GPR120的激活与抑制对LTA诱导奶牛乳腺上皮细胞相关促炎基因表达及细胞活力的影响

为探讨GPR120基因对LTA介导的奶牛乳腺上皮细胞的炎症反应的缓解作用,试验使用GPR120激活剂TUG891与抑制剂AH7614处理Mac-T细胞,选用20μg·m L^(-1)的LTA刺激Mac-T细胞构,建奶牛乳腺炎症细胞模型;通过q RT-PCR、Western blot与CCK-8法检测各组GPR120的表达水平及激活与抑制GPR120后在LTA诱导的Mac-T细胞炎症应答过程中,细胞内相关促炎因子的m RNA表达变化及对细胞活力的影响。结果表明:使用GPR120激活剂与抑制剂处理细胞3 h,GPR120的m RNA表达水平均达到极显著上调与抑制(P<0.01);使用20μg·m L^(-1)LTA刺激Mac-T细胞24 h后,检测促炎细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6的m RNA表达水平均明显上调(P<0.05),表明基于使用LTA构建的奶牛乳房炎的Mac-T细胞模型成功,且LTA刺激显著促进GPR120的表达水平(P<0.05);激活GPR120可显著缓解由LTA诱导的炎性细胞因子TNF-α、IL-6和IL-1β的释放(P<0.05);而抑制GPR120可进一步显著加剧由LTA诱导的Mac-T细胞产生的促炎细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6的高表达(P<0.01),蛋白表达水平结果与上述一致。用LTA刺激Mac-T细胞后48 h内,细胞活力显著下降(P<0.01);而使用激活剂处理后可显著缓解由LTA诱导引发细胞活力的降低(P<0.01),使用抑制剂处理后进一步引发细胞活力降低。由此可见,GPR120参与了LTA诱导的牛乳腺上皮细胞的炎症反应,并且GPR120的激活减缓了炎症反应,这一研究结果可为筛选奶牛乳房炎抗性基因提供重要依据。

两系杂交籼稻皖稻79制种技术研究

通过 6年制种实践和研究 ,探明了新组合皖稻 79双亲主要特性 ,提出早预测 ,重调整 ,保花期全遇 ;适时喷施花信灵 ,促母本花时提早 ;搭建健壮合理母本群体 ,提高结实率 ,降低张颖率和穗发芽率 ;以及及时收割、脱粒、晾晒 ,保证种子质量等高产高质量制种技术措施。

牛奶体细胞评分、胎次、季节与产奶量及乳成分相关性分析

为研究黑龙江地区牛奶体细胞评分、产奶量、乳成分间的关系以及体细胞评分所造成的损失。收集了黑龙江某奶牛场2017~2019年成年荷斯坦奶牛的生产性能测定记录。收集数据录入EXCEL后,剔除不符合标准的数据。之后利用SPSS 26软件对奶牛胎次、产奶季节、体细胞评分、产奶量、乳成分进行显著性以及相关性分析。分析结果表明,奶牛总体体细胞评分均值为19.50万个·mL^(-1),奶牛患有乳房炎比率较低。体细胞评分与胎次、乳成分呈现正相关性,与产奶量呈现负相关性;产奶量与乳成分呈现不同程度的负相关性,与胎次呈现正相关性;乳脂率与乳蛋白率呈现正相关性。体细胞评分与产奶量和乳成分具有显著差异性,并且随着产奶量的增加而减少,乳成分随着体细胞评分的增加而增加。胎次与产奶量,体细胞评分具有显著差异性,随着胎次的增加,奶牛的产奶量、体细胞分逐渐增加,当其大于等于4胎时,奶牛产奶量开始降低;冬季奶牛产奶量最高。季节与产奶量、乳成分、体细胞评分存在显著差异性,且秋季乳脂率和乳蛋白率最高,秋、冬两季的体细胞评分显著高于春、夏。而体细胞数造成的经济损失可达17354.48元,当体细胞数大于10万个·mL^(-1)起,就会对牧场造成经济损失。综上所述,体细胞评分与产奶量、乳成分、胎次有关,并且各个等级的体细胞评分与产奶量、乳成分、胎次间存在显著差异性;不同季节与产奶量、乳成分、体细胞评分间具有显著差异性;当体细胞数从大于10万开始,就会对牛场造成经济损失,建议对于体细胞数大于10万的奶牛应该提高关注程度。研究将基于奶牛生产性能测定数据,科学利用奶牛生产性能测定数据,为我国牧场现代化和规模化发展提供依据。

沉默CXCL2基因对LTA诱导的炎性MAC-T细胞的作用

CXCL2基因可影响多种疾病并介导炎症和自身免疫的发生,但其在奶牛乳房炎中的作用鲜有报道。为初步揭示CXCL2基因在奶牛乳房炎中发挥的作用,本试验通过转染siRNA特异性序列构建CXCL2基因沉默模型,采用LTA刺激牛乳腺上皮细胞(MAC-T)构建奶牛乳房炎细胞模型,并通过CCK-8法检测CXCL2基因沉默对MAC-T细胞活力的影响;EdU染色法检测CXCL2基因沉默对MAC-T细胞增殖水平的影响;流式细胞术检测CXCL2基因沉默对MAC-T细胞凋亡水平的影响。结果显示,CXCL2基因沉默可使炎性MAC-T细胞活力和增殖能力增加,细胞凋亡数减少。CXCL2基因沉默可通过提高细胞活力、促进细胞增殖和抑制细胞凋亡来减轻LTA诱导的MAC-T细胞的炎症反应,但具体的分子机制仍有待进一步研究。

GPR120介导NF-κB和MAPK调控LTA诱导的Mac-T细胞的保护作用

采用脂磷壁酸(lipophosphatidic acid,LTA)刺激Mac-T细胞,通过Western blot检测核因子κB(NF-κB)和促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路关键蛋白的表达水平和磷酸化水平,以及上游的关键作用因子TLR4和MyD88蛋白表达水平;EDU法检测细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果显示,激活G蛋白偶联受体120(G protein-coupled receptors 120,GPR120)能显著降低Mac-T细胞中LTA诱导NF-κB(P65和IκBα)(P<0.01)和MAPK(JNK、ERK、p38)(P<0.01)的磷酸化水平;抑制GPR120能够上调Mac-T细胞中LTA诱导NF-κB(P65和IκBα)(P<0.01)和MAPK(JNK、ERK、p38)(P<0.01)的磷酸化水平;激活GPR120可以极显著的缓解由LTA诱导的TLR4和MyD88的上调(P<0.01);抑制GPR120会显著加剧由LTA诱导的TLR4和MyD88的上调(P<0.05);LTA刺激会导致Mac-T细胞增殖水平呈减弱趋势,凋亡率显著增高,而激活GPR120基因可极显著增加细胞活性(P<0.01),促进细胞增殖,显著减少细胞凋亡(P<0.05)从而缓解了由LTA对Mac-T细胞的损伤;LTA刺激可使细胞凋亡率极显著增加(P<0.01),激活GPR120基因则可极显著(P<0.01)的逆转LTA所诱导的Mac-T细胞的凋亡率的提高;而抑制GPR120基因后可增强LTA对细胞凋亡的促进作用(P<0.05),表明激活GPR120基因可以减弱由LTA诱导的炎性Mac-T细胞导致的凋亡率增加。结果表明,GPR120可通过介导TLR4和MyD88表达抑制NF-κB/MAPK炎症通路活化调控炎症并能够促进细胞增殖。

中国荷斯坦奶牛GPR120基因SNP位点鉴定及其与产奶性能的关联分析

为研究GPR120基因单核苷酸多态性及其与中国荷斯坦奶牛产奶性能的相关性,选取518头中国荷斯坦奶牛为试验对象,提取其总DNA后,PCR扩增GPR120的3个外显子基因片段,筛选目的片段SNP(singlenucleotide polymorphism)位点,进而利用在线软件(RNAfoldwebserver及SOPMA)对突变前后GPR120mRNA和蛋白质的二级结构进行功能分析,最后统计学分析遗传多态性位点与奶牛产奶性能的相关性。结果显示,在中国荷斯坦奶牛的目标群体中,在GPR120基因第一外显子中共鉴定获得9个SNP位点,其中T^(100)G、G^(413)A、C^(428)T、C^(904)T4个位点为错义突变。通过关联分析发现其中的G^(413)A位点与305d日产奶量及乳脂率显著相关(P<0.05),与乳蛋白率及体细胞评分呈极显著相关(P<0.01)。T^(873)G位点与305d日产奶量、乳脂率和乳蛋白率具有极显著相关(P<0.01)。表明GPR120第一外显子处的2个SNP位点G^(413)A和T^(873)G与奶牛产奶性状密切相关,在一定程度上影响牛奶产量、乳脂、乳蛋白含量,其可作为影响奶牛泌乳性能的候选分子辅助选择标记,同时该结果为后续GPR120基因在中国荷斯坦奶牛乳脂合成中的调节机制研究奠定基础。