基于靶向氨基酸代谢组学探讨乙型病毒性肝炎相关慢加急性肝衰竭瘀黄证亚型的生物学基础

目的:从氨基酸代谢角度探讨乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)湿热瘀黄证和气虚瘀黄证的生物学基础。方法:采用靶向氨基酸代谢组学分析HBV-ACLF湿热瘀黄证组(20例)与气虚瘀黄证组(20例)患者的血清氨基酸代谢谱,寻找两种证型的氨基酸代谢差异特征,分析不同证型中氨基酸代谢与炎症细胞因子表达的相关性。结果:湿热瘀黄证患者体内异亮氨酸表达水平显著高于气虚瘀黄证[(10.36±4.47)μg/ml vs(7.76±4.08)μg/ml,P=0.016],但色氨酸则表达相反[(10.26±4.95)μg/ml vs(14.51±7.32)μg/ml,P=0.014];湿热瘀黄证患者白细胞介素(IL)-6显著高于气虚瘀黄证[10.15(3.88,24.42)pg/ml vs 7.73(3.93,18.83)pg/ml,P=0.017],而IL-2、IL-10显著低于气虚瘀黄证[4.40(2.88,8.55)pg/ml vs 6.60(2.80,15.50)pg/ml,P=0.033;7.19(4.52,15.04)pg/ml vs 8.21(2.19,14.64)pg/ml,P=0.015];多种氨基酸代谢与两种证型的炎症细胞因子表达密切相关,尤其是色氨酸代谢与支链氨基酸代谢;湿热瘀黄证中氨基酸代谢主要与促炎细胞因子IL-2、IL-6相关,按照相关系数大小依次为天冬氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、酪氨酸、丝氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、色氨酸、苯丙氨酸;气虚瘀黄证中氨基酸代谢与肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-2、IL-6、IL-10相关,按照相关系数大小依次为天冬氨酸、甘氨酸、丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、丝氨酸。异亮氨酸及色氨酸代谢不仅在两种证型间差异有统计学意义,且差异性关联炎症细胞因子的表达。结论:HBV-ACLF湿热瘀黄证和气虚瘀黄证患者在氨基酸代谢及炎症反应中均具有异质性,且两者之间相互关联。色氨酸以及支链氨基酸代谢可能对HBV-ACLF的免疫炎症反应具有重要调节作用,与湿热瘀黄证和气虚瘀黄证的生物学基础密切相关。

中西医结合治疗HBV相关慢加急性肝衰竭合并肝性脑病的效果分析

目的探讨中西医结合治疗HBV相关慢加急性肝衰竭(ACLF)合并肝性脑病(HE)患者8周病死率情况,分析影响其预后的独立危险因素。方法选取2012年1月-2015年2月18家医院收治的HBV-ACLF患者,采用随机对照设计分为试验组和对照组,分别给予中西医结合治疗和单纯西医综合治疗,纳入所有0周合并HE的患者125例。观察2组8周病死率情况。计量资料2组间比较采用t检验或Mann-Whitney U检验,计数资料2组间比较采用χ2检验,生存分析采用Kaplan-Meier方法及logrank检验,危险因素分析采用Cox比例风险回归模型。结果试验组及对照组8周病死率分别为27.5%、50.0%(χ~2=5.630,P=0.018),8周内中位生存时间分别为41.2 d、28.4 d,累积生存概率分别为60.4%、32.5%(χ~2=6.187,P=0.013);Cox回归分析结果显示与对照组相比,试验组是HBV-ACLF合并HE患者预后的保护因素[风险比(HR)=0.424,P=0.018,95%可信区间(95%CI):0.208~0.864],高TBil(HR=1.063,P=0.042,95%CI:1.002~1.128)、低PTA(HR=0.942,P=0.044,95%CI:0.890~0.998)、ACLF分期晚期(HR=2.737,P=0.009,95%CI:1.287~5.818)、合并消化道出血(HR=5.291,P=0.003,95%CI:1.736~16.126)是8周死亡的独立危险因素。结论中医药治疗可显著降低HBV-ACLF合并HE患者的8周病死率,提高8周生存概率,延长生存时间。TBil、PTA、疾病分期、消化道出血是该组患者的独立预后影响因素。

中西医结合治疗原发性胆汁性肝硬化的临床观察

目的观察熊去氧胆酸(UDCA)联合中药愈肝方治疗原发性胆汁性肝硬化(PBC)的临床疗效。方法回顾性分析2007年1月～2012年4月在我院住院并符合纳入标准的PBC患者共63人,根据治疗方案不同,分为治疗组(UDCA联合愈肝方治疗)及对照组(UDCA治疗),比较两组的临床疗效。结果治疗12周后,治疗组有25例(83.3%)好转,对照组有17例好转(51.5%),治疗组的好转率优于对照组,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。且治疗组在总胆红素(TBIL)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转氨酶(AST)几项主要生化指标方面均较对照组有显著下降(P<0.05或P<0.01)。结论 UDCA联合中药愈肝方治疗原发性胆汁性肝硬化,较单用UDCA更有效。本研究中采用的愈肝方,不仅体现了中医辨证治疗的传统思想,而且综合考虑了单味药的现代药理研究结果,为中西医结合治疗PBC探索了一个新的治疗理念,充分体现了中西医结合治疗的特色。

复方鳖甲软肝片治疗慢性乙型肝炎患者对血清肝纤维化指标的影响

目的评估复方鳖甲软肝片治疗慢性乙型肝炎患者对血清肝纤维化指标的影响。方法将304例慢性乙型肝炎分为试验组219例和对照组85例。给予试验组口服复方鳖甲软肝片,对照组口服安络化纤丸,疗程24w。采用ELISA法检测透明质酸(HA)、黏连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(c-Ⅳ)和Ⅲ型前胶原(PCⅢ)。结果在治疗24 w结束时,经中医症候疗效全分析集(FAS)分析,试验组显效率为72.9%,优于对照组的56.8%(P=0.004);试验组总有效率为89.3%,优于对照组的80.7%(P=0.029);试验组血清肝纤维化指标显效率为35.3%,优于对照组的22.2%(P=0.016);治疗后试验组血清透明质酸(HA)水平下降了(87.4±111.2)ng/m L,优于对照组下降的(61.2±66.2)ng/m L(P=0.01),两组血清LN、c-Ⅳ、PCⅢ水平变化无统计学差异(P>0.05);两组肝功能指标复常率差异无统计学意义(P>0.05);试验组未发现不良反应。结论复方鳖甲软肝片治疗慢性乙型肝炎患者安全、有效,可以改善肝纤维化指标。

酒精性肝病的中西医病因病机研究进展

尽管临床指南对酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)的诊断提供了依据,但ALD的疾病严重程度却经常与饮酒量不成正相关。为了更有效地预防ALD的发生,并且提供更加有效的治疗方法,明确其病因病机显得十分必要。根据目前对ALD的病因和病机的研究,本文分别从ALD的危险因素、分子作用机制及中医对ALD病机的认识三方面进行综述。

乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP12的克隆化

目的:应用基因表达谱芯片技术及生物信息学技术筛选并克隆乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白反式激活新型靶基因,进一步阐明HBV感染相关性疾病的发病机制. 方法:以HBV X蛋白表达质粒pcDNA3.1(-)-X转染HepG2 细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,提取总RNA 进行逆转录,对产物行基因表达谱芯片分析.应用分子生物学技术,结合生物信息学技术,克隆HBV X反式激活作用的新的靶基因. 结果:对于所获基因片段序列分析表明,其中之一为新型基因片段.从HepG2细胞提取总RNA,以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列,并测序证实,因其可以被X蛋白反式激活,故命名为X蛋白反式激活蛋白12(XTPl2),已在GenBank中注册,注册号: AY598792.PS2TP1基因的编码序列全长为731个核苷酸(nt),编码产物由230个氨基酸残基(aa)组成. 结论:HBV X反式激活新靶基因被成功克隆,为进一步研究HBV X蛋白的分子生物学机制和探索新型治疗技术奠定基础.

HBx与肝细胞癌的发生机制

在我国，大约80％的肝细胞癌（hepatoeelhlar carcinoma，HCC）与乙型肝炎病毒（HBV）感染有关，乙型肝炎病毒X蛋白（hepatitisBvirusXprotein，HBx）作为恶性转化肝细胞中惟一表达的蛋白质，与HCC的发生与发展密切相关。本文就HBx的功能与HCC的发生机制之间的关系综述如下。

基因表达谱芯片技术筛选乙型肝炎病毒X蛋白反式调节基因12

目的应用基因表达谱芯片技术研究乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因12(XTP12)的反式调节基因。方法以分子生物学技术构建XTP12的真核表达载体[pcDNA 3.1(-)]-XTP12,以表达质粒pcDNA 3.1(-)-XTP12转染人肝母细胞瘤细胞系(HepG2)细胞,以空载体pcDNA 3.1(-)为平行对照,制备转1染后的细胞裂解液,提取mRNA。应用基因表达谱芯片技术对差异表达mRNA进行检测和分析。结果HepG2细胞经转染XTP12后,有21条基因表达增强,14条基因表达降低。这些基因包括免疫调节、细胞凋亡、信号转导等基因。结论XTP12基因的表达对于肝细胞基因表达谱有显著影响。DNA芯片技术是分析反式激活靶基因的有效技术途径。

应用抑制性消减杂交技术克隆和筛选HBV XTP12蛋白反式激活基因的上调基因

目的克隆并筛选乙型肝炎病毒(HBV)反式激活基因XTP12的上调基因,了解其可能存在的调节功能。方法应用抑制性消减杂交技术克隆并筛选XTP12反式激活的新型靶基因。以XTP12表达质粒pcDNA3.1(-)-XTP12转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaⅠ酶切后,将实验组cDNA分成2组,分别与2种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行2次消减杂交及2次抑制性聚合酶链反应(PCR),将产物与pGEM-Teasy载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果成功构建人XTP12反式激活基因差异表达的cDNA消减文库。文库扩增后得到68个阳性克隆,进行菌落PCR分析,均得到200～1 000bp插入片段。随机挑选其中28个插入片段测序,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列,结果共获得28种编码基因,其中26种为已知基因编码蛋白,2种为未知功能的新基因。结论筛选到的cDNA全长序列,包括一些与细胞生长调节、物质代谢、免疫及肿瘤等密切相关的蛋白编码基因,推测了XTP12可能存在的调控机制的线索。

乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP13的克隆

目的克隆乙型肝炎病毒(HBV)X 蛋白反式激活新型靶基因。方法以 HBV X 蛋白表达质粒 pcDNA3 1(-)-X转染 HepG2细胞,以空载体 pcDNA3.1(-)为平行对照,提取总 RNA 进行逆转录,对产物行基因表达谱芯片分析,确定新基因编码序列后,以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术扩增新基因序列。结果获得新基因的全长序列,并测序证实,命名为 X 蛋白反式激活蛋白13(XTP13)。结论成功克隆 XTP13,为进一步阐明 HBxAg 在 HBV 感染中的分子生物学机制奠定基础。

炭疽疫苗新进展

对于炭疽病的预防,我国既往使用的是"人用皮上划痕炭疽减毒活疫苗",接种后2d可产生免疫力,并可维持1年;应用A16R株炭疽芽孢菌气雾免疫也是安全有效的,吸入量为1亿个菌/人次,血清阳转率为80%以上.本文将炭疽疫苗的新进展综述如下:

大剂量何首乌醇提物致大鼠多脏器损伤研究

目的观察大剂量何首乌对大鼠主要脏器的损伤作用,暴露其可能的毒性作用。方法采用亚急性毒性试验,初步比较生何首乌和制何首乌不同提取物(20g生药/kg)灌胃28天的毒性,观察肝脏病变频数;进一步对毒性较大的生何首乌和制何首乌醇提物进行研究,以40g生药/kg连续灌胃28天,观察大鼠体重增长情况、脏器指数变化、肝肾功能生化指标、组织病变结果。结果初步发现生何首乌和制何首乌醇提物毒性均大于各自的水提物和药材全粉,肉眼观察发现服药大鼠主要脏器中,肝脏发生显著病变的频数最高。何首乌醇提物毒性结果发现,与未给药动物比较,生何首乌组和制何首乌组大鼠体重增长显著受抑,生首乌组主要脏器指数显著升高;组织病理检查显示生何首乌组和制何首乌组肝、肾和肺脏均发生显著损伤;肝功能生化指标动态监测显示:生何首乌组谷丙转氨酶和谷草转氨酶仅在给药第3天时出现一过性显著升高,在此后第7、14、21和28天均无显著改变,而CCl4阳性对照组在实验第1周ALT和AST即出现显著升高。结论初步实验提示何首乌的肝毒性物质可能集中在醇提物,其毒性器官主要集中在肝脏。进一步实验提示生何首乌毒性大于制何首乌,何首乌对肝、肾和肺均有损伤,其中对肺脏的损伤作用是首次报道;肝功能生化指标谷丙转氨酶和谷草转氨酶对何首乌肝损伤不敏感,提示何首乌肝损伤的机制可能与CCl4主要基于细胞膜脂质过氧化的肝损伤机制不同。

FibroScan评价复方鳖甲软肝片抗纤维化的疗效

目的使用瞬时弹性成像的方法,评价在恩替卡韦抗病毒治疗基础上,复方鳖甲软肝片治疗代偿期乙型肝炎肝硬化的疗效。方法以代偿期乙型肝炎肝硬化为研究对象,开展前瞻性随机对照试验,对照组50例,使用恩替卡韦抗病毒治疗,试验组50例,在使用恩替卡韦抗病毒基础上联合复方鳖甲软肝片抗纤维化治疗,观察时间节点为6和12个月,比较两组治疗后以及各组自身治疗前后瞬时弹性数值的变化情况。计量资料采用t检验,计数资料及率的比较采用χ2检验。结果复方鳖甲软肝片治疗后,在降低瞬时弹性数值方面,治疗6、12个月均优于对照组(t=2.963、2.239;P=0.004、0.027)。瞬时弹性程度在治疗6、12个月与治疗前比较均有显著下降,对照组治疗6个月与治疗前相比,t=4.295,治疗12个月与治疗前相比,t=6.109,治疗12个月与治疗6个月相比,t=5.394,上述P均<0.001。试验组治疗6个月与治疗前相比,t=8.505,治疗12个月与治疗前相比,t=9.882,治疗12个月与治疗6个月相比,t=7.930,上述P均<0.001。治疗12个月后试验组肝硬化的比例明显低于对照组(χ2=4.058,P=0.044)。结论恩替卡韦抗病毒治疗后,肝纤维化的程度可有一定程度的减轻,联合复方鳖甲软肝片治疗后,能够更显著地降低瞬时弹性数值。

慢加急性肝衰竭中西医结合诊疗指南

慢加急性肝衰竭(ACLF)是在慢性肝病基础上,由各种诱因引起的以黄疸急性加深、凝血功能障碍等肝衰竭表现的临床症候群,短期内出现多脏器功能衰竭及高病死率是其主要特征。慢加急性肝衰竭中医学属于“急黄”“瘟黄”“肝瘟”等范畴,目前临床上尚缺乏特效的内科治疗手段。本指南以解决“中西医临床关键问题”为导向,工作组参考PICO(Participants、Interventions、Comparisons、Outcomes)原则构建ACLF相关临床问题,遵循循证医学原则,在对近10年ACLF中西医结合疗效临床证据进行系统梳理和客观评价的基础上,参考最新发表的国际、国内相关诊疗指南、专家共识等,并广泛征求多学科专家的意见,最终形成本指南,旨在为临床医师诊断和治疗ACLF提供指导和参考意见,进一步提高我国ACLF诊治水平。

原发性胆汁性肝硬化中医证候分型文献分析

目的了解现有原发性胆汁性肝硬化临床研究文献中中医证候规律的特点。方法检索中国期刊全文数据库、万方数据库和维普数据库,收集并阅读全文,筛选出符合纳入标准的文献,提取证候类型和辨证依据等资料,进行描述性统计学分析。结果在检索出的78篇文献中,符合纳入条件的文献7篇,所涉及原发性胆汁性肝硬化中医证型共20种,排名在前6位的中医证型分别为:肝郁脾虚(34.85%)、肝肾阴虚(27.82%)、湿热瘀血(6.69%)、湿热蕴结(4.23%)、脾胃气虚(3.87%)和湿滞血瘀(3.52%);证候分型要素共14个,排名前6位的分别为脾虚(40.49%)、肝郁(39.43%)、肝阴虚(31.34%)、肾阴虚(31.34%)、瘀血(25.70%)和湿热(17.25%)。结论中医研究原发性胆汁性肝硬化的论文水平较低,分型依据缺乏科学性。

复方鳖甲软肝片对乙型肝炎血清纤维化标志物作用的meta分析

目的采用meta分析法对复方鳖甲软肝片治疗乙型肝炎的论文进行分析。方法纳入"以慢性乙型肝炎或乙型肝炎肝硬化为研究对象,对照组口服核苷类药物抗病毒治疗,试验组加用复方鳖甲软肝片治疗"的临床随机试验,使用Revman软件对治疗前后血清纤维化标志物的变化进行meta分析。结果在521篇发表论文中析出符合要求的论文8篇;Meta分析提示,在治疗12个月后,与对照组比,复方鳖甲软肝片治疗患者血清透明质酸、层粘连蛋白、Ⅲ型前胶原和IV型胶原的降低程度均显著优于对照组,其对应的权重均数差及95%可信区间分别为80.62μg/L[-127.77-33.47],52.02μg/L[-81.60-22.45],72.26μg/L[-109.6-34.92],53.84μg/L[-91.65-16.03],上述P值均小于0.05。结论复方鳖甲软肝片治疗乙型肝炎患者能够有效降低血清纤维化标志物。

甲状腺功能亢进症致亚急性肝衰竭1例报告

甲状腺功能亢进症简称甲亢，可影响全身各个器官，产生一系列生理病理变化，累及肝脏时可导致肝肿大、肝功能异常、黄疸、甚至肝硬化，

35例先天性肝纤维化患者的临床及病理特点

目的总结先天性肝纤维化(CHF)的临床、影像学表现及病理特点。方法回顾性分析35例病理证实为CHF患者的临床和病理资料,分别将临床、影像学表现与病理特点进行比较研究。结果 35例患者中男20例,女15例,发病年龄2～52岁,平均年龄(19.71±2.04)岁,脾大21例(60.00%),肝大10例(28.57%),食管胃底静脉曲张15例(42.86%),上消化道出血和黑便10例(28.57%),贫血17例(48.57%),腹水14例(40.00%)。合并Caroli’s病10例(28.57%),肾囊肿4例(11.43%),胆管炎3例(8.57%),实验室检查示谷丙转氨酶(ALT)为(56.77±10.07)U/L,谷草转氨酶(AST)为(57.71±8.34)U/L,转氨酶出现轻度升高,30例患者影像学表现为肝硬化。以胆碱酯酶(CHE)正常值下限5 400 U/L为界,与CHE>5 400 U/L患者相比,CHE<5 400U/L的患者更易出现脾大,白蛋白、血红蛋白和红细胞总数出现明显下降(P<0.05)。病理学表现为肝实质细胞正常,门脉周围纤维化。结论 CHF临床上常见门脉高压,肝功能基本正常,肝活检是确诊的必要检查,CHE、ALB、HGB和RBC等指标降低程度能反映CHF疾病的严重程度。

索菲布韦联合利巴韦林治疗2a型丙型肝炎肝硬化代偿期患者临床观察

目的:探讨索菲布韦联合利巴韦林治疗丙型肝炎肝硬化的临床效果。方法:回顾性分析我科自2014年5月-2015年5月收治的40例2a型丙型肝炎肝硬化代偿期患者,其中20例患者使用索菲布韦联合利巴韦林(DAAs组)治疗;20例患者使用聚乙二醇干扰素α-2a(派罗欣)联合利巴韦林(干扰素组)治疗,观察两组患者临床疗效及药物副作用。结果:①DAAs组患者7天病毒应答率、快速应答(RVR)率、完全应答(ETR)率、持续应答(SVR)率与干扰素组相比明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);②治疗过程中,DAAs组患者不良反应(头痛、发热、肌肉关节痛、抑郁及血小板、白细胞减少)发生率明显低于干扰素组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:DAAs组患者的临床疗效明显高于干扰素组,且不良反应发生率明显低于干扰素组,索菲布韦联合利巴韦林是治疗丙型肝炎肝硬化代偿期患者有效、安全的药物。