固定化短乳杆菌催化合成γ-氨基丁酸的研究

以海藻酸钠为载体,包埋法固定化短乳杆菌,催化L-谷氨酸钠合成γ-氨基丁酸,通过正交试验对细胞固定化条件进行优化,并对固定化细胞的酶学性质及操作稳定性进行研究。确定最佳固定化条件为海藻酸钠浓度2.5%、CaCl2浓度3.0%、固定化细胞平均粒径3.2 mm、硬化时间4 h。在此条件下制备的固定化细胞最适酶反应pH值为4.5,最适温度为35℃,且表现出较好的操作稳定性,重复利用至第7次后仍保持53.2%的相对酶活力。

鬼针草水煎液改善LPS诱导中枢神经系统炎症所致小鼠学习记忆障碍的作用研究

目的:探索鬼针草水煎液对LPS腹腔注射诱导小鼠中枢神经系统炎症致学习记忆障碍的保护作用及可能机制。方法:将小鼠随机分为正常对照组、模型组及鬼针草水煎液低、中、高剂量组。避暗实验、新奇事物辨别实验及Morris水迷宫实验检测小鼠的学习记忆能力;试剂盒检测小鼠血清SOD、MDA、GSH水平;尼氏染色观察小鼠海马尼氏体数量和病理变化;免疫组化检测小鼠大脑海马区NF-κB、CHOP蛋白表达情况;Western blot检测炎症相关因子TNF-α、NLRP3、NF-κB、IL-1β,内质网应激相关因子ATF-4、CHOP,氧化应激相关因子NOX-2蛋白表达情况。结果:避暗实验、新奇事物辨别实验及Morris水迷宫实验均显示鬼针草水煎液可改善LPS诱导中枢神经系统炎症所致小鼠认知障碍,提高小鼠学习记忆能力;血清学指标显示,与正常对照组比较,模型组SOD、GSH活性显著降低,MDA含量显著升高(P<0.01),与模型组比较,鬼针草水煎液中、高剂量组SOD、GSH活性显著升高,MDA含量显著降低(P<0.05或P<0.01);尼氏染色结果显示模型组小鼠海马区细胞排列紊乱,不同浓度的鬼针草水煎液处理后,尼氏体数量有所增加,细胞凋亡数量减少;免疫组化结果显示模型组小鼠海马区NF-κB、CHOP蛋白表达显著升高(P<0.01),与模型组比较,不同剂量给药组小鼠海马区NF-κB、CHOP蛋白表达显著降低(P<0.01);Western blot结果表明模型组小鼠脑组织中TNF-α、NLRP3、NF-κB、IL-1β、ATF-4、CHOP、NOX-2蛋白表达显著升高(P<0.05或P<0.01),不同剂量给药组小鼠脑组织中上述蛋白表达均不同程度降低。结论:鬼针草水煎液可改善LPS诱导中枢神经系统炎症所致小鼠认知障碍,提高小鼠学习记忆能力,其机制可能与抑制NF-κB炎症相关通路及CHOP内质网应激相关通路,减轻氧化应激反应,抑制细胞凋亡有关。

二至丸不同时间给药对衰老性肝损伤模型小鼠肝组织生物钟相关因子Bmal1、Cry1表达的影响

目的探讨不同时间给予二至丸对衰老性肝损伤的影响及可能作用机制。方法60只C57雄性小鼠随机分为正常对照组、模型组、二至丸1:00组、二至丸7:00组、二至丸13:00组、二至丸19:00组,每组10只。除正常对照组外其余各组小鼠每日皮下注射300 mg/kg D-半乳糖诱导衰老性肝损伤模型,共56天。于造模第11天开始,二至丸1:00组、二至丸7:00组、二至丸13:00组、二至丸19:00组分别于1:00、7:00、13:00和19:00给予二至丸2.5 g/kg灌胃,正常对照组和模型组小鼠灌胃给予0.01 ml/g生理盐水,连续46天。检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)和过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;HE染色观察肝组织病理形态变化,Western blot检测小鼠肝组织生物钟相关因子脑和肌肉芳香烃受体核转运样蛋白1(Bmal1)和隐花色素1(Cry1)蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,模型组小鼠肝组织出现广泛水肿样变,细胞核固缩深染,肝索排列紊乱等,血清ALT、AST、MDA水平显著升高,血清SOD、CAT及肝组织Bmal1、Cry1蛋白水平显著降低(P<0.01);与模型组相比,二至丸1:00组和二至丸7:00组小鼠肝组织病理学变化均有明显的改善,血清中的ALT、AST、MDA水平显著降低,血清SOD、CAT及肝组织Bmal1、Cry1蛋白水平显著降低(P<0.05或P<0.01),二至丸13:00组和二至丸19:00组小鼠肝组织则表现出严重的病理性损伤,血清ALT、AST、SOD、CAT和MDA水平,肝组织Cry1蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05),二至丸19:00组小鼠肝组织Bmal1蛋白水平明显升高(P<0.05);与二至丸1:00组比较,二至丸7:00组小鼠血清ALT和AST水平显著升高,肝组织Bmal1、Cry1蛋白水平,二至丸19:00组肝组织Bmal1蛋白水平均明显降低(P<0.01)。结论二至丸对D-半乳糖诱导的小鼠衰老性肝损伤具有显著的保护作用,且其药理作用具有明显的时间差异性,其中于1:00给予二至丸的改善作用更好,作用机制可能与抗氧化应激、改善生物钟紊乱有关。

鬼针草乙酸乙酯提取物对内质网应激所致肝细胞损伤的保护作用研究

该研究旨在探讨鬼针草乙酸乙酯提取物对内质网应激所致的肝细胞损伤的保护作用及机制。衣霉素诱导L02细胞建立内质网应激损伤模型;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测鬼针草乙酸乙酯提取物对内质网应激所致L02细胞损伤的存活率;Western blot法检测内质网应激信号通路蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、真核生物翻译起始因子2α(eIF2α)、转录因子激活蛋白4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、B细胞淋巴瘤/白血病基因2(Bcl-2)、Bcl-2结合抗凋亡基因(Bax)的表达水平,同时检测加入内质网应激抑制剂(4-苯基丁酸)和shRNA沉默CHOP因子后上述表达情况;免疫荧光法检测L02细胞中GRP78、PERK、CHOP的表达水平。结果显示,鬼针草乙酸乙酯提取物显著提高内质网应激所致L02细胞损伤的存活率(P<0.05或P<0.01),并在一定范围内呈时间剂量依赖性。给药组的GRP78、PERK、eIF2α、ATF4、CHOP、Bax表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01),Bcl-2表达水平显著升高(P<0.01);加入内质网应激抑制剂和shRNA沉默CHOP因子后,GRP78、PERK、eIF2α、ATF4、CHOP、Bax表达水平显著降低(P<0.01),Bcl-2表达水平显著升高(P<0.01)。免疫荧光结果显示GRP78、PERK、CHOP表达情况与Western blot法检测结果一致。综上,鬼针草乙酸乙酯提取物对内质网应激所致的L02细胞损伤具有显著保护作用,其机制可能与抑制内质网应激,下调PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路所介导的细胞凋亡有关。

后疫情时代“习近平生态文明思想”研究——战“疫”中的生态文明建设

习近平生态文明思想始终伴随着社会存在而不断发展,尤其是在新型冠状病毒爆发并且逐渐步入常态化阶段的后疫情时代,其具体内涵以及实践性转化也发生了时代性变化。文章立足于新冠肺炎疫情防控工作进入一个常态化发展阶段的历史时代背景,结合习近平生态管理文明建设思想的深刻思想内涵和地区历史文化发展概况,从不同历史角度为后疫情防控时代地区生态管理文明思想建设发展提出了有针对性政策建议,并通过列举战“疫”过程中生态文明建设取得的一系列战略性成果,针对当前国际形势,总结出习近平生态文明思想在新的时代背景下所具备的重大指导意义以及所产生的深远影响。

短乳杆菌DLF-19076全细胞催化合成γ-氨基丁酸

以Lactobacillus brevis DLF-19076全细胞作为催化剂将谷氨酸钠转化成γ-氨基丁酸。通过单因素实验确定最佳反应条件:缓冲体系为0.2mol/L柠檬酸-Na2HPO4、温度35℃、pH4.5、PLP10μmol/L、细胞浓度100g/L(湿重)、底物浓度为60g/L。采用1%曲拉通X-100对细胞于35℃透化性处理30min后,进行全细胞分批补料实验,经过3次补料后,反应液中γ-氨基丁酸产量为85.71g/L,摩尔转化率为87.84%,最大生产强度为10.96g/L.h。该研究为后续高效生产γ-氨基丁酸提供了可行途径。