营养、大肠杆菌和氨基酸对猪小肠上皮细胞抗菌肽和信号通路蛋白表达的影响

为了研究应激和氨基酸对上皮抗菌肽表达的作用和分子机制,试验选用猪小肠上皮细胞系IPEC-J2作为研究对象,饥饿和大肠杆菌感染分别作为营养应激和细菌应激,丙氨酸和异亮氨酸作为氨基酸处理,收集细胞mRNA,利用荧光定量PCR测定β防御素和相关信号通路蛋白表达水平。结果表明:与对照组(DMEM/F12培养基)相比,饥饿显著降低了小肠上皮细胞猪防御素2(p BD-2)、猪防御素3(p BD-3)和猪防御素EP2c(p EP2c)及沉默信息调节因子2同源蛋白1(Sirt1)、叉头转录因子1(Fox O1)和叉头转录因子4(Fox O4)的表达(P<0.05),大肠杆菌对β防御素表达无显著影响(P>0.05)。与对照组(饥饿培养基)相比,丙氨酸处理未显著影响p BD-2和p BD-3的表达(P>0.05),但显著提高了p EP2c表达水平(P<0.05);异亮氨酸处理使p BD-2、p BD-3和p EP2c表达水平显著升高(P<0.05)。与对照组相比,丙氨酸和异亮氨酸处理不同程度影响信号通路蛋白转录,丙氨酸处理显著提高了Sirt1和Fox O4的表达水平(P<0.05),异亮氨酸处理显著促进了Sirt1、Fox O1和Fox O4的表达(P<0.05)。由此得出,营养应激降低猪小肠上皮细胞中β防御素的表达,而氨基酸的补充可促进其表达,该调控作用可能与Sirt1和叉头转录因子(Fox O)信号通路蛋白有关。

异亮氨酸对大鼠血清抗氧化水平及脾脏组织结构的影响

目的:研究饮水添加不同浓度异亮氨酸对SD大鼠血清抗氧化能力及脾脏组织结构的影响。方法:清洁级断奶健康SD大鼠48只,雌雄各24只,随机分为对照组和试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,每组雌雄各6只,雌雄大鼠分笼饲养;各组饮水中分别添加0、0.5、2.5、5 mg/m L异亮氨酸,试验期28天。试验结束后,大鼠乙醚麻醉,按试验要求取材,检测血清总谷胱甘肽(T-GSH)和丙二醛(MDA)活性,常规制作石蜡切片,HE染色,显微观察并摄影。结果:与对照组比较,试验Ⅰ组雌鼠和试验III组雄鼠血清T-GSH活性显著升高(P<0.05),试验Ⅰ组雌鼠和试验II组雄鼠血清MDA含量显著降低(P<0.05)。显微观察可见,试验Ⅰ组雌鼠和试验II组雄鼠脾脏脾小结增多、增大,动脉周围淋巴鞘增厚,淋巴细胞排列较密集。结论:饮水添加0.5%异亮氨酸可提高雌鼠血清抗氧化能力,改善其脾脏组织结构;添加2.5%异亮氨酸则对雄鼠血清抗氧化水平及脾脏组织结构的作用更为明显。

硼对猪卵泡颗粒细胞形态、增殖和凋亡的影响

目的研究硼对体外分离培养猪卵泡颗粒细胞形态、增殖和凋亡的影响。方法在F-12完全培养基中培养猪原代卵泡颗粒细胞,细胞进入对数生长期后,用0~100 mmol/L硼分组处理,HE染色观察颗粒细胞形态变化,MTT法测定颗粒细胞增殖和毒性的影响,流式细胞技术检测颗粒细胞凋亡。结果添加0.01、0.1和0.5mmol/L硼可显著促进卵泡颗粒细胞的增殖,添加50和100 mmol/L硼时细胞数目急剧减少,死亡细胞数目大量增加,早期和晚期凋亡细胞比率均明显增加。结论添加低于2.0 mmol/L硼可促进猪卵泡颗粒细胞增殖并抑制其凋亡,高于2.0 mmol/L硼则加速猪卵泡颗粒细胞凋亡,细胞死亡数增多。