云南省部分规模猪场猪瘟抗体水平调查

为评估云南省规模猪场的猪瘟免疫状况,用猪瘟ELISA抗体检测试剂盒,对云南省不同地区38个规模化猪场的种公猪、种母猪、后备猪和商品猪,共2663份血清进行猪瘟抗体检测。结果显示:38家猪场平均猪瘟抗体合格率为78.82%,其中滇东、滇中、滇西南、滇西北、滇西、滇南、滇东北地区抗体合格率分别为82.2%、72.4%、78.87%、81.58%、83.61%、84.72%、64.63%;种公猪、种母猪、后备猪和商品猪的抗体合格率分别为89.79%、92.58%、85.38%、65.12%。结果表明,本次调查的38家猪场的猪瘟免疫保护水平较高,整体上达到了国家免疫方案中要求的不低于70%的标准,但存在一定的地区差异和猪群差异,其中滇东北地区以及商品猪群免疫保护水平较低,存在发生疫情风险,需要加强免疫和检测。本调查为云南省规模化猪场的猪病防控策略制定提供了参考。

口蹄疫检测方法研究进展

为了针对不同实际检测情况选择出合适的口蹄疫检测方法,本文从抗原和抗体检测两方面,并结合OIE手册和中国国家标准(GB/T 18935-2018),总结了13种检测方法的优缺点。不同检测方法在灵敏度、准确度、稳定性、专一性、经济性、时效性以及操作难易度等方面各有不同。

流行性出血热主要检测方法比较

流行性出血热(epizootic haemorrhagic disease,EHD)被世界动物卫生组织(OIE)列为须通报的跨境传播动物疫病。目前,世界范围该病病原已发现9种血清型,其中有5种在我国流行,并表现出高度多样性。为了在实践中选择合适的检测方法,从抗原及抗体检测两方面,总结了各种检测方法的优缺点。经比较,各种检测方法在经济性、时效性、灵敏度、准确度、操作难易度以及对操作人员和仪器环境的要求各有不同。因此,在实际检测时应根据具体的检测条件和检测要求选择最合适的检测方法。未来还将不断尝试应用新技术,从而进一步丰富EHD的检测方法。

COVID-19病毒N基因在昆虫细胞内的表达

为获得具有和天然蛋白质类似功能与活性的COVID-19核衣壳蛋白并应用于实际检测中,首先根据Bac-to-bac昆虫表达系统和人工合成的COVID-19核衣壳蛋白(N蛋白)序列,将pFastBacHTB载体上的酶切位点BamHⅠ和XbaⅠ分别加入上下游引物,利用PCR技术对N基因进行扩增,先后连接T-Vector pMD19(simple)载体与pFastBacHTB载体,并获得重组质粒pMD19-T(simple)-COV19-N和pFastBacHTB-COV19-N,最终在DH10Bac细胞中构建重组杆粒DH10Bac-pFastBacHTB-COV19-N并使其在昆虫细胞Sf9内进行表达,获得重组蛋白后进行SDS-PAGE和WB分析。通过PCR方法成功扩增N基因,构建的重组质粒pMD19-T(simple)-COV19-N经PCR和双酶切鉴定均证明正确,在DH10Bac细胞内构建的重组杆粒DH10Bac-pFastBacHTB-COV19-N通过PCR鉴定得到预期2条带,大小分别为2430,3690 bp,证明成功得到重组杆粒,用该重组杆粒转染Sf9昆虫细胞,同时设立重组GFP蛋白对照组,转染120 h后分别收集重组N蛋白与重组GFP蛋白并制样;分别进行SDS-PAGE和WB分析,使用HRP-His标记抗体验证转染成功且重组N蛋白与重组GFP蛋白均在Sf9细胞内顺利表达,试验结果与预期相符,重组N蛋白条带大小约为46 ku。该试验成功构建了呼吸道冠状病毒N基因真核表达载体,并在昆虫细胞内成功表达,为建立ELISA检测方法等相关研究提供试验基础。

鸡蛋新鲜度指标与贮藏天数相关性研究

目的分析鸡蛋新鲜度指标与贮藏天数的相关性,确定新鲜度指标数值显著变化的时间,建立新鲜度与贮藏时间相关性模型。方法2 d为一个时间点,设立12个实验组,每组5枚鸡蛋,按照标准中鸡蛋新鲜度评定指标重复3次测定鸡蛋相对密度、气室高度、哈夫单位、蛋黄指数、pH值、失重率。根据Pearson相关系数评价贮藏天数与鸡蛋新鲜度各指标之间的相关程度,Duncan法评价贮藏天数与鸡蛋新鲜度各指标之间的差异显著程度。结果鸡蛋新鲜度各指标与贮藏天数之间显著相关(P<0.05),各新鲜度指标数值出现显著变化的时间各不相同,各天数之间的鸡蛋失重量、失重率差异显著(P<0.05)。结论本研究所建立的鸡蛋新鲜度与贮藏时间的相关性模型,可作为鸡蛋新鲜度评价模型。

猫传染性腹膜炎病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为快速、灵敏、准确检测猫传染性腹膜炎病毒(feline infectious peritonitis virus,FIPV),以FIPV N基因为靶序列设计合成特异性引物及TaqMan探针,建立了一种FIPV实时荧光定量RT-PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行了试验。结果表明:该方法灵敏度高,最低检测限为3.4 copies/μL;特异性强,与狂犬病毒、猫疱疹病毒、猫杯状病毒、猫细小病毒、犬流感病毒、犬瘟热病毒等均无交叉反应;重复性好,批内变异系数为0.99%~4.13%,批间变异系数为1.29%~4.64%。以上结果说明,本试验建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法特异、敏感、重复性好,适用于FIPV的快速检测。