流式细胞术检测急性白血病除脑脊液外的髓外浸润

目的:探讨流式细胞术在检测急性白血病(AL)除脑脊液以外的髓外浸润中的作用。方法:2008年10月到2014年12月在河北燕达陆道培医院进行诊疗的AL患者,出现除脑脊液以外的髓外包块或者浆液渗出的59例患者,取标本做流式细胞术检测。结果:59例髓外标本均发现肿瘤细胞浸润,与组织学检测一致。流式检测肿瘤细胞占有核细胞中位百分比41.93%(0.38%~97.87%)。其中51例(86%)患者同时做了骨髓免疫分型检测:29例(57%)伴有骨髓病变,肿瘤细胞占有核细胞比例中位数10.91%(0.02%~85.19%)。移植后病例的髓外浸润常不伴有骨髓病变(P<0.001),急性淋巴细胞白血病(ALL)孤立性髓外浸润概率比急性髓系白血病(AML)高(P<0.05)。AML中,单核亚型(M4、M5)、CD56阳性病例易于出现髓外浸润(分别为P<0.01,P<0.001)。结论:使用流式细胞术可以有效检测急性白血病除脑脊液以外的髓外浸润。

重组载体免疫小鼠制备抗人CD33单克隆抗体

目的利用基因免疫方法制备抗人CD33单克隆抗体(mAb),并对抗体的特性及临床应用进行初步研究。方法真核载体pcDNA3.1(+)/CD33免疫小鼠,通过杂交瘤技术制备抗人CD33 mAb,并进行性能评价和临床验证。结果成功获得1株分泌小鼠抗人CD33单克隆抗体的杂交瘤细胞株,克隆号命名为HI33a,抗体亚类为IgG2a,κ。流式细胞术检测其可与髓系细胞系反应,不与淋巴系细胞系反应;可完全抑制同类进口抗体与HL-60细胞的结合。Western blot证实可识别相对分子量(Mr)为67000的HL-60细胞膜蛋白(符合CD33蛋白分子的特征)。标记藻红蛋白(PE)后,作为抗体试剂与进口试剂对比,准确度、线性、精密度等评估均符合行业标准。558例临床骨髓样本检测结果与对比试剂高度一致。结论制备了可持续分泌抗人CD33 mAb的杂交瘤细胞株。

CD16/CD13表达模式可以有效鉴别粒细胞相关疾病

CD16是流式细胞术检测发育阶段粒细胞常用标志,因其编码基因和抗体的复杂性,一些相关疾病呈现相似又不同的表型,需要加以区分。CD13表达强度随着粒细胞分化成熟而变化,所以CD16/CD13是临床监测粒细胞发育情况的常用抗体组合。本文介绍正常对照以及几种容易误诊的粒细胞相关疾病的CD16及CD16/CD13表达模式,以研究其在鉴别不同疾病中的作用。

多参数流式细胞术筛选急性早幼粒细胞白血病免疫表型特征

目的:多参数流式细胞术(MFC)分析筛选急性早幼粒细胞白血病(APL)免疫表型特征。方法:回顾性描述性研究。纳入2016年1月1日至2023年12月31日于河北燕达陆道培医院就诊的130例急性髓系白血病(AML)患者,其中经典型APL(cAPL)组44例,微颗粒变异型APL(APLv)组24例,非APL[包括NPM1突变AML(NPM1 mut AML)、AML伴KMT2A重排等]组62例。采用MFC免疫分型法分析和比较各组侧向散射光(SSC)中位表达强度(MEI)及其白血病细胞与自身成熟淋巴细胞MEI比值(T/L MEIR),CD34、髓过氧化物酶(MPO)、CD64和CD9的中位荧光强度(MDFI)及其上述参数白血病细胞与自身成熟淋巴细胞MDFI比值(T/L MDFIR)差异;绘制受试者工作特征(ROC)曲线评价流式多参数模型对cAPL和非APL、APLv和非APL的鉴别诊断效能。结果:cAPL组SSC的MEI、T/L MEIR高于APLv组和非APL组(P均<0.05),且APLv组高于非APL组(P<0.05);cAPL组和APLv组CD34的MDFI均高于非APL组(P均<0.05),APLv组的CD34 T/L MDFIR高于非APL组(P<0.05);cAPL组和APLv组MPO、CD9的MDFI、T/L MDFIR均高于非APL组(P均<0.05);cAPL组CD64的MDFI、T/L MDFIR均高于非APL组(P均<0.05)。ROC曲线结果显示,SSC的MEI、CD64的MDFI、CD9的MDFI、SSC的T/L MEIR和CD9的T/L MDFIR诊断cAPL的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.932、0.816、0.893、0.960和0.894,诊断APLv的AUC分别为0.725、0.737、0.791、0.729和0.736,其对鉴别cAPL和非APL、APLv和非APL均有较好的诊断价值(P均<0.05)。结论:通过MFC方法可分析筛选APL的免疫表型特征,对cAPL、APLv和非APL患者进行鉴别诊断。

多参数流式细胞术检测人骨髓标本中非肿瘤性异常细胞表型研究

目的:分析多参数流式细胞术(MFC)检测骨髓标本中非肿瘤性异常表型相关疾病,包括意义不明的单克隆免疫球蛋白血症(MGUS)、单克隆B细胞增多症(MBL)、Fcγ受体Ⅲ类B(FcγRⅢB)缺失、CD36缺失等的表型特征。方法:回顾性观察性研究。选取2020年1月3日至2024年3月31日于河北燕达陆道培医院进行骨髓白血病/淋巴瘤一步法MFC筛查肿瘤性疾病的24 864例患者。收集患者一般临床资料以及MFC结果。根据年龄分为<45岁组(11 495例)、45~<60岁组(5 322例)、≥60岁组(7 081例);按疾病性质分为良性疾病组(8 336例)、恶性疾病组(15 562例)、其他组(966例)。分析各组骨髓标本中非肿瘤性异常表型的发生情况。结果:MGUS、MBL、FcγRⅢB缺失、CD36缺失的发生率分别为0.072%(18/24 864)、0.511%(127/24 864)、0.221%(55/24 864)、0.004%(1/24 864)。恶性疾病组MBL的发病率低于良性疾病组( P<0.001),MGUS的发病率高于良性疾病组( P=0.034)。良性疾病组中各疾病类型的MBL发生率比较,差异有统计学意义( P<0.001),其中全血细胞减少患者中MBL发生率最高为2.72%(48/1 765);恶性疾病组中,各疾病类型的MBL、MGUS发生率比较,差异均有统计学意义( P均<0.001),其中骨髓增生异常综合征/骨髓增殖性疾病患者发生率均最高,分别为1.95%(3/154)、1.30%(2/154)。 结论:应用MFC进行白血病/淋巴瘤一步法检测的非肿瘤性异常细胞表型特征存在一定差异,对疾病的筛查具有一定的借鉴意义。

移植物淋巴细胞亚群表达与儿童异基因造血干细胞移植后非感染性肺部并发症的相关性分析

目的探讨异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)患者移植回输物中各淋巴细胞亚群细胞数或百分比与移植并发非感染性肺部并发症(NIPC)的相关性。方法收集2013年1月至2019年12月河北燕达陆道培医院收治的allo-HSCT后发生NIPC的15岁以下的患儿, 采用流式细胞技术检测移植物中各淋巴细胞亚群计数并结合患者回输方案, 采用二元Logistic回归分析回输移植物各亚群淋巴细胞(每公斤体重)或百分比与allo-HSCT并发NIPC患者疾病进展的相关性, 炎性免疫细胞的聚积与疾病的进展一致。结果 2 026例接受HSCT治疗的儿童, 59例(2.9%)患者出现NIPC, 28例(1.4%)进展为相关气漏综合征(ALS)。NIPC进展为ALS组(ALS组)和未进展为ALS组(非ALS组)在患者年龄(P=0.028)、移植前疾病状态(P=0.022)、NIPC发生距离移植时间(P=0.004)差异均有统计学意义。两组患者回输细胞中骨髓自然杀伤细胞样T细胞(NKT-like)占淋巴细胞百分比(P=0.008)、外周干NKT-like细胞占淋巴细胞百分比(P=0.003)、骨髓CD4+CD25+dim T细胞占CD4+T淋巴细胞百分比(P=0.029)、外周干CD4+CD25+dim T细胞占CD4+T淋巴细胞百分比(P=0.036)、骨髓CD4/CD8比值(P=0.004)、外周干CD4/CD8比值(P=0.020)比较, 差异均有统计学意义。移植物各淋巴细胞亚群数(每公斤体重)或百分比与疾病进展类型的二元Logistic回归模型中, 骨髓NKT-like细胞占淋巴细胞百分比(OR=2.364)、骨髓CD4+/CD8+比值(OR=1.116)及外周干细胞采集物中自然杀伤细胞(NK)占淋巴细胞百分比(OR=1.326)为NIPC进展的危险因素(P均<0.05)。NIPC进展的影响因素分析的ROC曲线下面积为0.918(P<0.001), 截断值为0.822, 敏感度为0.893, 特异度为0.929。结论 allo-HSCT移植时, 移植物高比例的炎性细胞NKT-like细胞、NK细胞水平, 及较高的CD4+/CD8+比值与NIPC患者疾病进展相关。移植前检测移植物细胞亚群有利于对移植后GVHD发生进行预判, 并对患者重点监护及时对治, 为临床预防GVHD发生提供一定依据。

流式细胞术测定外周血单克隆B细胞和/或浆细胞在EBV相关移植后淋巴细胞增殖性疾病中的意义

目的评估流式细胞术(FCM)外周血筛查单克隆B细胞和/或浆细胞(MC B/P)用于诊断EB病毒(EBV)相关移植后淋巴细胞增殖性疾病(PTLD)的初步应用价值。方法回顾性分析2018年至2019年在陆道培医院进行异基因造血干细胞移植(allo-SCT)后发热、淋巴结大的481例患者的移植后天数、病毒载量(EBV、人类巨细胞病毒)和FCM MC B/P检测等结果, 评估MC B/P诊断PTLD的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值等性能。通过logistic回归分析EBV相关PTLD的临床影响因素。中位随访时间为449(184, 700)d。结果经临床确诊为PTLD的患者51例。FCM检测外周血MC B/P阳性的患者55例。外周血MC B/P筛查PTLD的敏感度80.39%, 特异度96.74%, 阳性预测值74.55%, 阴性预测值97.65%。淋巴结肿大, 年龄、EBV、人类巨细胞病毒, 单克隆B细胞以及单克隆浆细胞, 在EBV相关PTLD阴性组与阳性组差异有统计学意义(P<0.05)。通过logistic回归分析, 单克隆B细胞、单克隆浆细胞和移植后发生PTLD的天数与EBV相关PTLD密切相关(P<0.05, AUC=0.853)。结论 FCM进行外周血MC B/P筛查对EBV相关PTLD具有良好的诊断性能。单克隆B细胞、单克隆浆细胞和移植后发生PTLD的天数与EBV相关PTLD具有相关性。

流式细胞术在成熟淋巴细胞肿瘤诊断中的应用

流式细胞术根据抗原抗体反应结合激光激发荧光素显色检测细胞免疫学标志的表达,在临床疾病检测,尤其是急性白血病诊断与分型中起到了举足轻重的作用。但是在成熟淋巴细胞肿瘤诊断中,因取材不易,存在大量正常细胞背景等原因,其应用有待进一步加强。本文从流式细胞术与病理免疫组化的异同、成熟淋巴细胞肿瘤检测常用免疫学标志、临床常见成熟淋巴细胞肿瘤的免疫表型、流式细胞术检测的常见问题与注意事项4方面阐述流式细胞术在成熟淋巴细胞肿瘤诊断中的作用,以帮助临床工作者深入了解该技术与病理相结合正确诊断成熟淋巴细胞肿瘤的意义。

CAR细胞疗法在T细胞-急性淋巴细胞白血病应用的新进展

嵌合抗原受体(chimeric antigen receptors,CAR)细胞疗法已广泛用于白血病、淋巴瘤的治疗,CD19和CD22靶向CAR-T已在复发、难治性急性B淋巴细胞白血病(RR-B-ALL)等血液系统疾病的治疗上取得了显著疗效,而在T细胞肿瘤治疗上进展缓慢。介绍了目前国内外利用CAR细胞技术与CRISPR/Cas9基因编码技术,设计了T-ALL相关的CAR细胞免疫疗法并进行了CAR细胞免疫疗法在T-ALL治疗上的初步探索。