生菌,其对人体健康的促进作用已得到了广泛的研究证明,在功能食品及药品中具有巨大的应用价值。目前成功应用的双歧杆菌多局限于耐氧能力较强的动物双歧杆菌。由于双歧杆菌对氧敏感的特点,大量性能优良菌株的应用受到了限制,而耐氧驯化是解决这一问题的有效手段。通过逐步提高氧分压的方式对一株来自长寿老人肠道的双歧杆菌BBMN68进行耐氧驯化,成功分离到1株耐氧能力提高的菌株;通过16S r DNA测序确定驯化菌株具有稳定的遗传性;通过原始菌株及驯化菌株对酸及胆盐的耐受能力测定,确定驯化菌株具有稳定的耐受性能。