惠州市大规模育龄人群α-和β-地中海贫血分子流行病学调查

目的 调查广东省惠州市育龄人群中α-和β-地中海贫血的携带率、突变基因构成比,为本地区地贫防控提供决策数据。方法 2017年1月至2021年12月,共139 859对育龄夫妇(279 718例)参加了地贫初筛,对其中40 876例可疑地贫样本,经由惠州市第一妇幼保健院医学遗传与产前诊断科采用跨越断裂点的聚合酶链式反应技术(Gap-PCR)和反向点杂交技术(RDB)行α-和β-地贫基因检测。所有数据经由开源统计软件Jamovi(v.2.2.5)统计。结果 279 718例育龄夫妇初筛阳性40 876例,初筛阳性率14.61%;40 876例初筛阳性受检者中29 209例(10.44%)确诊为地贫,其中α-地贫19 315例(6.91%)、β-地贫8 454例(3.02%)、α+β-复合型地贫1 440例(0.51%);惠州市α-和β-地贫常见基因突变谱总体特征为,少数基因占据基因突变类型的绝大部分,即呈严重的偏态分布。惠州市α-地贫突变谱与本省其他高发地区相似,β-地贫突变谱则呈现本地化特征。结论 惠州市为α-和β-地贫高发区,本项研究为惠州市首次在大规模育龄人群中开展的地贫分子流行病学调查,对强化该地区地贫防控具有重要意义。

广东惠州人群αβ复合型地中海贫血基因型与表型的相关性分析

目的:分析惠州地区αβ复合型地中海贫血(简称“地贫”)的发生率、基因型分布及血液学特征。方法:选择经检测确诊为单纯β-地贫携带者10809例和αβ复合型地贫携带者1757例作为研究对象,使用血细胞分析仪和全自动毛细管电泳仪检测相应的血液学指标,采用悬浮阵列技术、跨越断裂点聚合酶链反应(gap-PCR)技术以及PCR-反向斑点杂交技术进行地贫基因分型检测。结果:广东惠州地区人群αβ复合型地贫发生率为1.99%,共检出62种基因型,以基因型--SEA/αα,βCD41-42/βN分布最多(19.29%),--SEA/αα,βIVS-II-654/βN次之(16.73%)。研究发现单纯β-地贫携带者与αβ复合型地贫携带者各基因型分组间平均红细胞体积(MCV)和平均红细胞血红蛋白含量(MCH)均有显著性差异,小提琴图提示,当β-地贫复合轻型α-地贫时,其表型最轻缓,复合血红蛋白H(Hb H)病时,表型最严重。结论:广东惠州地区αβ复合型地贫发生率高,且缺乏特异性血液学指标,临床上需通过α-地贫和β-地贫基因检测与单纯β-地贫相鉴别,以便正确指导遗传咨询及产前诊断。

广东惠州地区46例血红蛋白J-Bangkok的分子诊断及血液学特征分析

目的分析血红蛋白J-Bangkok(Hb J-Bangkok)患者的血液学特征。方法收集2015年10月至2021年3月于惠州市第一妇幼保健院就诊的患者共86645例,使用全自动毛细管电泳仪检测其外周血样本,对筛查出Hb J条带的样本行血细胞分析和DNA测序。采用悬浮阵列技术检测α和β地中海贫血(简称地贫)基因。结果共检出46例Hb J-Bangkok(HBB:c.170G>A)患者,人群发生率为0.053%。单纯Hb J-Bangkok杂合子患者无血液学表型;Hb J-Bangkok合并SEA杂合子患者表现为轻型α地贫特征。首次报道了两例罕见类型,分别为Hb J-Bangkok合并Hb New York杂合子和Hb J-Bangkok合并SEA及βCD81杂合子。前者患者无明显血液学改变,其Hb J、Hb K和Hb A2分别为59.7%、39.5%和0.8%;后者患者表现为轻型α地贫特征。结论惠州地区人群Hb J-Bangkok发生率高,本研究有助于为疾病筛查提供参考数据以及完善惠州地区的地贫防控工作。

广东惠州地区609例血红蛋白Constant Spring的血液学与基因型分析

目的分析血红蛋白Constant Spring(Hb CS)基因型和血液学表型的关系。方法使用血细胞分析仪和全自动毛细管电泳仪检测Hb CS携带者的血液学指标。采用悬浮阵列技术检测α和β地中海贫血基因。结果广东惠州地区人群Hb CS发生率为0.798%。Hb CS杂合子在临床上可无症状和血液学表型,但合并其它地贫基因突变时可加重血液学表型。当Hb CS合并--^(SEA)时表型最重,表现为Hb H病特征;Hb CS合并β地贫表现为β地贫特征,不能电泳出Hb CS波峰;Hb CS-H病合并β地贫表现为平均红细胞体积(MCV)和平均红细胞血红蛋白含量(MCH)明显降低,不能电泳出Hb H波峰,有时能电泳出Hb CS波峰。结论惠州地区人群Hb CS发生率高,本研究有助于该地区的地贫防控工作。

8个红细胞参数运算公式在儿童缺铁性贫血与β-地中海贫血鉴别诊断中的效能

目的比较8个红细胞(RBC)参数运算公式在儿童缺铁性贫血(IDA)与β-地中海贫血(β-TT)鉴别诊断中的效能。方法选取149例IDA患儿和146例β-TT患儿,对其RBC参数进行检测。选取8种国外常用RBC参数运算公式(F1～F8),对其敏感性(SEN)、特异性(SPE)、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)、约登指数(YI)、阳性似然比(+LR)、阴性似然比(–LR)进行分析。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,并计算曲线下面积(AUC)。结果公式F5、F4和F2的鉴别诊断效能显著高于其他5个公式,这3个公式的AUC分别为0.916、0.889和0.889。公式F5的鉴别诊断效能最高,其SEN、SPE分别为87.14%、88.41%。结论公式F5、F4和F2对惠州地区儿童IDA与β-TT有较好的鉴别诊断效能,公式F5的鉴别诊断效能最高,可供本地区儿科医生选用。

广东省惠州地区基于医院水平的地中海贫血基因突变谱分析

目的:调查惠州地区地贫基因携带率、基因型分布特征,探讨产前筛查与诊断的临床意义。方法:随机抽取本院2000例血液学结果,评估地贫筛查阳性率;对其中540例血液学筛查阳性样本行血红蛋白电泳分析,结果异常样本行基因诊断,诊断为同型地贫基因夫妻行产前诊断。结果:血液学地贫筛查阳性率45.60%(912/2000),血红蛋白电泳阳性率78.70%(425/540),基因阳性率84.71%(360/425)。估算基于医院水平该地区人群基因携带率30.40%(608/2000)。共检出35种基因型,检出率最高为α地贫(53.18%),其次为β地贫(26.35%)、复合型地贫占5.18%。包括罕见型β地贫CD113/N和SEA-HPFH/N。对携带同型基因夫妻进行评估,所有基因诊断可能会生育中重型地贫的妇女行羊膜腔穿刺术,羊水中地贫基因检出率66.67%(24/36),重型胎儿占29.17%。结论:惠州市是地贫高发区,做好预防和监控对控制和降低地贫的发病率及重型患儿的出生率非常重要。

红细胞参数及计算公式对缺铁性贫血与地中海贫血鉴别诊断效能比较

目的比较8种红细胞参数及计算公式对缺铁性贫血与地中海贫血鉴别诊断的实际效能。方法用全自动血球仪对本院产检接收的110例缺铁性贫血和211例地中海贫血患者的红细胞参数进行检测,以文献报导的8种红细胞参数及计算公式(依次标记为F1-F8)为鉴别指标,分析它们的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、约登指数、阳性似然比、阴性似然比、对应的ROC曲线以及曲线下面积(AUC)。结果发现公式F7、F8和F5的鉴别效能明显高于其余5个公式,3个公式的AUC分别为0.978、0.953and 0.925。结论本研究表明公式F7、F8和F5对惠州地区人群的地中海贫血与缺铁性贫血有较好鉴别效能,其中以公式F7鉴别效能为最高(AUC=0.978),其灵敏度、特异度分别为93.36%、95.41%,可供本地区基层医疗机构鉴别TT与IDA时选用;公式F1鉴别效能最低,不宜采用。

广东省惠州地区363例地中海贫血产前基因诊断及随访情况分析

目的:分析惠州地区地中海贫血(简称地贫)基因携带夫妇胎儿基因诊断及随访情况,为遗传咨询提供依据。方法:2015年1月—2016年12月在本院确诊携带同型地贫基因夫妇363对,通过胎儿绒毛、羊水、脐血获取胎儿标本提取DNA,应用Gap-PCR和PCR结合反向斑点杂交技术进行α、β地贫基因诊断。产前诊断后1年随访妊娠结局。结果:236对携带α-地贫基因夫妇产前基因诊断为正常47例(19.9%)、杂合子60例(47.2%)、中重型α-地贫基因53例(35.7%)。56对β-地贫基因携带夫妇产前基因诊断为正常10例(17.9%)、杂合子32例(57.1%)、中重型地贫受累胎儿14例(25.0%)。71对一方为α、β地贫基因双重杂合子,另一方为携带α、β地贫基因或α、β双重杂合子的夫妇产前基因诊断为正常36例(50.7%)、α或β地贫杂合子15例(21.1%)、巴氏水肿胎4例(0.06%)、α、β地贫双重杂合子13例(18.3%)、β-地贫复合杂合子3例(0.04%)。57例中重型α-地贫胎儿均在孕期引产,14例中重型β-地贫胎儿在孕期引产13例,1例重型β-地贫儿出生。结论:地贫产前筛查及诊断可有效避免重症地贫患儿出生;但应同时加强对重型地贫胎儿夫妇的随访宣教工作,强化心理干预措施,有效控制重症地贫儿出生,将地贫防控落到实处。

非综合征性耳聋患儿家庭耳聋易感基因突变检测分析

目的研究广东惠州地区耳聋家庭中与耳聋相关的GJB2、GJB3、SLC26A4和线粒体DNA(mtDNA)的基因型分布和发病特征,为耳聋基因筛查提供科学的参考数据。方法 2017年3-7月,收集37个耳聋患儿家庭外周血样本99例。行听力测试并采用聚合酶链反应联合寡核苷酸探针导流杂交法检测,检测范围包括GJB2、GJB3、SLC26A4和mtDNA的4个基因13个突变位点。结果 99例样本中50例未通过听力测试,不通过率为50.51%(50/99)。在37个耳聋家庭中,检出携带耳聋基因家庭有11个,检出35例阳性样本,检出率为35.35%(35/99)。共检出10种突变类型,主要包括GJB2基因突变16例,SLC26A4基因突变19例。其中双等位基因突变(纯合突变+复合杂合突变)9例,检出率为9.09%(9/99);26例仅检测到1个等位基因突变,检出率为26.26%(26/99)。6个耳聋家庭夫妻为同种类型耳聋基因突变携带者,且4个妈妈处于早孕期,行产前诊断。结论 SLC26A4基因突变是导致本研究患儿耳聋最常见的原因,其次是GJB2基因突变。对遗传性耳聋易感基因的准确快速诊断有利于早发现早治疗,从而改善患者的生存质量。

惠州地区β缺失型地贫的基因诊断及临床特征分析

目的探讨惠州地区人群β缺失型地贫的检出率及临床特征,为基因诊断及产前诊断提供更好的指导。方法收集惠州市孕前、孕期检查夫妇19 585对,首先对血常规及血红蛋白电泳进行地贫筛查,对阳性者行基因诊断。对于疑为β地贫检出阴性者加用Gap-PCR技术检测β缺失型地贫。结果在364例样本中检出62例东南亚型HPFH(SEA-HPFH)、41例中国型~Gγ(~Aγδβ)~0和2例中国台湾型(Taiwan Residents),总检出率为0.27%。血常规结果显示β缺失型地贫携带者均表现为小细胞低色素,但贫血症状较轻或无贫血。血红蛋白电泳分析中SEA-HPFH和中国型~Gγ(~Aγδβ)~0缺失地贫携带者的血红蛋白F(HbF)明显增高,前者大部分的HbA_2升高而后者全部不增高。Taiwan Residents缺失地贫携带者HbA_2增高,但HbF没有明显增高。比较SEA-HPFH和中国型~Gγ(~Aγδβ)~0缺失杂合子的血液学特征,红细胞平均体积(MCV)、红细胞平均血红蛋白含量(MCH)、血红蛋白A(HbA)、血红蛋白A_2(HbA_2)和HbF的5组数据差异均有统计学意义(P<0.05)。结论惠州地区人群β缺失型地贫携带率高,呈现小细胞低色素特征,有明显的HbF升高。因此,应注意及重视β缺失型地贫的诊断,预防中、重型患儿的出生。

33例中国型 ~Gγ(~Aγδβ)~0地中海贫血病例的临床分析

目的探讨惠州地区人群中国型 ~Gγ(~Aγδβ)~0地中海贫血的检出率及临床特征,分析其意义及完善地贫防控内容。方法 2015年1月至2016年12月,对参加惠州市孕前和孕期优生健康检查育龄夫妇的24 137例血液样本行血常规及血红蛋白电泳检测,并应用液相芯片、导流杂交技术对检出结果分析为可疑地中海贫血样本及产前363例羊水样本进行地中海贫血基因检测,对于疑为β地中海贫血但未检出者加用Gap-PCR技术检测中国型 ~Gγ(~Aγδβ)~0地中海贫血缺失型基因。结果在290例加测样本中检出中国型 ~Gγ(~Aγδβ)~0杂合子29例,中国型 ~Gγ(~Aγδβ)~0地中海贫血复合α地中海贫血4例,总检出率为0.14%。血常规结果显示血红蛋白正常为26例,轻度下降为7例;红细胞平均体积(mean corpuscular volume,MCV)及红细胞平均血红蛋白含量(mean corpuscular hemoglobin,MCH)均降低;血红蛋白电泳结果显示Hb A2正常或轻度降低,Hb F升高为(14.56±5.43)%。检出4例为夫妻同型β地贫携带者,行产前诊断,一例胎儿基因型为β^(-28)杂合突变复合中国型 ~Gγ(~Aγδβ)~0杂合缺失,其中国型 ~Gγ(~Aγδβ)~0基因遗传自母方,β^(-28)基因遗传自父方,终止妊娠。结论惠州地区人群的中国型 ~Gγ(~Aγδβ)~0携带率高,中国型 ~Gγ(~Aγδβ)~0携带者的临床特征为MCV、MCH降低的基础上Hb F值明显升高;中国型 ~Gγ(~Aγδβ)~0属缺失型β地中海贫血类型,当其有可能与β地中海贫血复合存在时,应进行产前诊断,防止中重型地贫患儿出生。

地中海贫血实验诊断信息管理软件的建立及应用

目的开发临床实验室地中海贫血(地贫)诊断信息管理软件,实现地贫诊断信息的集中管理。方法利用VBA语言和数据库技术开发基于Microsoft Access数据库的地贫信息管理软件。结果开发完成的地贫信息管理软件,可于主窗体集中显示血常规、血红蛋白电泳等血液学表型及相应基因型,支持快速审核、报告的快速查找与打印。采用该软件后,地贫诊断流程优化,检验报告回报时间由原来约10个工作日缩短至5个工作日;报告查询时间由原来约5 min缩短至约2 min。结论该软件实现了地贫表型与基因型数据的集中管理,提高了审核效率、减少了信息誊写的差错,缩短了报告回报时间。

异常血红蛋白电泳室内质量控制的临床初探

目的:初步探讨异常血红蛋白电泳室内质量控制的可行性方案与临床实践。方法:选择临床检测中所得血红蛋白电泳包括Hb Bart's、Hb H、Hb E、Hb F及Hb CS五种临床常见异常血红蛋白,且经由PCR基因确诊的血液标本,自制成血红蛋白质控物,于不同贮存时间点对各异常血红蛋白组分进行检测,记录检测结果并统计分析,评估室内质量控制效果。结果:自制异常血红蛋白电泳质控物在-20℃至少可稳定12个月,各时间段检测数据与相应的全血标本比较,差异无统计学意义(P>0.05),质控结果稳定。结论:自制异常血红蛋白电泳质控物性质稳定,借此质控物可对临床血红蛋白电泳的异常血红蛋白进行室内质量控制。

唐氏筛查联合无创产前基因检测在产前诊断中的应用价值

目的 探究唐氏筛查联合无创产前基因检测(NIPT)在产前诊断中的应用价值。方法 纳入2434例行早期和中期唐氏筛查中高风险且行NIPT的孕妇,将侵入性产前诊断(羊水穿刺)作为诊断的金标准,分析唐氏筛查联合NIPT的诊断效果。结果 2434例研究对象中,羊水穿刺结果阳性的人数为67例,占2.75%,唐氏筛查联合NIPT检测的灵敏度为97.01%,特异度为98.82%,与羊水穿刺结果的符合率为98.77%;唐氏筛查联合NIPT检测对21-三体检测的符合率为96.77%,对13-三体检测的符合率为87.50%,对18-三体和性染色体的检出率为100%。结论 唐氏筛查联合NIPT的产前诊断效能良好,对于唐氏筛查高风险的孕妇,建议先进行NIPT再根据其结果进行侵入性产前诊断。

颈项透明层厚度在重型α地贫胎儿早孕期筛查中的预测价值

目的研究孕11~13+6周胎儿颈项透明层厚度(NT)在预测早孕期重型α地中海贫血(简称α地贫)胎儿中的应用价值。方法回顾性分析2017年1月至2022年12月在惠州市第一妇幼保健院行介入性产前诊断的974例孕妇临床资料,且夫妻双方为同型α地贫基因携带者。根据胎儿产前α地贫基因检测结果分为对照组(正常胎儿)、静止型组(静止型胎儿)、轻型组(轻型胎儿)、中间型1组(CS/QS中间型胎儿)、中间型2组(其他中间型胎儿)和重型组(重型胎儿),应用超声技术测量胎儿头臀径(CRL)、颈项透明层厚度(NT),比较组间差异。通过构建受试者工作特征(ROC)曲线计算曲线下面积(AUC),确定NT预测重型α地贫的最佳截断值(cut-off值)。结果除了中间型1组,重型组的NT中位数倍数(MOM)明显大于其他组,差异均有统计学意义(P<0.05),其余各组之间NT比较,差异无统计学意义(P>0.05)。根据ROC曲线,NT最佳临界值为1.23 MOM,灵敏度为54.05%,特异度为80.67%。结论NT可有效预测重型和非重型α地贫胎儿,确定的最佳截断值可为临床提供参考。

罕见型β基因簇大片段纯合缺失病例的诊断及临床表型分析

目的基因诊断1例β基因簇大片段纯合缺失病例并分析其临床特征,为临床遗传咨询提供依据。方法应用毛细管电泳和常规地中海贫血基因检测技术检测广东惠州地区71001份外周血样本,针对可疑β基因簇大片段缺失样本加用裂缝聚合酶链反应(Gap polymerase chain reaction,Gap-PCR)技术和多重连接探针扩增技术分析其基因分型,用统计学R软件比较分析血液学特征。结果检出89例β基因簇中国型Gγ(Aγδβ)0缺失基因分型(检出率为0.13%),其中中国型Gγ(Aγδβ)0缺失杂合子70例,中国型Gγ(Aγδβ)0杂合缺失复合α地中海贫血18例,Gγ(Aγδβ)0缺失纯合子1例。建立13683例正常对照组,与杂合子携带者的6组血液学参数相比较,箱线图显示差异均具有统计学意义(P<0.05)。诊断出的1例Gγ(Aγδβ)0缺失纯合子临床表型为轻度贫血,血红蛋白电泳结果显示HbF值100%。结论惠州地区人群β基因簇大片段缺失基因型的携带率高,血液学HbF值明显升高,应重视筛查,选择性行罕见型检测,防止漏诊或误诊,指导临床遗传咨询和产前诊断。

45例血红蛋白Q-Thailand的表型和基因型分析

目的探讨惠州地区血红蛋白Q-Thailand（hemoglobin Q-Thailand，HbQ-Thailand）的血液学和分子特征。方法应用毛细管电泳和琼脂糖凝胶电泳技术检测34977份外周血样本，对筛查出HbQ条带的样本分别进行血细胞分析和DNA测序。采用液相芯片和导流杂交技术检测中国人常见的23种α和β地贫基因突变。结果惠州地区人群Hb Q-Thailand的检出率为0．13％，家系分析其与-α4.2缺失型的α地贫存在连锁。检出的45例Hb Q-Thailand杂合子的血液学参数（血红蛋白、红细胞平均体积、平均血红蛋白含量、HbA、HbA2、HbQ）分别为（130．25±17．37）g／L、（79．81±4．97）fl、（26．38±1.48）Pg、（71．37±5．07）％、（1．65±0．45）％、（26．87±4．95）％。选取408例-α4.2缺失杂合子与Hb Q-Thailand杂合子的数据相比较，除了HbA和HbAz差异有统计学意义外（P〈0．05），其余指标差异均无统计学意义。结论惠州地区人群Hb Q-Thailand的检出率高，以杂合子且与-α4.2缺失杂合子连锁存在。通过血红蛋白电泳可以检出HbQ条带，当Hb Q-Thailand杂合子合并其他类型地贫时，可表现出明显的血液学参数差异性。