鸭疫里默氏杆菌对鸭胚肝细胞粘附入侵能力的研究

为了分析鸭胚肝细胞用于鸭疫里默氏杆菌粘附入侵实验的可行性,本研究比较了鸭疫里默氏杆菌对鸭胚肝细胞和Vero细胞的粘附和入侵能力。首先将构建的互补质粒pRES1-ompA通过双亲本接合转导的方法导入ompA基因缺失株Th4ΔompA中,构建得到缺失株的回复菌株cTh4ΔompA;然后比较了野生株Th4、缺失株Th4ΔompA及回复株cTh4ΔompA菌株对鸭胚肝细胞和Vero细胞的粘附入侵能力。结果表明,与野生株Th4菌株相比,缺失株Th4ΔompA对鸭胚肝细胞和Vero细胞的粘附能力分别降低了3.32倍和3.12倍,入侵能力分别降低了2.25倍和7.58倍,而cTh4ΔompA对鸭胚肝细胞和Vero细胞的粘附入侵能力均得到部分回复。本研究结果表明鸭胚肝细胞可用于鸭疫里默氏杆菌粘附入侵能力的分析。

4株鹅源鸭疫里默氏杆菌生物学特性分析

近几年来鹅群发生鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)感染的病例有增多的现象,为了分析其原因,本研究对4株四川鹅源鸭疫里默氏杆菌分离株的生物学特性进行了解析。血清型鉴定的结果表明,4株中SC-11和SC-12株是血清型1型,SC-13和SC-17株未能确定血清型;溶血实验结果表明,4株鹅源鸭疫里默氏杆菌均能溶血,其中SC-13和SC-17株在血平板上的溶血能力较强;生物被膜检测结果表明,4株中SC-12和SC-13株形成生物被膜的能力较强,另2株形成生物被膜的能力较弱;药敏实验结果表明,这4株鹅源鸭疫里默氏杆菌对头孢类抗菌药物敏感,对多粘菌素和诺氟沙星耐药;值得注意的是,SC-11和SC-17株对卡那霉素敏感,推测这两株鹅源RA与本实验室过去分离的鸭源RA(卡那霉素耐受菌株)不是同一来源;对雏鸭的致病性实验结果表明,4株鹅源鸭疫里默氏杆菌对雏鸭均有致病性。本研究结果为进一步分析鹅源和鸭源鸭疫里默氏杆菌的生物学特性异同奠定了基础。

鸭疫里默氏杆菌50S L27转座子插入突变株的生物学特性分析

为了鉴定鸭疫里默氏杆菌中与卡那霉素抗性相关的基因,本研究采用构建Yb2株转座子随机突变库结合卡那霉素抗性平板来筛选相关抗性基因。先以Yb2株为受体菌,携带质粒pEP4351的大肠杆菌BW19851(pEP4351)为供体菌,构建转座子Tn4351随机突变库。用含红霉素和卡那菌素的TSA进行筛选,得到卡那霉素耐药性降低的突变株DK-2;然后采用基因组步移的方法鉴定表明,转座子插入基因组上编码核糖50S L27亚基基因;再将携带野生株Yb2的50S L27基因的大肠杆菌-鸭疫里默氏杆菌穿梭表达载体pRES-50S L27导入突变株DK-2,构建得到了回复菌株cDK-2。结果表明:50S L27基因缺失对其生长无明显的影响,而DK-2突变株对卡那霉素、新霉素和利福平的敏感性均增强。本研究为进一步解析鸭疫里默氏杆菌50S L27亚基的功能奠定了基础。