液-质联用法测定大鼠血浆中异烟肼及其代谢产物乙酰异烟肼的浓度

目的:建立应用LC-MS/MS测定大鼠血浆中异烟肼及其体内代谢物乙酰异烟肼浓度的方法,并将其应用于异烟肼及乙酰异烟肼在大鼠体内过程的研究。方法:血浆样品采用甲醇沉淀蛋白进行提取,以ESI电离源在正离子模式下检测,用Waters Cortecs C_(18)(4.6 mm×100 mm,2.7μm)色谱柱,甲醇-水溶液为流动相等度洗脱,流速为0.3 mL·min^(-1)。结果:异烟肼及乙酰异烟肼在大鼠血浆中的线性范围及定量限均符合测定要求,日内、日间精密度及基质效应均<15%。结论:本方法快速、灵敏、专属性强且重现性好,可用于大鼠血浆中异烟肼及乙酰异烟肼药动学研究。

N-乙酰基转移酶活性测定方法综述

N-乙酰基转移酶(N-acetyltransferase,NAT)是人体最为重要的Ⅱ相药物代谢酶,在体内药物代谢和毒物解毒方面具有重要作用。NAT的活性存在明显的种族和个体差异,其活性强弱可直接影响药物疗效和毒性反应。NAT活性测定可用于评估人体经乙酰化代谢药物的体内处置和代谢程度。通过查阅文献和相关资料,本文系统归纳了NAT的活性测定方法并对特点和优势进行了总结,可为NAT活性评估提供方法学参考,为基于NAT活性的临床个体化用药提供依据。

基于HepaRG活细胞的N-乙酰基转移酶1活性测定方法的建立与评价

目的建立基于人类肝癌HepaRG活细胞的N-乙酰基转移酶1(NAT1)活性测定方法,并对其测定结果进行评价。方法 HepaRG细胞用含10%牛血清和青、链霉素培养液进行培养。用免疫印迹技术考察培养24,48和72 h的HepaRG细胞中NAT1表达情况;用噻唑蓝实验测定NAT1底物4-氨基水杨酸(4-ASA)孵育24和48 h对细胞活力的影响,分别用液-质联用技术及免疫印迹技术考察不同浓度4-ASA对HepaRG细胞中NAT1活性及蛋白表达的影响,比较基于HepaRG活细胞的NAT1活性测定方法与传统组织/细胞裂解法对NAT1活性测定结果的影响。结果与培养24 h的HepaRG细胞相比(0. 71±4. 00×10^(-3)),培养48和72 h的HepaRG细胞中NAT1的表达量显著增加,分别为(0. 80±7. 00×10^(-3))和(1. 04±0. 04),差异均有统计学意义(均P <0. 05)。与对照组相比,浓度为5～100μmol·L^(-1)的4-ASA孵育HepaRG细胞24和48 h,对其活力无明显影响(均P> 0. 05); 25～100μmol·L^(-1)的4-ASA孵育HepaRG细胞8 h,对NAT1蛋白表达无明显影响(均P> 0. 05),且50～75μmol·L^(-1)的4-ASA孵育HepaRG细胞,培养液中4-ASA代谢物的生成量与底物浓度成正比。NAT1活性测定结果显示,HepaRG活细胞法测得的结果略低于传统的组织/细胞裂解法所测得的结果(P <0. 05或P <0. 01),但两者的酶促反应趋势比较相似。结论以4-ASA为反应底物建立的基于HepaRG活细胞的NAT1活性测定方法具有操作简单、结果稳定、可动态检测等优势,有望用于NAT1活性的动态测定及NAT1特异性抑制的高通量筛选。