CRIPT与人甘丙肽2型受体的相互作用

目的通过寻找与人甘丙肽2型受体(hGalR2)C端相互作用的蛋白,以进一步探讨hGalR2转运和信号传导机制。方法利用酵母双杂交实验寻找可以与hGalR2 C端相互作用的蛋白,并通过酵母双转验证和免疫共沉淀实验验证受体和目标蛋白之间的相互作用。结果酵母双杂交方法结合免疫共沉淀实验发现和证实hGalR2与蛋白Cysteine-rich PDZ-binding protein(CRIPT)之间存在相互作用。结论 CRIPT可以与hGalR2结合而发生相互作用并可能因此参与hGalR2的转运或信号传导。

小鼠甘丙肽1型受体在HEK293A细胞中的表达和内化

目的:克隆小鼠甘丙肽1型受体(mGalR1)基因,构建其真核表达载体,并观察该基因在HEK293A细胞中的表达和内化。方法:应用RT-PCR方法,以小鼠下丘脑RNA为模板,扩增获得甘丙肽I型受体(mGalR1)基因并定向克隆到pEGFP-N1真核表达载体;mGalR1-pEGFP表达载体瞬时转染HEK293A细胞,利用激光共聚焦显微技术观察mGalR1在给予甘丙肽(10-7mol/L)0、5、10、15min刺激时的内化情况。结果:克隆得到正确的mGalR1基因全长序列,其cDNA为1 047bp,共编码348个氨基酸;共聚焦显微镜结果表明mGalR1主要在膜上表达,经甘丙肽刺激5～15min后受体下膜进入胞浆。结论:成功构建真核表达载体mGalR1-pEGFP并在HEK293A中表达;在甘丙肽刺激下小鼠甘丙肽1型受体存在内化现象。