血液中一种新的“濒亡标志物”(醇脱氢酶同工酶)的鉴定

目的 鉴定血清乳酸脱氢酶 (LD)同工酶检测中出现的第 6条带“LD6”的蛋白质性质。方法 用琼脂糖凝胶电泳分离、提纯“LD6” ,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测“LD6”相对分子质量 ,免疫转移印迹法鉴定人血清中“LD6”抗原性。结果 测定人血清LD同工酶时出现的第 6条带“LD6”为醇脱氢酶 (alcoholdehydrogenase ,AD)同工酶 ,相对分子质量为 80 0 0 0 ,用western免疫固定转印法鉴定核实。正常人肝组织匀浆、肝癌组织匀浆作琼脂糖凝胶电泳分离、提纯“LD6” ,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 ,表明肝组织匀浆、肝癌组织匀浆的“LD6”与血清“LD6”为同一物质。 1 0 0例患者有 37例血清含有AD ,其中 34例AD活性≥LD总活性7.9% ,病人 1周内死亡 ,死亡率达 91 .9%。结论 正常人血清内不易检测出AD活性 ,而正常肝组织内有强的AD Ⅱ活性。当肝脏受到严重损害时 ,AD从肝细胞内逸出 ,释放入血 ,导致血清AD活性明显升高。血清中AD活性上升可能是一种新的“濒亡标志物”。

琼脂糖凝胶电泳测定天门冬氨酸氨基转移酶同工酶

目的建立琼脂糖凝胶电泳法检测人类血液中天门冬氨酸氨基转移酶 (AST)同工酶。方法我们自制琼脂糖凝胶板 ,加入血清样本 ,在电泳缓冲系统中进行电泳 ,通过摸索一系列测定条件 ,能快速、简便地把血清中AST分成二条区带 ,即 ASTs和 ASTm ,然后进行底物孵育、显色、扫描 ,可对 ASTs和 ASTm定量分析。结果我们测定了 30例肝癌病人 ASTm ,其范围为 18.8～ 10 8.1U / L ,2 2例急性肝炎病人 ASTm其范围为 2 9.5～ 2 5 8.4U / L ,2 0例心肌梗塞病人 ASTm其范围为 2 2 .8～ 135 .4U / L。结论 AST同工酶测定对进一步了解肝细胞、心脏细胞结构损伤的程度 ,估价其损伤的预后和对病人病程的监护具有一定帮助意义。

儿童血清中食物特异性IgG检测的临床意义

目的检测反复发热、咳嗽、流涕的2～15岁患儿的食物不耐受特异性过敏原IgG抗体，为患儿治疗、康复提供实验依据。方法应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测85例反复发热、咳嗽、流涕的患儿血清中14种食物过敏原特异性IgG抗体，并进行中医药物调理及治疗。结果85例患儿中，94．1％患儿血清蛋清／蛋黄阳性；70．6％牛奶阳性；27．1％小麦阳性；22．4％西红柿阳性；20．0％大米阳性。针对血清中存在的食物过敏原抗体阳性的食物，进行饮食调整，祛除食物不耐受过敏原的因素，同时根据患儿临床症状，用中医药物进行调理和治疗2～3周后，有85．9％的患儿症状明显减轻，健康状况明显改善。结论检测食物不耐受过敏原IgG，调整、消除不利的食物进入体内，对患儿的诊断治疗有重要意义。

生姜液对血小板保护作用的临床研究及途径

目的探讨生姜液对保护血小板而使血小板聚集率降低的作用及途径。方法应用比浊法,在生姜液的作用下,测定由二磷酸腺苷(ADP)、瑞斯特霉素(RIST)诱导血小板聚集率的变化。结果在生姜液的保护作用下,对照组和患病组(服用华法林者)的血小板聚集率明显降低,对照组下降9.63%±5.83%(P<0.01),患病组下降15.84%±9.06%(P<0.01)。同时,患病组的血小板聚集率下降明显,与对照组的下降率比较差异具有统计学意义(P<0.001)。生姜液的浓度、保存时间是影响保护血小板作用大小的因素。生姜液的浓度越高、保存时间越短,其对血小板的保护作用越强。结论生姜液具有明显保护血小板、降低血小板聚集的作用。服用华法林的患病组血小板聚集率下降更加明显。

电泳法检测肝和血清中醇脱氢酶同工酶

目的:建立琼脂糖凝胶电泳法检测人血清醇脱氢酶(alcoholdehydrogenase isoenzymes ADH EC 1.1.1.1)同工酶。方法:采用自制琼脂糖凝胶板,摸索实验条件,在pH8.6,74mmol/L巴比妥电泳缓冲系统中进行20mA、20min电泳,可清晰地分离出ADH同工酶三条区带。结果:检测了67例患者血清ADH总活性0.013-0.021Kat/L,同工酶ADHⅠ占ADH总活性0.0l-0.30,ADHⅡ占ADH总活性0.12-0.31,ADHⅢ占ADH总活性0.39-0.80。检测了10例人健康肝组织匀浆的ADH总活性为0.136-0.196Kat/L,同工酶ADHⅠ占总活性的0.07-0.25,同工酶ADHⅡ占总活性的0.19-0.27和同工酶ADHⅢ占总活性0.56-0.73。结论:正常人血清中ADH酶活性很低,为0-1.8×10^(-3)Kat/L,其同工酶不易被检测出。而肝脏组织中含有大量ADH酶活性,当肝脏受到严重损伤时,ADH即从肝细胞内逸出,进入血液,使血清中ADH酶活性明显升高,同时通过琼脂糖电泳对其同工酶的检测可测出三条区带,帮助临床进一步了解肝细胞损伤程度,对患者预后和病程的监测具有一定的临床意义。

血液常规检验教学中的一些体会

随着教育体制的改革,对教育内、外环境重要性认识的不断提高,教师与学生在教学过程中角色关系也发生了转换.<实验诊断学>中的血液常规检验是一门基础课,然而,却在临床工作中非常实用及广泛开展.临床工作中对血液常规检验应用的灵活与否直接影响诊断及治疗的质量.因此,我们应该充分认识这门学科的重要性,也给教师提出了更高的要求.

血液“濒亡标志物”醇脱氢酶同工酶的鉴定

目的 鉴定血清乳酸脱氢酶（LDH；EC1.1.1.27)同工酶检测中出现的第6条带“LDH6”蛋白性质，探讨其活性升高时的临床意义。方法 将正常人肝组织匀浆，肝癌组织匀浆与血清作琼脂糖凝胶电泳分离，提纯“LDH6”，聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其相对分子质量。再经免疫印迹验证其抗原性。并检测37例患者中LDH6活性占LDH总活性有百分比。结果 肝级织匀浆，肝癌组织匀浆的“LDH6”与血清“LDH6”为同一物质，为醇脱氢酶同工酶Ⅱ（alcohol edhydro-genase,LDH:EC1.1.1.1)，相对分子质量为80kD，34例ADH活性≥LDH总活性7.9%的病人一周内即死亡，死亡率达91.9%(34/37)。结论 LDH6即为ADH，ADH活性在血清中上升可能是一种新的“濒亡标志物”。

巨肌酸激酶鉴定方法的建立及临床应用

为鉴定因用免疫抑制法测定“CK MB”等于或高于总CK活性的标本 ,本文建立了琼脂糖凝胶电泳、活化能测定、热失活试验、免疫学方法和电泳法结合等的巨CK鉴定方法及临床应用 ,48例中 ,2例含有巨CK1、琼脂糖凝胶电泳显示在CK MB和CK MM之间出现一条荧光带。活化能测定范围在 45～ 6 5kJ/mol之间 ,与正常CK MM相同。免疫学方法鉴定系CK MM与免疫球蛋白的复合物。另外 30例含有巨CK2 、琼脂糖凝胶电泳显示位于CK MM的阴极侧。活化能测定大于 80kJ/mol以上。 16例含有CK BB。巨CK1一般认为与自身免疫性疾病无明显联系 ,巨CK2 与恶性肿瘤密切相关。

实验诊断学在临床工作中的应用

针对实验诊断学在临床应用中的问题分析,仪器、技术、理论发展快速,临床医生对新仪器、新技术、新理论的引入了解不够及时,及对化验结果解读不够重视的倾向和受内外环境因素所带来的影响,提出实行对实验诊断学在临床科室进行再教育和提高教师自身的理论基础知识以及丰富临床经验等解决方法.

巨分子酶在常规检验中的“干扰”及其鉴别方法

目的 建立巨分子酶的鉴别方法 ,排除巨分子酶在常规检验中的干扰。方法 应用琼脂糖凝胶电泳、酶的活化能测定、免疫学方法和电泳法结合、热失活试验、单克隆抗体直接检测等鉴别方法。结果 在琼脂糖凝胶电泳中巨肌酸激酶 (CK) 1迁移于CK MM与CK MB之间 ,巨CK2则位于CK MM的阴极侧。正常CK和巨CK1酶活化能范围为 45～ 6 5kJ/mol,巨CK2的酶活化能范围为 80～ 140kJ/mol。 45℃水浴 2 0min ,测定CK残余活力 ,CK BB和CK MB几乎完全失活 ,而巨CK则不受影响。当乳酸脱氢酶 (LD)的其中一种同工酶与其自身抗体免疫球蛋白形成巨LD时 ,几种同工酶就会聚合在一起。结论 对血清中含有巨分子酶的标本作出鉴定 ,可减少误诊 。

人B细胞活化因子基因启动子活性研究

为探索与自身免疫病发病密切相关的B细胞活化因子(BAFF)基因高水平转录的启动序列及IFN-γ等炎性细胞因子对其活性的影响,以人BAFF基因转录起始点上游-1 349 bp至-329 bp的片段为靶序列,取长度不等的片段作为启动子与含氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因的质粒组成5个重组体,脂质体转染法转染上述重组体至人骨髓白血病细胞株:HL-60,CAT-ELISA测定细胞CAT表达水平以比较各重组体的启动子活性;同时加入细胞因子IL-10、IFN-γ、IL-4、重组人BAFF蛋白(rBAFF),以测定其对BAFF启动序列的影响。结果表明,-1 349^-329 bp、-1 349^-743 bp序列具有强启动调控活性,而-1 349^-1 099 bp片段启动活性最低。细胞因子IFN-γ、IL-10和rBAFF均能在一定程度上调人BAFF基因的启动活性,IL-4则一定程度地抑制BAFF基因的启动活性。研究提示,人BAFF基因-1349^-743 bp片段是进一步研究BAFF基因转录相关DNA结合蛋白的重要调控靶序列。细胞因子IL-10、IFN-γ、IL-4、rBAFF可以一定程度的在转录水平影响BAFF合成和分泌。

Sysmex XE-2100全自动血细胞分析仪常见故障及排除

日本东亚希森美康公司生产的全自动血细胞分析仪XE-2100在临床应用已久，每小时可检测150个标本，可分析血液样品的32个参数，还可分析用于研究的4个参数。它提供了4种分析模式：手动模式、末梢血模式、使用进样器装置的进样器模式和手动模式，能满足临床不同标本的检测要求。

非同位素法分析序列特异性DNA结合蛋白的三种方法

目的为在转录调控水平研究蛋白质异常表达机制,利用核转录因子与相应DNA调控序列特异结合的原理,非同位素法分析细胞内序列特异性DNA结合蛋白。方法凝胶滞留实验(EMSA)采用Dig-ddUTP末端标记DNA,核蛋白粗提或纯化产物与之液相结合后,PAGE分离核蛋白并转印至尼龙膜,化学发光法检测结果,Southwestern分析方法首先采用SDS-PAGE分离核蛋白粗提或纯化产物,蛋白转印至膜上后与Dig-dUTP末端标记的DNA杂交,酶免疫学检测结果,磁性DNA结合蛋白纯化法则将靶DNA与商品化磁性DNA粒子相连,用不同的连接、洗脱条件得到序列特异性靶DNA结合蛋白,银染显示核蛋白纯化结果。结果 EMSA中由于游离DNA与DNA-蛋白复合物有不同电泳迁移率,出现滞后DNA条带提示有识别该特定DNA序列的核蛋白存在,Southwestern分析除能提示核抽提物中有无可与DNA结合的核蛋白外,还提示其中核蛋白分子质量,核蛋白粗提物经磁性DNA亲和层析后DNA结合蛋白在银染时出现较纯的特异识别该DNA序列的核蛋白条带。结论 EMSA,Southwestern分析及磁性DNA层析是3种实用的研究DNA结合蛋白的方法,配伍应用具有简便、重复性好、敏感性和特异性高、无同位素污染等优点,是转录调控水平研究疾病相关基因异常表达的有效方法。

四例巨肌酸激酶的鉴定

本文对免疫抑制法测定CK－MB得异常高值，出现“CK－MB”等于总CK现象的4个病例作鉴定，用CK同工酶电泳、酶活化能测定、免疫固定及热稳定性试验等方法进行鉴定，结果证实1例血中含有巨CK1，3例为巨CK2。

自制选择性淀粉酶抑制物及在淀粉酶同工酶测定中的应用

本文报道了从市售面粉中提取淀粉酶抑制物，此抑制物能比较特异地抑制唾液淀粉酶，进而建立了选择抑制法来测定血清α－淀粉酶同工酶。并对此法的可靠性等作了研究。建立了成人血清淀粉酶同工酶的参考值范围，并作初步临床应用。

粪便中血红蛋白与转铁蛋白联合检测对于消化道出血的诊断价值

目的:评价粪便中血红蛋白与转铁蛋白联合免疫(联合免疫法)检测在消化道微量出血及发现消化道肿瘤中的临床应用价值。方法:用血红蛋白与转铁蛋白联合检测,单克隆抗体法检测和化学法检测,对5种已知浓度的人血红蛋白灵敏度和最低限进行比较检测。检测2010年12月至2011年3月长征医院普外、消化及肿瘤科住院患者的300份粪样本,用血红蛋白与转铁蛋白联合检测,单克隆抗体法检测和化学法检测粪样本中的隐血结果,采用Excel2003计算其特异性、敏感性、阴性预测值和阳性预测值。结果:血红蛋白与转铁蛋白联合免疫法的最低检出限为0.2μg/ml,单克隆抗体法的最低检出限为0.2μg/ml,化学法阳性的最低检出限是20μg/ml。在人血红蛋白为2500μg/ml时,单抗法检测为阴性,血红蛋白与转铁蛋白联合免疫法检测为阳性。结论:采用血红蛋白与转铁蛋白联合免疫法检测,可提高消化道出血及肠道肿瘤的检出阳性率,对临床早治疗、早发现有很大的意义。