木瓜蛋白酶样半胱氨酸蛋白酶的研究进展

木瓜蛋白酶样半胱氨酸蛋白酶(papain-like cysteine proteases,PLCPs)广泛存在于三界生物中,执行多种生物学功能,是目前研究较多的一类半胱氨酸蛋白酶。这些酶拥有与木瓜蛋白酶相似的折叠方式,包含两个典型的结构域L-domain和R-domain,和一个保守的Cys-His-Asn催化三分体以及与底物结合的活性中心口袋。本文对PLCPs参与的生理和病理过程、分类、激活方式、催化机制等方面进行了阐述,旨在进一步加深对PLCPs的结构和功能的认识。

白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白表达纯化及活性研究

[目的]采用大肠杆菌表达白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白,表达纯化后进行抗细胞黏附活性及抑制凝血酶活性的功能研究。[方法]将编码白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白的基因构建到pET28a载体上,转化菌株Rosetta(DE3)并经IPTG诱导表达后分别经镍柱和分子筛进一步纯化,使用实时细胞分析仪和血凝仪分别测定了白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白的抗粘附活性及抗凝血活性。[结果]成功表达并纯化出白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白,并测定了嵌合蛋白生化及细胞水平活性。[结论]白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白在大肠杆菌中经IPTG诱导表达。经亲和层析和分子筛层析纯化,蛋白纯度达到90%以上,该蛋白同时具有抗细胞粘附及抗凝血双功能,为后续成药性开发奠定基础。