HIV-1 CRF01_AE重组型gp120 V1/V2结构域单克隆抗体的制备与鉴定

目的真核表达人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)CRF01_AE重组型gp120蛋白的V1/V2结构域,制备其单克隆抗体并鉴定其抗原反应性。方法构建pTriEx-3-V1/V2CNE55真核表达载体,在HEK293F细胞中表达V1/V2-His融合蛋白,纯化后作为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫后的小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,ELISA筛选分泌抗V1/V2重组蛋白单克隆抗体的阳性杂交瘤,对单克隆抗体的特异性、型别以及效价进行鉴定。结果制备并获得一株稳定分泌抗HIV-1 AE亚型V1/V2结构域单克隆抗体的杂交瘤细胞株,ELISA测定腹水效价高达1∶81 000,单克隆抗体类型属于IgG1/κ型。Western blot结果表明该单克隆抗体同样能够识别不同亚型的HIV gp120蛋白。结论成功制备出抗HIV-1 AE重组型gp120蛋白V1/V2结构域的单克隆抗体。

地塞米松预处理可改善长时程异氟醚麻醉诱发的认知功能损伤

目的 研究地塞米松预处理对长时程异氟醚麻醉后认知功能的影响.方法 将32只C57BL/6小鼠按随机数字表法分为对照组（C组,8只）、麻醉组（A组,9只）、地塞米松组（D组,8只）和地塞米松＋麻醉组（DA组,7只）.D组和DA组小鼠预先给予连续7 d地塞米松5 mg·kg-1·d-1腹腔注射后,A组和DA组小鼠行长时程异氟醚麻醉,异氟醚浓度为1.0％～1.5％,麻醉时长6 h.麻醉后14 d内检测小鼠空间记忆能力和情景记忆能力.各组小鼠于麻醉后1、3、7、14 d取右侧海马采用实时荧光定量PCR法检测糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor,GR）和N-甲基-D-天门冬氨酸受体2B（N-methyl-D-aspartate receptor subunit 2B,NR2B）mRNA的表达情况.结果 A组小鼠在异氟醚麻醉后2～11 d,正确象限访问率下降（P〈0.05）.麻醉后第3、7天,A组小鼠辨别指数（discrimination index,DI）均分别低于C组、DA组,差异有统计学意义（P〈0.05）.异氟醚麻醉后1、3、7 d,A组小鼠海马区NR2B mRNA水平比C组均增加（P〈0.05）,预给予地塞米松后上调麻醉后NR2B mRNA表达水平的降低（P〈0.05）.结论 长时程异氟醚麻醉可引起小鼠空间记忆能力和情景记忆能力的损伤,而预给予地塞米松可改善这一损伤效应,GR和NR2B介导的信号通路可能参与其中.