柚皮苷对地塞米松诱导的小鼠MC3T3-E1细胞凋亡及线粒体凋亡途径的影响

目的探讨柚皮苷对地塞米松诱导下MC3T3-E1细胞增殖、凋亡的影响及可能的分子机制。方法体外培养小鼠MC3T3-E1细胞,实验分5组:空白对照组(NC)、地塞米松组(DEX)、1μmol/L柚皮苷+地塞米松组(1+DEX)、10μmol/L柚皮苷+地塞米松组(10+DEX)和50μmol/L柚皮苷+地塞米松组(50+DEX)。药物干预后,采用CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞技术检测各实验组细胞凋亡情况;q PCR法检测线粒体凋亡通路相关基因Apaf-1、Caspase-9 mRNA相对表达量;Western blot法检测细胞色素C(Cyt-C)及Cleaved-caspase-9蛋白表达。结果与NC组相比,地塞米松组细胞增殖受到抑制(P<0.05),而不同浓度的柚皮苷以剂量依赖方式促进细胞增殖(P<0.05)。流式细胞技术检测结果显示,DEX组细胞早期凋亡率增加(P<0.05),而同时加柚皮苷干预组细胞凋亡率与DEX组相比明显减少(P<0.05)。q PCR结果显示,DEX组Apaf-1、Caspase-9 mRNA表达升高(P<0.05),而同时加柚皮苷干预组Apaf-1、Caspase-9 mRNA表达下降。WB结果显示DEX组Cyt-C、Cleaved-Caspase-9表达量增高(P<0.05)。相反,同时加柚皮苷干预组Cyt-C及Cleaved-Caspase-9表达量减少(P<0.05)。结论柚皮苷可以抑制地塞米松诱导的小鼠MC3T3-E1细胞凋亡,其机制可能与下调线粒体凋亡途径中Cyt-C、Apaf-1凋亡酶激活因子的表达,抑制Caspase-9凋亡蛋白的激活有关。

科研型仪器平台共享服务评价框架要素与构建

为推动国家重大科研基础设施和大型科研仪器的开放共享,充分释放共享平台的服务潜能,提高设备使用效率,完善平台的服务评价内涵,本文从科研设备共享平台需求出发,研究科研型仪器共享平台设备和服务效益的评价框架构建,分析框架要素和进行构建初探和讨论。包括绩效量化指标、资源状态、设备信息公开化、满意度调研等关键因素和权重比例等。通过评价框架的构建,以提高平台服务质量,实现需求、服务和评价三者间的有效循环,更好地总结科研设备购置与管理的经验。从这些关键要素分析中,提取相关信息,明确平台特色和发展情况,挖掘深层发展目标和潜在服务能力,为今后加强科研设备的日常管理、提高科研设备的使用效益、未来发展策略提供依据。

共聚焦和超分辨率显微荧光图像的共定位分析浅谈

共定位分析是研究蛋白或分子相互作用的有效工具。荧光显微图像的共定位分析包括定性分析和定量分析两部分。严格而言,共定位分析是使用共定位系数去描述两个或以上的分子间变量关系。目前,许多研究工作者对荧光显微图像的共定位分析需求大。然而,对需要做共定位分析的样品要求、采图要求和分析方法等普遍存在疑问。在本文中,笔者结合多年成像类设备共享服务的经验,基于激光共聚焦和超分辨率荧光显微图像,详细阐述共定位定性和定量分析的方法,以供其他科研工作者参考和借鉴。

共享型医学科研贵重设备使用培训的微课制作——以《全封闭式组织脱水机》为例

为提高高校仪器设备管理的效率和水平,以《全封闭式组织脱水机》为例,设计和开发基于共享型医学科研贵重设备使用培训的微课,实现"移动+交互"式仪器操作使用微课培训教学,推动高校仪器设备的开放共享。

广东省部分运动员血尿酸水平分析

【目的】了解广东省部分运动员血尿酸（SUA）水平及高尿酸血症（HUA）发病率，为运动员健康指标监测和合理膳食结构提供依据。【方法】采用简单随机抽样法，在广东省体育训练中心简单随机抽样400名运动员（最终检测378人），其中分男性组251人，女性组127人；9～14岁少年组42人，15～25岁青年组336人；水上项目组122人，陆上项目组256人；以SUA和尿液pH的测定结果进行统计分析，计数资料应用X^2检验。【结果】男性组平均SUA水平为（7．45±1．27）mg／dL（普通男性正常值4～6mg／dL），女性组平均SUA水平为（5．86±0．95）mg／dL（普通女性正常值3～5mg／dL），两组运动员的平均值都高于普通正常值；男性组的高尿酸血症（HUA）发病率为55．37％，女性组HUA发病率为40．15％，两组有显著性差异（X^2=7．81，P〈0．01）；少年组高尿酸血症发病率为26．20％，青年分组高尿酸血症发病率为53．27％，两组有显著性差异（xz=10．95，P〈0．001）；水上项目组HUA发病率58．19％，陆上项目组HUA的发病率46．48％，两组有显著性差异（X^2=4．53，P〈0．05）。【结论】广东省运动员的HUA的发病率远高于国内外的平均水平，与性别、年龄及不同运动训练项目密切相关，提示我们要密切关注运动员的SUA监测，加强合理的饮食结构和生活方式指导，预防和减少HUA的发生，进而减少痛风的发生，消除运动伤病的隐患。

运用科研资源开展科普活动的机制研究——以中山大学热带病防治研究教育部重点实验室为例

以中山大学热带病防治研究教育部重点实验室为例,分析实验室通过健全科普管理体系、规范化和专业化科普资源及品牌化科普活动等机制,运用开放交流、社区教育和社会服务等方式,开展具有特色的科普活动,将科研成果以科普信息的方式传播给大众,提高公众的科学素质,增强热带病疾病防控的实效。为进一步完善科研实验室面向公众开放,开展科普活动的相关形式、制度和管理提供经验借鉴。

原花青素对细胞损伤抑制的研究

为了探究原花青素对细胞膜氧化受损的抑制作用以及浓度和抑制程度之间的关系。将兔血制成1%红细胞(RBC)悬液,制造H2O2氧化模型,再加入不同浓度的原花青素溶液,最后测定红细胞溶血量、膜的通透性、丙二醛(MDA)含量。随着原花青素浓度的增高,溶血百分比相应的增大。浓度为0.2 mg/L～0.4 mg/L的原花青素对脂质氧化抑制效果最明显。原花青素可以抑制细胞氧化损害,而且在一定范围内和原花青素的浓度呈正相关。

单细胞蛋白表达定量分析技术在造血干细胞异质性检测中的应用

目的利用单细胞蛋白表达定量分析技术建立研究造血干细胞(HSC)异质性的方法.方法将不表达绿色荧光蛋白(GFP)的小鼠HSC(HSC-GFP-)与表达绿色荧光蛋白的小鼠HSC(HSC-GFP+)按1∶1比例混合,采用单细胞蛋白表达定量分析技术:通过标准孔径芯片捕获HSC单细胞,在单细胞蛋白质分离模块(Milo系统)进行细胞裂解、蛋白电泳及紫外照射激活芯片内交联物质;芯片中的蛋白与相应抗体发生免疫反应,再与荧光标记的二抗结合;最后通过双荧光通道扫描模块采集荧光信号成像、运用Scout软件分析每个细胞中表达β微管蛋白(β-tubulin)和GFP的蛋白条带吸光度值,得到表达蛋白的细胞数及细胞中蛋白水平表达分布以分析细胞异质性.通过表达GFP及β-tubulin的细胞数计算转染GFP的细胞得率,与流式细胞术检测结果相比对验证.结果单细胞蛋白表达定量分析技术检测表达GFP的小鼠HSC比例为44.20%,流式细胞术检测结果为42.528%;细胞中GFP表达水平分布在(0.42~7.35)×10^(5)之间,表明存在细胞异质性.结论单细胞蛋白表达定量分析技术可用于HSC异质性的检测.

盐酸小檗碱通过PI3K/Akt信号通路促进小鼠前成骨细胞MC3T3-E1的分化

目的:研究盐酸小檗碱对小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1分化与矿化的调控作用及其机制。方法:MC3T3-E1细胞给予不同浓度(0、1、5、10和20 mg/L)的盐酸小檗碱刺激3 d,CCK-8法检测细胞活性。不同浓度的盐酸小檗碱分别干预3 d和7 d,检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性。进一步将实验随机分为4组:对照组、盐酸小檗碱组、盐酸小檗碱+LY249002(PI3K/Akt通路抑制剂)组及LY249002组。干预2 d后,采用real-time PCR检测成骨细胞分化相关因子ALP、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)及Runt相关转录因子2(Runx2)的mRNA表达情况,采用Western blot检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白p-Akt的表达水平。将MC3TC-E1细胞用矿化培养基诱导21 d,茜素红染色检测其矿化情况。结果:与对照组相比,不同浓度的盐酸小檗碱对细胞活性的影响没有明显差异;不同浓度的盐酸小檗碱处理MC3T3-E1细胞后ALP活性有不同程度升高。Real-time PCR结果表明,盐酸小檗碱(5 mg/L)促进ALP、OCN、OPN及Runx2的mRNA表达(P <0. 01),而LY294002能抑制这些分化相关因子的表达。Western blot检测结果表明,盐酸小檗碱(5 mg/L)促进p-Akt蛋白的表达(P <0. 01),其作用被LY249002抑制。茜素红染色发现盐酸小檗碱组矿化明显,但LY294002能抑制盐酸小檗碱的促进作用。结论:盐酸小檗碱可以促进小鼠前成骨细胞的分化与矿化,其机制可能与其激活PI3K/Akt信号通路有关。

柚皮苷对高糖作用下MC3T3-E1细胞活力和Akt通路相关因子表达的影响

目的探讨柚皮苷(NG)对高糖环境下MC3T3-E1细胞活力的影响及可能的分子机制。方法体外培养小鼠MC3T3-E1细胞,实验分5组:对照组(正常无血清培养基)、高糖组(含25 mmol/L葡萄糖)、0.1μmol/L+高糖组(0.1μmol/L NG+25 mmol/L葡萄糖)、1μmol/L+高糖组(1μmol/L NG+25 mmol/L葡萄糖)、10μmol/L+高糖组(10μmol/L NG+25 mmol/L葡萄糖)。药物干预后,采用CCK-8法检测细胞活力;实时荧光定量PCR(qPCR)法检测细胞成骨特异性转录因子(Runx2)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、蛋白激酶(Akt1)mRNA的表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞碱性磷酸酶(ALP)、Akt1、IGF-1蛋白的表达。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果CCK8检测结果显示,与对照组比较,高糖组细胞OD值(12 h:0.90±0.01比0.80±0.01,24 h:1.00±0.05比0.84±0.01,48 h:1.09±0.03比0.90±0.01)均降低,差异有统计学意义(P<0.01);与高糖组比较,0.1μmol/L+高糖组细胞OD值(24 h:0.84±0.01比0.93±0.05,48 h:0.90±0.01比0.99±0.01)、1μmol/L+高糖组和10μmol/L+高糖组OD值(12 h:0.80±0.01比0.92±0.01、1.01±0.32,24 h:0.84±0.01比1.01±0.04、1.16±0.03,48 h:0.90±0.01比1.12±0.02、1.20±0.02)均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,高糖组细胞Runx2、IGF-1、Akt1的mRNA的表达水平(24 h:1.00比0.34±0.02、1.00比0.34±0.01、1.00比0.15±0.02)、(48 h:1.00比0.72±0.03、1.00比1.09±0.07、1.00比0.38±0.04)降低,差异有统计学意义(P<0.01)。与高糖组比较,1μmol/L+高糖组和10μmol/L+高糖组细胞Runx2、IGF-1、Akt1的mRNA表达水平(24 h:0.34±0.02比0.62±0.09、0.64±0.05,0.34±0.01比0.77±0.03、1.02±0.07,0.15±0.02比0.24±0.08、0.4±0.09)、(48 h:0.72±0.03比1.27±0.02、1.37±0.02,1.09±0.07比2.44±0.19、2.73±0.04,0.38±0.04比0.86±0.06、1.43±0.03)均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,高糖组细胞ALP、Akt1、IGF-1蛋白表达水平(48 h:1.00比0.72±0.02、1.00比0.89±0.03、1.00比0.09±0.01)均降低,差异有统计学意义(P<0.05);与高糖组比较,0.1μmol/L+高糖组、1μmol/L+高糖组和10μmol/L+高糖组ALP、Akt1、IGF-1蛋白表达水平(48 h:0.72±0.02比1.92±0.02、2.30±0.30、3.09±0.10,0.89±0.03比1.50±0.03、1.43±0.04、1.40±0.13,0.09±0.01比1.75±0.01、2.30±0.31、2.07±0.07)均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论NG逆转高糖诱导的MC3T3-E1细胞活力减退;同时改善高糖的抑制作用,促进MC3T3-E1细胞IGF-1、AKt-1、Runx2 mRNA和IGF-1、AKt-1、ALP蛋白的表达。