黄芪甲苷对人脐血间充质干细胞增殖与成管分化的影响

目的探讨黄芪甲苷(AS-ⅣV)对人脐血间充质干细胞(hUCBMSCs)体外增殖和成管分化的影响,为进一步研究AS-Ⅳ作用于间充质干细胞介导的血管新生奠定基础。方法从足月健康新生儿脐带血中提取并传代培养得到hUCBMSCs,分别进行成骨、成软骨和成脂诱导分化鉴定,同时对hUCBMSCs表面抗原CD44,CD73,CD105进行流式细胞仪鉴定。将鉴定成功的hUCBMSCs分别在不同浓度梯度的AS-Ⅳ(0.50、100、200.300.400 mg/L)干预下培养,确定AS-Ⅳ促hUCBMSCs增殖的最佳浓度。另将hUCBMSCs随机分为实验组和对照组,实验组用最佳浓度的AS-Ⅳ干预,对照组用等体积的PBS液处理。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测AS-IV对hUCBMSCs增殖的影响,另通过Matrigel体外成管实验检测AS-Ⅳ对hUCBMSCs成管分化的影响,并用免疫荧光检测hUCBMSCs向内皮细胞分化后CD31、血管性血友病因子(vWF)的表达情况。结果光镜下hUCBMSCs细胞边缘清晰,排列整齐,呈典型的长梭状结构。流式细胞仪证实hUCBMSCs细胞表面有间充质干细胞的表面标志物。AS-Ⅳ促进hUCBMSCs增殖的最佳浓度为300 mg/L。对照组和实验组的OD值分别为(0.51±0.01)和(0.98±O.05),差异具有统计学意义(t=15.96,P<0.05),显示实验组增殖能力增强。Matrigel成管实验显示.与对照组比较,实验组体外成管密度更大,体外形成管网状结构的长度更长,差异具有统计学意义[(629.80±52.94)mm vs(110.36±13.19)mm,P<0.05]。与对照组相比,实验组AS-Ⅳ诱导hUCBMSCs成管分化后CD31和vWF的表达均增多,差异有统计学意义(t=13.64,13.18,P<0.05)。结论AS-Ⅳ对人脐血间充质干细胞无毒性,且能改善其增殖功能,并诱导hUCBMSCs向内皮细胞成管分化。

黄芪甲苷对高糖诱导损伤人间充质干细胞分泌与创伤修复相关生长因子的影响

目的:探讨黄芪甲苷(AS-IV)对高糖诱导损伤的人间充质干细胞(MSCs)分泌与创伤修复相关生长因子的影响。方法:无菌条件下取正常剖宫产胎盘中的脐带血,经密度梯度离心分离出人脐带血间充质干细胞(hUCBMSCs),分别进行成骨、成软骨和成脂诱导分化鉴定。将鉴定成功的hUCBMSCs用含30 mmol/L葡萄糖的DMEM/F12培养基培养120 h后随机分为实验组和模型组,实验组用300 mg/L的AS-IV进行干预,模型组用等体积的磷酸盐缓冲液(PBS)处理;同时设置正常组,用等体积PBS干预。各组干预48 h后收集细胞上清液,通过酶联免疫吸附实验检测表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、神经生长因子(NGF)、血小板源性生长因子(PDGF)、干细胞因子(SCF)的吸光度。结果:与正常组相比,模型组中高糖受损hUCBMSCs所分泌的EGF、FGF、PDGF、SCF明显降低(P<0.05);与模型组相比,实验组中高糖受损hUCBMSCs所分泌的EGF、FGF、IGF-1、NGF、PDGF、SCF含量明显升高(P<0.05)。结论:黄芪甲苷可促进高糖诱导损伤人MSCs分泌与创伤修复相关生长因子,具有较高临床应用价值。