卡氏肺孢子虫包囊形态学数据和参数的建立和分析

目的建立并分析卡氏肺孢子虫包囊的形态学数据和参数。方法使用计算机图像分析系统测量卡氏肺孢子虫包囊的长径、短径、周长及等效直径,计算其面积、体积、圆球度及成熟包囊数量等数据。结果包囊长径最大值为8.31μm,最小值为2.31μm;包囊短径最大值为6.30μm,最小值为1.69μm;包囊周长最大值为25.43μm,最小值为6.83μm;包囊面积最大值为38.53μm2,最小值为3.36μm2;包囊体积最大值为164.73μm3,最小值为4.64μm3。结论卡氏肺孢子虫包囊形态学数据和参数的建立为量化及评价虫体的形态奠定了基础。

卡氏肺孢子虫超微结构观察

目的观察Wistar大鼠肺组织中卡氏肺孢子虫生长发育的超微结构。方法45只雌性Wistar大鼠随机分为2组,实验组(35只)每周2次经皮下注射地塞米松(1mg/次),对照组(10只)不作处理同步饲养。分别于首次注射地塞米松后第1～10周内,每周取两组鼠肺组织,电镜下观察卡氏肺孢子虫的感染情况及其生长发育的超微结构。结果电镜下观察,卡氏肺孢子虫虫体主要寄生于Wistar大鼠肺泡腔内,也见于肺泡膈、肺巨噬细胞和中性粒细胞,虫体表面有管状突起,内含细胞核、线粒体、空泡、粗面内质网和丰富的核糖体。许多卡氏肺孢子虫滋养体附着于肺Ⅰ型上皮细胞,偶见附着于肺Ⅱ型上皮细胞,有的伸出1或多个较宽大的伪足,部分细胞质内发现核相关细胞器和纺锤微管。囊前期有早、中、晚3种类型,在其内发现代表减数分裂的联会复合体。包囊壁上有一增厚处,内有一孔隙。结论卡氏肺孢子虫生活史由滋养体、囊前期和包囊等构成,包囊壁增厚处孔隙的存在提示为囊内小体逸出的一种模式。

PCR技术对大鼠卡氏肺孢子虫DNA的检测

目的 探讨诊断卡氏肺孢子虫感染的最佳方法。方法 建立大鼠动物模型，肺涂片用吉氏染色法查肺孢子虫包囊，支气管灌洗液、肺组织和血液标本，用ＰＣＲ技术进行卡氏肺孢子虫ＤＮＡ的检测，共计实验组大鼠１２ 只及对照组８ 只。结果 实验组大鼠，吉氏染色法卡氏肺孢子虫包囊检出率为６６－７％ ，ＰＣＲ技术支气管灌洗液、肺组织和血液标本，卡氏肺孢子虫ＤＮＡ检出率分别为８１－８ ％ 、５０％ 和５０％ 。比肺印片提前２ 周检出。对照组大鼠，吉氏染色法未检出卡氏肺孢子虫包囊，在支气管灌洗液和血液标本中，ＰＣＲ技术测出了卡氏肺孢子虫ＤＮＡ。结论 在血液标本中ＰＣＲ的成功应用，为卡氏肺孢子虫感染的流行病学调查及人类卡氏肺孢子虫肺炎的诊断，提供了一种有用的、非创伤性的方法。

卡氏肺孢子虫感染的实验研究

为探索卡氏肺孢子虫肺炎的发病机制，将大鼠分为实验组和对照组。给予实验组大鼠肌注地塞米松以诱发肺孢子虫肺炎。每周剖杀，光镜及电镜下对其两组大鼠肺组织进行病原学和病理学观察。对照组大鼠健康，第８ｗｋ后体重增加４５％，肺组织未见病理改变，亦未观察到卡氏肺孢子虫。实验组大鼠慢性发病，第８ｗｋ后体重比原来减少约２６％。电镜下第４ｗｋ、光镜下第５ｗｋ开始查见卡氏肺孢子虫，第７～８ｗｋ达重度感染，阳性率为６６．７％。该虫在肺泡腔内多见，肺间质中少见，在中性粒细胞、肺泡巨噬细胞和Ⅱ型肺泡上皮细胞内也见到。肺组织在实验前４ｗｋ几乎没有什么改变，第５～６ｗｋ有少量虫体附着于肺泡壁，第７～８ｗｋ表现为卡氏肺孢子虫肺炎的典型组织病理学改变。大滋养体伸出丝状伪足与Ⅰ型上皮细胞粘连，该处上皮细胞发生变性改变，Ⅱ型上皮细胞发生凋亡。

脑裂头蚴病1例报告

患者，女，24岁，山东蓬莱县村里集大庄人。头晕、头痛，有时恶心呕吐，行走不稳向右偏斜，2个月余。在当地县医院经CT、磁共振（MRI）检查，发现占位性病变。2006年3月5日来青岛大学医学院脑科医院就诊。体检：神志清醒．精神尚可。双侧瞳孔等大，对光反射灵敏。四肢肌力Ⅴ级．巴氏征（-），腱反射存在。右侧指鼻试验（＋）。血常规检查，白细胞（WBC）8．23×10^9/L，中性粒细胞（N）62．9％．淋巴细胞（L）28．7％，单核细胞（M）6．0％，嗜酸性粒细胞（E）1．8％．嗜碱性粒细胞（B）0．6％．血红蛋白（Hb）145/L。

青岛地区人体隐孢子虫感染调查

①目的探讨隐孢子虫在青岛地区的发病情况及其致病性。②方法抽样调查青岛市（市内、市郊）腹泻病人及散居人群，收集其粪便标本，用金胺－酚染色法及改良抗酸染色法检查隐孢子虫，对该虫阳性者进行随访并查其家庭成员。③结果共调查３６５５人，隐孢子虫检出率为２．４％，其中腹泻病人、散居人群、阳性者家庭成员检出率分别为２．２％，１．９％和８．６％．男女检出率分别为２．５％和２．２％．成人和儿童检出率分别为０．７％和３．３％．市区和郊区分别为２．０％和３．０％．儿童高于成人（χ２＝２５．７９，Ｐ＜０．０１），市郊高于市区（χ２＝３．８８，Ｐ＜０．０５）。阳性者的临床症状随隐孢子虫卵囊数量的增多而加重。重度感染者家庭成员检出率与其他两类人群的检出率相比差异有极显著性（χ２＝２４．２９，Ｐ＜０．００１）。④结论青岛地区人体隐孢子虫感染情况较严重，其中重度隐孢子虫感染者为危险传染源。

卡氏肺孢子虫DNA的PCR检测

①目的探讨卡氏肺孢子虫的检测方法及感染状况。②方法收取病人痰液、肺组织及支气管灌洗液，常规方法提取ＤＮＡ，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测卡氏肺孢子虫ＤＮＡ，并与吉氏染色结果进行比较。③结果８６例住院病人，卡氏肺孢子虫ＤＮＡ的ＰＣＲ检出率为４１．９％，卡氏肺孢子虫包囊吉氏染色法的检出率为１４．９％，两种方法的检出率比较，差异有显著性（ｕ＝６．６３８，Ｐ＜０．０５）。尿毒症、肺癌、血液病和肺部炎症病人卡氏肺孢子虫ＤＮＡ的ＰＣＲ检出率分别为３７．５％，６１．５％，５０．０％和２０．８％，差异有显著性（χ２＝９．０１，Ｐ＜０．０５）。痰液、肺组织和支气管灌洗液标本，卡氏肺孢子虫ＤＮＡＰＣＲ的检出率分别为２８．６％，６１．９％和７７．８％，差异有极显著意义（χ２＝１２．３０，Ｐ＜０．０１）。吉氏染色法检测出的１０份卡氏肺孢子虫包囊阳性标本，ＰＣＲ检测皆为阳性；５７份阴性标本，ＰＣＲ检测出１５份为阳性。４份结核标本ＰＣＲ检测皆为阴性。④结论ＰＣＲ技术检测肺组织和支气管灌洗液标本中的卡氏肺孢子虫ＤＮＡ。

儿童隐孢子虫感染的调查研究

采用金胺-酚染色法及改良抗酸染色法染色,对青岛地区969例儿童粪便进行了隐孢子虫感染检查,共发现阳性者26例,感染率为2.7%,其中一乡村为7.9%.隐孢子虫感染率性别间、学龄前儿童与小学生间无显著差异,但乡村与城市间有极显著差异.人际传播为主要途径.

人体寄生虫学教学改革探索

为适应21世纪医学发展的新形势,笔者在人体寄生虫的教学中,对教学观念、教学内容及教学方法,进行了初步改革探索,结果提高了教学质量,受到了学生的好评获得了学院的嘉奖。

恶性疟原虫AMA-1(Ⅲ)基因在毕赤酵母系统中的高效表达

目的 利用毕赤酵母高效表达系统表达用于下游实验的恶性疟原虫AMA - 1(Ⅲ )重组蛋白。方法 将测序正确的AMA - 1(Ⅲ )基因插入毕赤酵母分泌型表达载体 pPIC9k中 ,用高压电穿孔转化法将目的基因转化入酵母感受态细胞GS115 ,筛选高拷贝转化子 ,利用甲醇进行诱导表达。表达产物用SDS -PAGE和免疫印迹进行检测。结果 AMA - 1(Ⅲ )蛋白表达于培养上清 ,蛋白的相对分子质量分别为 16 .3ku ,免疫印迹结果表明AMA - 1(Ⅲ )基因表达蛋白能被抗AMA - 1(Ⅲ )的单抗所识别 ,出现特异条带 ,推算AMA - 1(Ⅲ )蛋白的表达量为 0 .8g/L。 结论 酵母细胞表达系统可高效表达在构象方面接近天然蛋白的AMA - 1(Ⅲ )

卡氏肺孢子虫标本染色方法的改进

①目的 改进卡氏肺孢子虫标本的染色方法 ,以便准确诊断卡氏肺孢子虫肺炎和制作教学标本。②方法 采用吉姆萨 瑞特染色法。③结果 染色后卡氏肺孢子虫包囊囊内小体细胞核呈紫红色 ,细胞质呈蓝色 ,囊壁呈淡蓝色 ,各部分结构清晰可辨。滋养体包核为紫红色 ,胞质为蓝色。④结论 吉姆萨 瑞特染色法操作简便、快速 ,卡氏肺孢子虫标本着色清晰 ,是临床诊断和教学中值得推广和应用的染色方法。

斑点酶联免疫吸附试验在诊断滴虫性阴道炎的临床应用

目的 探讨不受温度影响且较准确诊断滴虫性阴道炎的方法。方法 采用斑点酶联免疫吸附试验。结果 检测 10 8例经生理盐水涂片法检查滴虫阳性者标本 ,其抗体阳性率为 92 .5 % ,检测真菌阳性者标本 5 5例 ,滴虫抗体阳性率为 0。结论 斑点酶联免疫吸附试验是一种灵敏度高、重复性好、特异性强、不受温度影响的诊断滴虫性阴道炎的方法。

恶性疟原虫主要裂殖子表面蛋白1C末端片段在毕赤酵母表达系统的高效表达与纯化(英文)

目的利用毕赤酵母表达系统高效表达并获得纯度较为理想的恶性疟原虫主要裂殖子表面蛋白1 C末端片段(MSP-119)重组蛋白。方法将带有6-his基因的MSP-119基因序列插入毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9k中,用高压电穿孔转化法将目的基因转化入酵母感受态细胞GS115,筛选出高拷贝转化子,优化表达条件,利用甲醇进行诱导表达。表达产物用SDS-PAGE和免疫印迹进行检测。结果毕赤酵母分泌表达MSP-119蛋白,免疫印迹结果表明MSP-119基因表达蛋白能被抗MSP-119的单抗所识别,出现特异条带,将培养上清利用Ni-NTA柱纯化后,推算MSP-119蛋白的表达量为1.0g/L。结论酵母细胞表达系统可高效表达可免疫识别的MSP-119重组蛋白。

卡氏肺孢子虫扫描电镜观察

目的观察卡氏肺孢子虫表面结构。方法通过皮下注射地塞米松建立大鼠卡氏肺孢子虫肺炎动物模型。处死卡氏肺孢子虫阳性大鼠,取肺脏磨成匀浆,通过Percoll密度梯度离心分离提取虫体,使用扫描电子显微镜观察。结果在扫描电镜下观察到表面光滑和粗糙两种状态的卡氏肺孢子虫。表面粗糙型虫体可见微绒毛,粗细不等的管状结构及大小不等的颗粒,并观察到体壁凹陷、伪足及脱囊虫体。结论扫描电镜观察卡氏肺孢子虫呈多态性,可见虫体脱囊、伪足及体壁孔。

卡氏肺孢子虫感染动物模型建立与电镜观察

①目的 观察卡氏肺孢子虫及病变肺组织超微结构 ,探讨卡氏肺孢子虫的可能致病机制。②方法肌注地塞米松诱发大鼠卡氏肺孢子虫肺炎 ,取其肺组织 ,按常规方法进行透射电镜观察。③结果 电镜下第2 2～ 2 8天即可观察到卡氏肺孢子虫的感染 ,以包囊为主 ;第 43～ 5 6天达重度感染 ,以滋养体为主 ,肺泡腔内多见 ,肺间质中少见 ,中性粒细胞、肺泡巨噬细胞和Ⅱ型肺泡上皮细胞内也可见到。④结论 大滋养体伸出丝状伪足与Ⅰ ,Ⅱ型肺泡上皮细胞粘连 ,使上皮细胞发生变性 ,Ⅱ型上皮细胞发生凋亡。