核磁共振波谱法在双价痢疾多糖结合疫苗中的初步应用

目的探讨核磁共振波谱(nuclear magnetic resonance,NMR)法在福氏宋内双价痢疾多糖结合疫苗生产工艺中的应用。方法利用Agilent 600 MHz核磁共振仪分别对福氏2a痢疾多糖和宋内痢疾多糖重复结构单元进行1H NMR和13C NMR质量分析,并对生产工艺中的多糖、多糖衍生物及多糖结合物重复结构单元进行了1H NMR结构解析和对比。结果多糖的1H NMR和13C NMR数据及图谱与文献高度一致;结合工艺中各步多糖的1H NMR分析证实了双价痢疾多糖结合工艺的反应机理。结论在双价痢疾多糖结合疫苗的研发过程中,NMR法可直接地检测多糖化学结构,对原料多糖及整个衍生过程中多糖的结构及修饰程度实施质控。

福氏2a志贺菌O-特异性多糖蛋白结合物的制备及其免疫原性

目的制备福氏2a志贺菌O-特异性多糖蛋白结合物,并检测其免疫原性。方法水解的福氏2a志贺菌O-特异性多糖在碳二亚胺[1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride,EDAC]的介导下,与己二酰二肼(adipic acid dihydrazide,ADH)缩合,制备衍生物,再与破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)结合制备福氏2a志贺菌O-特异性多糖蛋白结合物(以下简称结合物),并检测各项生化指标。分别用多糖、本实验制备结合物、氰基活化法和氨还原法制备的结合物免疫小鼠,0.2 ml/只(含2μg多糖),共免疫3次,每次免疫2周后检测小鼠血清抗体滴度,并计算抗体几何平均滴度(GMT)。结果结合物游离多糖和游离蛋白含量均较低,内毒素含量合格,KD值由约0.85(多糖)降至0.02(结合物)。各结合物均可诱导小鼠产生特异性抗体,且各组间GMT差异无统计学意义(P>0.05),各针次间GMT均有显著提高(P<0.05)。结论本实验制备的福氏2a志贺菌O-特异性多糖蛋白结合物具有良好的免疫原性,且制备方法步骤简单,反应条件温和,适合用于规模化生产。