青岛市2015—2021年水痘疑似病例IgM抗体检测结果分析

了解青岛市水痘疑似病例血清的IgM 抗体水平,为合理防治水痘疫情提供科学依据。方法 采集2015 -2021年青岛市水痘疑似病例血清标本,通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)对血清中水痘-带状疱疹病毒IgM(VZV-IgM)抗体水平进行检测。结果 2015-2021年共检测水痘疑似病例血清标本788份,其中VZV-IgM抗体阳性288份,总阳性率为38.71 %;不同年份的不同性别阳性患者组抗体阳性率差异无统计学意义(2=2.258,>0.05)。阳性患者中年龄分布大多集中于14~24周岁,占比为44.44%。发病人群中占比最高的为学生(56.60%)。发病时间呈现了明显的春、冬季高峰,春季发病高峰期主要集中在3月-5月,冬季发病高峰期则集中在11月-次年1月,另外8月份也会出现水痘阳性率的升高;累计报告发病数最高的为李沧区(121例)和城阳区(100例),阳性率最高的地区为黄岛区(47例、56.63%)。结论 青岛市水痘发病具有明显的季节性,出现春、冬季两个发病高峰期;发病群体大多集中于初、高中及大学在校学生,应加强防病宣传以及疫苗接种的查漏补种工作。

新城疫病毒7793株对人结肠癌细胞的杀伤作用

目的:研究新城疫病毒NDV7793对人结肠癌细胞的体外杀伤作用,为结肠癌的生物疗法奠定基础。方法:通过蚀斑实验纯化病毒并测定纯化的NDV7793株的感染力;用乳酸脱氢酶微量释放法测定纯化病毒对人LoVo和Ls174t结肠癌细胞株的杀伤作用并且通过血凝实验测定病毒在不同细胞中的增殖力。结果:NDV7793在感染细胞96h后出现直径约为0.5mm左右的空斑,PFU为1.25×107个/ml,为弱毒株;NDV7793对LoVo和Ls174t人结肠癌细胞株有明显的杀伤作用,而且杀伤作用的强度与病毒作用的时间和病毒的浓度呈正相关的关系;NDV7793可以在肠癌细胞中生长复制,该病毒株在人结肠癌细胞株LoVo的复制能力强于Ls174t。结论:NDV7793具有较强的选择性杀伤人结肠癌细胞的作用,且为弱毒株,这株病毒具备肿瘤生物治疗的潜能。

新城疫病毒7793株抑制人结肠癌LoVo细胞裸鼠移植瘤的生长及其机制

目的:观察新城疫病毒7793株(Newcastle disease virus 7793 strain,NDV 7793)对人结肠癌LoVo细胞裸鼠移植瘤生长的作用,并探讨其可能机制。方法:建立LoVo细胞裸鼠移植瘤模型,随机分成3组,分别静脉注射PBS、5-FU以及NDV 7793,观察各组裸鼠肿瘤的生长情况,流式细胞术检测移植瘤细胞的坏死率和凋亡率,免疫组织化学法检测移植瘤组织中Bax、Bcl-2蛋白的表达,细胞色素C试剂盒检测移植瘤组织中细胞色素C的含量,ELISA法检测移植瘤组织中TNF-α含量。结果:NDV 7793较5-FU更明显抑制LoVo细胞移植瘤的生长(抑制率50.14%vs 37.14%,P<0.05)。NDV 7793组移植瘤LoVo细胞凋亡率显著高于5-FU对照组[(28.7±1.5)%vs(1.46±0.3)%,P<0.01],且NDV 7793组诱导LoVo细胞的凋亡率和坏死率[(28.7±1.5)%vs(27.80±3.32)%]相当。NDV 7793能促进移植瘤组织中Bax蛋白的表达,对Bcl-2蛋白的表达无影响。NDV 7793可提高移植瘤组织中的细胞色素C含量[(2.28±0.68)vs(0.68±0.13)μg/μl]和TNF-α的水平[(489.6±5.2)vs(167.9±3.9)pg/ml]。结论:NDV 7793可抑制人结肠癌LoVo细胞移植瘤的生长,其机制可能与其上调Bax蛋白、细胞色素C和TNF-α的表达,以及促进肿瘤细胞凋亡有关。

新城疫病毒通过上调小鼠NK细胞TRAIL表达杀伤Novikoff小鼠肝癌细胞

目的观察经腹腔注射的新城疫病毒(NDV)对小鼠脾脏NK细胞表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及杀伤Novikoff小鼠肝癌细胞的影响,并探讨其与γ干扰素(IFN-γ)的关系。方法给予BALB/c小鼠和IFN-γR-/-B6.129S7小鼠腹腔注射NDV,12 h后,用ELISA检测小鼠外周血IFN-γ浓度;分离小鼠脾脏NK细胞,用反转录PCR法检测NK细胞中TRAIL mRNA转录水平,Western blot法检测脾脏NK细胞中TRAIL蛋白水平,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞对Novikoff肝癌细胞的杀伤作用。结果腹腔注射NDV可以提高BALB/c小鼠外周血IFN-γ浓度,上调小鼠脾脏NK细胞TRAIL mRNA和蛋白表达水平,增强小鼠脾脏NK细胞体外条件下对Novikoff肝癌细胞的杀伤活性。TRAIL中和抗体能抑制NK细胞对Novikoff肝癌细胞的杀伤作用。IFN-γR-/-B6.129S7小鼠接受NDV注射后脾脏NK细胞的TRAIL表达无显著增加,NDV激活的NK细胞对Novikoff肝癌细胞的杀伤活性显著低于IFN-γ受体正常的BALB/c小鼠。结论腹腔注射NDV可增强脾脏NK细胞的体外抗肿瘤活性,其机制之一是通过IFN-γ受体途径上调NK细胞表面TRAIL蛋白表达来发挥作用。

NDV7793体外激活的小鼠单核巨噬细胞(MΦ)对小鼠肝癌细胞的杀伤作用及其机制

目的初步研究NDV7793激活的小鼠单核巨噬细胞(MΦ)对小鼠肝癌Novikoff细胞的杀伤作用,并探讨其杀伤机制与TNF-α和TRAIL的关系。方法从腹腔分离6周龄BALB/C小鼠MΦ,用NDV7793于体外刺激小鼠MΦ,以ELISA分别测定NDV7793刺激小鼠MΦ后产生的TNF-α及TRAIL水平;NDV7793体外刺激MΦ后,与小鼠肝癌Novikoff细胞混合培养,以LDH微量释放法测定小鼠MΦ对小鼠肝癌Novikoff细胞的杀伤效应。同时设立3组实验对照组:IFN-β阳性对照组、紫外线灭活NDV(UV-NDV)对照组以及空白对照组。结果与3个对照组相比,NDV7793在体外能提高MΦ分泌TNF-α、TRAIL的水平;NDV体外刺激后的小鼠MΦ能杀伤小鼠肝癌Novikoff细胞。结论NDV7793在体外能激活小鼠MΦ,小鼠MΦ被NDV7793刺激后,对小鼠肝癌Novikoff细胞的杀伤作用增强,NDV激活后的小鼠MΦ对小鼠肝癌Novikoff细胞的杀伤机制可能与TNF-α和TRAIL有关。

青岛市7株柯萨奇病毒A4型分离株全基因特征分析

目的 了解7株青岛市CVA4病毒株的全基因组特征,探讨CVA4毒株的基因变异进化特征。方法 对人恶性胚胎横纹肌瘤细胞(human malignant embryonal rhabdomyoma cell, RD cell)培养分离得到的7株来源于青岛市手足口病普通病例的CVA4毒株进行全基因组序列扩增,应用BioEdit7.09、DNASTAR6.0、MEGA5.2和SimPlot序列分析软件对扩增产物进行拼接比对测序,并与从GenBank中选取的5株中国CVA4毒株进行比对。结果 7株青岛CVA4毒株基因组核苷酸数目为7 344~7 395 bp,与原型株AY421762.1HIGH POINT比较,在编码区无碱基插入和缺失。对7株毒株进行两两同源比对,结果显示7株青岛CVA4毒株全基因组序列核苷酸一致性为87.44%~97.79%,氨基酸同源性为97.17%~99.09%。基因重组分析结果显示,15FG936株与A2/P373/2013/China株存在基因重组,15FG1059株与CV-A6/40428/TKM/2011株存在基因重组,其他5株CVA4毒株未发现明显的重组。结论 青岛市7株CVA4毒株中有2株发生了基因重组变异。

2010-2012年青岛地区手足口病病原谱及柯萨奇 A10型的分子流行病学研究

目的：阐明2010-2012年青岛地区手足口病（ HFMD）病原谱及相关柯萨奇病毒A10（ CVA10）型基因特征。方法用荧光RT-PCR法对HFMD患者咽拭子标本进行总肠道病毒（ EV）、柯萨奇病毒A16（CVA16）型和肠道病毒71（EV71）型检测，然后用半巢式反转录PCR进行肠道病毒VP1基因部分序列扩增，再结合序列分析鉴定血清型；对CVA10阳性分离株进行VP1基因全长序列扩增及基因序列测定，用MEGA5．0软件进行系统发育分析及分子特征分析。结果2010-2012年间，共检测1919个手足口病门诊轻症病例和1336个住院重症病例；门诊轻症病例中，2010年和2012年以CVA16为主，各占轻症病例总阳性数的53％和73％，而2011年以EV71为主，占轻症病例总阳性数的78％；住院重症病例中，EV71为2010年和2011年主要病原，各占重症病例总阳性数的70％和86％；其他型别（非CVA16、非EV71）肠道病毒在2012年住院重症病例中成为主要病原，占重症病例总阳性数的44％；2010-2012年分别检出其他型别肠道病毒19株、16株和22株，其中CVA10检出率最高；23株CVA10的VP1全长基因序列进化分析表明这23株CVA10病毒全部属于C基因型，它们VP1基因氨基酸序列同源性为97．3％～100．0％，与其他地区同期参考株相比无显著差异。结论2010-2012年间，CVA16和EV71是引起青岛地区手足口病流行的主要病原，同时伴有多种其他型别肠道病毒流行，其中C基因型CVA10分离率较高，它们相互间同源性较高，与其他地区同期参考株相似。

2013 年青岛地区手足口病病原谱及三种主要肠道病毒青岛分离株的基因特征分析

目的 阐明2013年青岛地区手足口病（HFMD）病原谱及肠道病毒71（EV71）型、柯萨奇病毒A16（CVA16）型和柯萨奇病毒A6（CVA6）型青岛分离株的基因特征. 方法 用荧光RT-PCR法检测2013年青岛地区HFMD患者咽拭子标本中的总肠道病毒（ EV）、EV71、CVA16和CVA6,对阳性分离株进行VP1基因全长序列扩增、基因序列测定及系统进化分析. 结果 2013年共检测841个手足口病轻症病例和107 个重症病例,肠道病毒阳性率64 .3%,主要病原构成为EV71 （ 44 .8%）、CVA6（28.2%）和CVA16（9.5%）. CVA6超过CVA16成为手足口病的第二大致病原,占3岁以下儿童肠道病毒构成的42 .7%,占重症病例分离病原的22 .2%,在手足口病病原构成中所占比例随年龄增长呈下降趋势（ P〈0 .001 ）. VP1全长的系统发生分析显示,2013年EV71属于C4基因亚型中的C4a,CVA16属于B1亚型的B1a和B1b,与其他地区同期参考株无明显差别;CVA6的VP1序列分为A^F 6个基因组,青岛地区CVA6分离株分处A和D基因组,2013年CVA6青岛分离株83 .9%位于A基因组,16 .1%位于D基因组;2012年CVA6青岛分离株66 .7%位于A基因组,33 .3%位于D基因组;2008—2011年CVA6青岛分离株全部位于D基因组. 结论 EV71、CVA6和CVA16是2013年青岛地区手足口病的主要病原;CVA6所占病原构成随年龄增长呈下降趋势;EV71 流行亚型为C4a, CVA16流行亚型为B1a和B1b;CVA6优势毒株在2008—2013年间显示出由D基因组向A基因组的改变.

青岛地区2012—2014年甲型H1N1流感病毒基因特征

目的了解2012—2014年山东省青岛地区人群甲型H1N1流行性感冒(流感)病毒流行株基因特征及变异趋势。方法收集2012年4月—2014年3月青岛地区流感样病例咽试子2 100份,分离鉴定136株,随机抽取51株,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)、基质蛋白(MP)3个基因片段全长,并进行序列测定,对各基因片段进行系统发育分析及基因和氨基酸位点变异分析。结果 HA、NA进化树分析发现,2012—2014年青岛地区流行的甲型H1N1流感病毒分为3个分支;HA蛋白的氨基酸位点分析显示,部分毒株在抗原决定位点,受体结合位点以及其他位点上发生一定程度的变异,涉及15个氨基酸位点变化;NA蛋白的氨基酸位点分析显示,与疫苗株比较有10处氨基酸位点发生了明显变异;M2蛋白分析显示所有毒株均对金刚烷胺类药物耐药。结论 2012—2014年青岛地区流行的甲型H1N1流感病毒在抗原和受体结合位点均发生基因变异及抗药毒株的出现对流感防控提出更大的挑战。

2009-2015年青岛市手足口病病原中柯萨奇病毒A4型VP1区基因特征分析

目的阐明2009-2015年引起青岛市手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)的病原之一柯萨奇病毒A4型(CV-A4)VP1编码区的基因特征。方法用荧光RT-PCR法对青岛市2009-2015年HFMD患者的咽拭子标本进行总肠道病毒(EV)、柯萨奇病毒A16(CV-A16)型和肠道病毒71(EVA71)型检测,以半巢式反转录PCR扩增非EV-A71,非CV-A16型肠道病毒VP1区部分基因序列,结合序列分析鉴定CV-A4血清型。对全部CV-A4阳性分离株进行VP1基因全长序列扩增及基因序列测定。用MEGA 5.0软件进行遗传进化及分子特征分析。结果青岛市2009-2015年7 967份HFMD患者的咽拭子标本中共分离到CV-A4 39株,分别占各年度肠道病毒总构成比的0.18%(1/541)、0.21%(2/944)、0.29%(2/681)、1.37%(4/292)、2.25%(12/534)、0.75%(7/928)和1.86%(11/591)。遗传进化分析显示,94.87%(37/39)的青岛地区CV-A4分离株位于C2b亚型,5.13%(2/39)位于C1亚型;青岛C2b亚型病毒株VP1区核苷酸一致性为90.7%~100.0%,氨基酸一致性为96.9%~100.0%。结论 CVA4不是引起HFMD的优势病原,C2b亚型毒株是青岛市CV-A4的优势流行株,同时伴有C1亚型毒株的流行。

2011-2014年青岛地区甲型H3N2流感病毒基因进化分析

目的 了解2011-2014年青岛地区人群甲型H3N2流感病毒流行株基因进化及抗原变异趋势.方法 选取2011-2014年间青岛地区流行的甲型H3N2流感病毒64株,提取病毒RNA,应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）扩增HA、NA、MP 3个基因片段,并进行序列测定,对各基因片段进行系统发育分析及基因和氨基酸位点变异分析.结果 HA进化树分析表明,甲型H3N2流感病毒基本上分为三大分支,并且每个分支与当年的疫苗株都不在同一分支上;HA1蛋白抗原决定簇共有8个位点发生了变化;NA蛋白酶活性中心及周围相关位点氨基酸组成保守,未检测到耐奥司他韦和扎那米韦的变异位点.M2蛋白均发生S31N突变.结论 2011-2014年青岛地区流行的H3N2流感病毒在持续不断地发生基因变异而产生抗原漂移;毒株全部为烷胺类药物耐药株,但对神经氨酸酶抑制剂敏感.

小鼠腹腔注射流感病毒后外周血IFN-γTNF-α和IL-2的变化及意义

目的 观察和比较小鼠腹腔注射人流感病毒H3N2和禽流感病毒H9N2后外周血干扰素γ（interferon-γ,IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）和白细胞介素2（interleukin-2,IL-2）质量浓度的变化,探讨其变化规律.方法 采用腹腔注射方式给小鼠注射人流感病毒H3N2、禽流感病毒H9N2或无病毒尿囊液,分离血清,用ELISA法检测注射后第1、2、3、4和5天外周血IFN-γ、TNF-α和IL-2质量浓度.分别比较人流感病毒H3N2和禽流感病毒H9N2注射组与阴性对照组在不同时间的IFN-γ、TNF-α和IL-2质量浓度.用方差分析和LSD-t检验进行统计学分析.结果 在某些时间段,病毒注射组外周血IFN-γ和IL-2质量浓度与阴性对照组问的差别有统计学意义,而病毒注射组TNF-α质量浓度与阴性对照组间的差别则无统计学意义.结论 小鼠腹腔注射人流感病毒H3N2和禽流感病毒H9N2可促进IFN-γ和IL-2产生,而对TNF-α产生则无显著影响.

2013—2014年青岛市柯萨奇病毒B5型手足口病病原学及重症病例临床特征

目的分析青岛市感染萨奇病毒B5（CV-B5）手足口病病例的分子特征及其所致重症病例的临床特征。方法以2013--2014年青岛市妇女儿童医院常规监测的手足口病病例为研究对象，共1844例，收集其咽拭子标本和脑脊液标本；采用回顾性研究的方法，收集研究对象的临床资料。对标本进行病毒核酸提取和分型鉴定；采用RT．PCR对CV-B5病毒株进行VPI基因全长扩增，并进行序列测定。采用MEGA7．0软件进行系统进化分析及分子特征分析；并与原型株Faulkner毒株进行比较，其VPl氨基酸序列来源于GenBank数据库。结果共获得CV．B5阳性病例8例，其中男性4例，女性4例；住院重症病例6例，门诊病例2例。6例重症住院病例的年龄为3-48月龄，中位数为26月龄，临床症状以发热、抽搐、呕吐、腹泻、皮疹为主，均合并病毒性脑炎。在VPl区，8株CV-B5病毒株与原型株核苷酸同源性和氨基酸同源性分别为77-3％-78．8％和95．5％-97．0％，氨基酸有13处变异，6株分离自重症病例毒株中有5株在VPl区发生N95S变异；在VPl进化树上，8株CV-B5病毒株全部属于D基因亚型，与同期国内其他地方毒株成一簇。结论感染CV-B5所致重症手足口病可出现神经系统受累，主要的并发症为病毒性脑炎；CV．B5毒株在VPl区核苷酸和氨基酸变异较小，呈现一定的区域聚集性。

青岛市急性呼吸道感染儿童中人副流感病毒3型血凝素-神经氨酸酶基因特征分析

探讨山东省青岛市地区急性呼吸道感染患儿人副流感病毒3型(HPIV-3)的感染情况,并分析HPIV-3血凝素-神经氨酸酶蛋白(HN)基因特征。本研究为横断面研究,青岛市妇女儿童医院、青岛大学附属医院西海岸院区及崂山院区在2018年1月至2019年12月期间,每月随机采集急性呼吸道感染(ARTI)儿科患者的咽拭子样本,总共1674份,采用多重实时荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,筛查HPIV-3阳性样本。采用巢式PCR方法扩增HPIV-3阳性样本HN全长基因并进行序列测定,序列结果与GenBank中HPIV-3的代表株进行对比分析,建立系统进化树。结果显示,1674份咽拭子样本中,HPIV-3阳性有90份,检出率为5.37%,其中,6岁以下儿童占97.78%(88份)。HPIV-3阳性病例主要分布在春季和夏季。通过巢式PCR方法扩增得到44株HPIV-3 HN基因全长序列,序列比对及进化分析表明,HPIV-3 HN基因属于C3基因亚型的C3a和C3b分支,其中,C3a亚型有30株,C3b亚型有14株。44株青岛分离株之间的核苷酸和氨基酸同源性分别为97.0%~100.0%和98.5%~100.0%。综上,2018至2019年间,HPIV-3 C3基因型的C3a和C3b分支在山东省青岛市地区循环流行,其HN基因型变异较小,进化上具有一定的地域特征。

2015年青岛地区手足口病主要病原谱及基因特征分析

目的阐明2015年青岛地区手足口病（HFMD）流行特征和病原谱变化及3种主要肠道病毒分离株的基因特征。方法描述性分析2015年青岛地区手足口病病例的年龄、月份分布情况。用荧光RT-PCR法对2015年青岛地区HFMD患者咽拭子标本进行肠道病毒通用、肠道病毒71型、柯萨奇病毒A16型和柯萨奇病毒A6型，对阳性分离株进行VPl基因全长序列扩增及基因序列测定．以MEGA7．0软件进行系统发育及分子特征分析。结果2015年共检测1176例手足口病病例，其中肠道病毒阳性率为68．4％，主要病原构成为CA6（41．4％）、EV71（31．6％）和CAl6（15．3％）。5岁及以下儿童占总病例数的80．3％。CA6占3岁以下儿童肠道病毒构成的48．9％。其中EV71流行亚型为C4a，CAl6优势流行亚型为Blb。CA6优势流行亚型为A基因组。结论CA6、EV71和CAl6是导致2015年青岛地区手足口病流行的3种主要病原。2015年CA6超过EV71成为第一致病原，主要感染3岁以下儿童。EV71的流行亚型不变。CAl6优势流行亚型为Blb。CA6优势分离株主要是A基因组。并且内部进化为多个小的分支，与A基因组内部的2013年青岛分离株处于不同分支。

青岛市柯萨奇病毒A12型VP1区基因特征及相关重症手足口病临床表现

目的 了解2011—2016年柯萨奇病毒A12型（CV-A12）青岛分离株的基因特征及所致重症手足口病临床特点.方法 人横纹肌肉瘤（human rhabdomyosarcoma,RD）细胞和人喉癌（human laryngeal carcinoma,Hep-2）细胞分离自2011—2016年青岛地区儿童手足口病及部分疱疹性咽峡炎和流感样病例咽拭子标本中非EV-A71、非CV-A16毒株,半巢式反转录PCR扩增肠道病毒部分VP1序列,结合序列分析鉴定CV-A12毒株;对全部CV-A12分离株进行VP1基因全长序列扩增及基因序列测定,以MEGA7.0软件进行遗传进化及分子特征分析;收集CV-A12所致重症手足口病临床资料并分析其特征.结果 青岛市手足口病、疱疹性咽颊炎和儿童流感样病例中CV-A12分离率分别为0.3％（18/6798）、1.2％（2/169）和0.1％（1/676）.CV-A12感染所致手足口病在2013年及以前以轻症病例为主（84.6％,11/13）,2013年以后以伴有神经系统症状的住院重症病例为主（100％,5/5）.VP1区遗传进化分析显示,全球CV-A12分为A、B两个基因型,2011—2016年青岛地区毒株均属于B基因型且88.9％（16/18）位于B2亚型;2013年后致手足口病重症病例毒株均为B2亚型B2b分支毒株.结论 CV-A12是青岛儿童手足口病、疱疹性咽颊炎和流感样疾病的病原之一;B2亚型毒株为近年来青岛CV-A12主要流行毒株,其感染所致手足口病能导致神经系统损害.

青岛市2014年手足口病病原谱及柯萨奇病毒A10、A6型VP1区基因特征

目的阐明青岛地区2014年手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)病原谱及柯萨奇病毒A10、A6型青岛毒株的基因特征。方法用荧光RT-PCR法检测2014年青岛地区HFMD患者咽拭子标本总肠道病毒(EV)、肠道病毒71(enterovirus,EV-A71)型、柯萨奇病毒A16(coxsackievirus,A16,CV-A16)型、柯萨奇病毒A10(coxsackievirus,A 10,CV-A10)型和柯萨奇病毒A6(coxsackievirus,A6,CV-A6)型,半巢式反转录PCR扩增其他型肠道病毒VP1区部分基因序列,结合序列分析鉴定血清型。扩增CV-A10和CV-A6 VP1基因全长序列并测序列测定,以Mega 5.0软件进行遗传进化分析。结果2014年共检测HFMD标本1 727例,鉴定出肠道病毒11种,主要病原为EV-A71(38.0%,410/1 078)、CV-A16(28.8%,311/1 078)、CV-A10(14.1%,152/1 078)和CV-A6(3.2%,34/1 078)。CV-A10占HFMD病原构成在不同年龄段患儿间存在显著性差异,随年龄增高下降(χ^2=15.19,P=0.001),在住院病例病原构成中所占比例显著高于门诊病例(χ^2=49.1,P<0.001),且60.0%CV-A10感染的住院病例出现神经系统受损症状。VP1基因遗传进化分析显示,青岛地区2014年CV-A10毒株均属于C基因型,其中71.7%位于C5分支;CV-A6毒株均属于D基因型,其中83.3%位于D5分支。结论EV-A71、CV-A16、CV-A10和CV-A6是2014年青岛地区HFMD的主要病原。CV-A10在低龄儿童HFMD病原构成中占比例较高,易引起神经系统损害。C基因型的C5分支毒株是CV-A10主要流行毒株,D基因型的D5分支毒株是2014年青岛CV-A6主要流行毒株。

4株手足口病相关柯萨奇病毒A4型的全基因组特征

目的了解青岛地区流行的柯萨奇病毒A4型(CVA4)的全基因组特征。方法选取2013—2015年间青岛地区流行的4株CVA4病毒,通过一步法RT-PCR对毒株进行全基因组扩增,采用MEGA7.0软件进行序列比对及系统进化分析,采用similarity plots 3.5.1软件进行基因重组分析。结果进化分析显示:在全基因组、P1区、P2区及P3区系统进化树上:毒株HS312/QD/CHN/2013和HS605/QD/CHN/2014与国内早期分离株共处同一分支;毒株FY218/QD/CHN/2015与2013年江苏温州分离株CV-A4/P1033/2013/China一起在各基因进化树上形成一独立分支;毒株HS144/QD/CHN/2014在P1区进化树上与HS312/QD/CHN/2014、HS605/QD/CHN/2014及国内早期分离株共处同一分支,但在全基因组、P2区及P3区进化树上各形成单一分支。重组分析提示:毒株HS144/QD/CHN/2014与2013年大陆流行的CVA2型毒株CV-A2/P373/2013/China在2C区~3D区间(5081~7301)发生基因重组;毒株FY218/QD/CHN/2015与毒株CV-A4/P1033/2013/China同源,都与CVA2型分离株CV-A2/P373/2013/China在2A区~2B区间(3821~4161)发生基因重组。结论青岛地区流行的CVA4在全基因组层面有明显的遗传多样性。

青岛市埃可病毒6型相关重症手足口病及疱疹性咽峡炎临床表现及病毒VP1区遗传进化分析

目的了解青岛市埃可病毒6型(ECHO6)所致重症手足口病及疱疹性咽峡炎的临床特点及病毒基因特征。方法对2014年青岛市手足口病哨点1 727例手足口病及48例疱疹性咽峡炎患者的咽拭子标本进行肠道病毒检测,非EV-A71、非CV-A16咽拭子标本在RD及Hep-2细胞中进行毒株分离,半巢式反转录PCR扩增肠道病毒部分VP1序列,结合序列分析鉴定ECHO6毒株,对分离到的ECHO6毒株进行VP1编码区全长核苷酸序列测定,以Mega 7.0软件进行遗传进化及分子特征分析并分析相关病例的临床特征。结果共获得2株重症手足口病相关ECHO6毒株及1株疱疹性咽峡炎相关的ECHO6毒株VP1序列,2例手足口病重症病例均表现出高热、手、足、口腔部位皮疹和中枢神经系统受累症状。ECHO6青岛株VP1区核苷酸同源性为96.4%~97.6%,同属于D基因型D9亚型D9c分支,与2014年山东省无菌性脑膜炎病原中ECHO6毒株遗传关系密切。结论 ECHO6能引起中枢神经系统受累型重症手足口病,导致青岛市重症手足口病及疱疹性咽峡炎的ECHO6基因型属于D基因型D9亚型的D9c分支。

2013—2020年青岛市手足口病流行病学及病原学特征分析

目的 了解2013—2020年青岛市手足口病流行病学及病原学特征,为制定手足口病防控措施提供科学依据。方法 采用描述流行病学方法,对中国疾病预防控制信息系统中的2013—2020年青岛市手足口病数据进行分析。结果 2013—2020年青岛市共报告手足口病78 188例,年均报告发病率为107.02/10万。趋势性χ^(2)检验发现,手足口病发病率与发病年份存在线性趋势(Z=7.00,P=0.008<0.05),流行趋势呈现“单峰”模式。手足口病病例的男女性别比为1.50∶1,主要集中在0~4岁儿童,占81.56%,以散居儿童为主。2013—2020年共采集病例标本7 119份,检出阳性4 284份,阳性率为60.18%,其中,EV71型占25.86%,CA16型占24.58%,其他型占49.56%。结论 青岛市手足口病流行具有明显的时间、地区和人群特征,病原学中的优势毒株由EV71型转为其他型,CA16型存在一定的波动性,应进一步加强病原学监测。