青蒿琥酯通过诱导凋亡发挥抗THP-1细胞增殖作用

目的:了解青蒿琥酯(artesunate,ART)是否能抑制THP-1细胞的增殖,并探讨其相关的抗白血病的作用机制。方法:分别用5种浓度的青蒿琥酯处理THP-1细胞24、48和72 h,采用CCK-8法检测细胞的活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot方法检测STAT3、Caspase3和Caspase8蛋白表达水平的变化。结果:与对照组相比,ART能明显抑制THP-1细胞的增殖,其效应呈剂量依赖性(r=0.9829,P<0.05);流式细胞术实验结果表明,ART能显著增加THP-1细胞的凋亡,且ART处理THP-1细胞后STAT3蛋白表达显著下降(P<0.01),同时Caspase3及裂解的Caspase3和Caspase8表达均增加(P<0.01)。结论:青蒿琥酯能抑制THP-1细胞的生长,可能与下调STAT3蛋白的表达,并同时激活Capase3和Caspase8有关。

LNK基因在慢性髓系白血病中的变异

目的:比较慢性髓系白血病(CML)患者组与对照组的LNK基因突变及单核苷酸多态性(SNP),探讨LNK基因变异与CML发生的关系。方法:选取36例CML患者和46例健康对照者。提取骨髓和外周血DNA,用Q-PCR检测BCR/ABL1融合基因,用PCR扩增LNK基因外显子全长;扩增序列中包括了LNK基因内影响氨基酸表达的Rs3184504(C/T)和Rs78894077(A/C/G/T),以及对氨基酸表达无影响的Rs7973120(A/T)的3个SNP位点。测序分析LNK基因突变及单核苷酸多态性。结果:36例CML患者均有BCR/ABL1突变,对照组无突变;1例CML患者有LNK杂合子突变,位点为A300V,突变率2.8%,对照组无突变。Rs3184504:对照组C/T等位基因频率为50%/50%,CML组为94.4%/5.6%,CML组C等位基因明显高于对照组,其中CC基因型占94.4%(P<0.01);Rs78894077:对照组C/T等位基因为9.8%/90.2%,CML组16.7%/83.3%,差异无统计学意义(P>0.05),但CML组CC基因型高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);Rs7973120:对照组A/T等位基因频率为10.9%/89.1%,CML组为25%/75%,CML组A等位基因高于对照组(P<0.01)。结论:CML患者中有LNK突变,LNK单核苷酸多态性与CML的发生相关,CML患者多携带有LNK Rs3184504 C等位基因及Rs7973120 A等位基因。

LNK基因在原发性血小板增多症中的变异及临床意义

目的:探讨原发性血小板增多症(essential thrombocytosis,ET)中LNK基因的突变及单核苷酸多态性(SNP),并分析其与ET发病的关系。方法:用位点特异性PCR的方法检测JAK2V617F基因突变。用PCR扩增LNK基因外显子全长,扩增序列中包括LNK基因内影响氨基酸表达的Rs3184504(C/T)和Rs78894077(A/C/G/T)以及对氨基酸表达无影响的Rs7973120(A/T)3个SNP位点。测序分析LNK基因突变及单核苷酸多态性。结果:发现6例患者有LNK突变,包括4种类型,分别为A300V、R425C、V402L及R426Q。ET患者SNP Rs78894077Ser(丝氨酸)型T等位基因分布高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。ET患者SNP Rs3184504 Ser(丝氨酸)型T等位基因频率高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在ET患者中存在LNK基因突变,携带LNK SNP Rs78894077 Ser及Rs3184504 Ser位点T等位基因可增加患ET的风险。

LNK基因在急性白血病患者中的表达及临床意义

目的:探讨LNK基因在急性白血病患者中的表达及其与临床特征的相关性。方法:采用实时荧光定量PCR检测80例AL(ALL 42例,AM L 38例)患者骨髓中LNK m RNA的表达水平,分析其表达水平与临床特征的相关性,应用Western blot检测患者的LNK蛋白表达量。以正常的志愿者(16例)骨髓作为对照组。结果:ALL和AM L组的LNK水平均明显高于正常对照组(P=0.007,P=0.021),ALL组与AM L组之间LNK水平无统计学差异;ALL和AML组中的LNK表达水平均与危险程度呈正相关(P=0.000,P=0.004,r=0.5,r=0.386),且ALL和AML组中高危组的LNK水平均明显高于对照组(P=0.035,P=0.032),AML和ALL组的中危组(P=0.239,P=0.609)及标危组(P=0.974,P=1)LNK水平均高于对照组,但无统计学意义,各组之间危险程度无统计学差异。急性白血病患者LNK蛋白表达量较对照组增加。结论:急性白血病患者LNK基因表达高于正常人,与患者危险度呈正相关。

骨髓增殖性肿瘤中STAT3基因的变异及其意义

目的:检测骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者STAT3基因的突变和单核苷酸多态性,分析其与骨髓增殖性肿瘤各亚型之间的关系。方法:选取147例MPN患者,包括真性红细胞增多症(PV)28例,原发性血小板增多症(ET)46例,原发性骨髓纤维化(PMF)10例及慢性髓系白血病(CML)63例。以88名健康人为正常对照。提取所有病例骨髓或外周血的DNA,采用位点特异性PCR检测JAK2V617F基因突变;用PCR扩增STAT3基因23个外显子,测序分析STAT3基因的突变及Rs2293152的单核苷酸多态性。结果:8例CML患者出现STAT3基因突变,且均为新发突变,突变率12.7%,其中3例为错义突变(S629T),5例为同义突变(Q469Q 3例、G618G 2例),其中1例同时有S629T及G618G 2个位点的突变;正常对照组无突变。Rs2293152检测显示,CML组G等位基因均明显高于正常对照、PV、ET、PMF组(P <0.01),提示携带G等位基因的患者可能更容易发生CML;PV、ET及PMF组C等位基因均明显高于CML组(P <0.05),提示携带C等位基因的患者可能更容易发生PV、ET及PMF;JAK2V617F阴性组G等位基因较正常对照组及JAK2V617F阳性组明显降低(P<0.01),提示携带Rs2293152 G等位基因可能是JAK2V617F突变的保护性因子。结论:在MPN患者中,STAT3基因不稳定,容易发生突变,其Rs2293152位点上不同的等位基因与骨髓增殖性肿瘤中的不同亚型有关,与JAK2V617F阴性的MPN有关。

LNK基因沉默和过表达对THP-1细胞STAT3表达影响的研究

目的:探讨LNK基因沉默和过表达对人单核细胞白血病细胞(THP-1)STAT3基因表达的影响。方法:培养THP-1细胞;以慢病毒为载体介导SiRNA、LNK(SH2B3)稳定沉默及过表达LNK基因;转染72h后于倒置荧光显微镜下观察细胞的GFP表达量;应用流式细胞术检测慢病毒感染效率;RT-PCR验证LNK沉默及过表达效应,检测STAT3 mRNA表达量;Western blot检测LNK、STAT3蛋白水平。结果:慢病毒感染72 h THP-1细胞GFP表达量达85%以上,细胞感染效率在99%以上。LNK沉默组LNK及STAT3 mRNA表达量明显低于对照组,而LNK过表达组的LNK和STAT3 mRNA表达水平明显高于对照组(P<0.05)。LNK沉默组LNK、STAT3蛋白水平明显低于对照组,而在LNK过表达组明显高于对照组(P<0.05)。结论:成功建立了LNK基因沉默及过表达的THP-1细胞株。沉默LNK基因导致STAT3表达下调;过表达LNK基因,使STAT3表达上调;此结果提示LNK可能参与了STAT3的调控。

高速公路单向双车道车辆群行车风险度量研究

为了探讨局部车辆流的安全性及其对道路安全性的影响,从“车辆群”的角度研究了高速公路行车风险度量。提出了高速公路单向双车道“车辆群”范围的划分方法;分析了“车辆群”内可能存在的侧向碰撞、侧面刮擦、追尾碰撞等冲突类型,针对各冲突类型选取了“车辆群”风险度量的碰撞时间TTC和后侵入时间PET这2个指标,提出了双车道“车辆群”行车风险度量模型,并用VISSIM对模型进行了仿真分析。结果表明:由于车辆换道的影响,双车道“车辆群”并不仅仅是两个单车道相邻车辆的对应合并;对道路上的车辆流进行“车辆群”划分后再评估车辆的行车风险,可以缩小道路上潜在危险区域的排查范围,提高高速公路行车风险识别效率;出现冲突风险警告的“车辆群”内车辆速度的偏差程度远远大于其他的“车辆群”,从而验证了模型的有效性。

考虑机非混合的交叉口信号配时优化设计

目前较多交通管控措施过分偏向机动车,使得非机动车的路权被严重挤压,进一步加剧路段及交叉口运行秩序混乱等问题.因此,本文主要考虑机动车与非机动车的交互行为,对交叉口信号配时优化设计进行了研究.通过对具有典型机非混合特点的广州市环镇西路-江石东路交叉口开展实地调查,并基于Webster方法对该交叉口进行信号配时优化设计,给出了优化后的设计方案;最后,运用Vissim交通仿真软件对优化前后的方案进行仿真对比分析.结果表明,优化方案可以使该交叉口的平均排队长度、车辆延误、排放物等指标均有不同程度的下降,证明了该方案能有效缓解该交叉口的拥堵程度.