炭疽疫苗A16R诱导小鼠的黏膜与系统免疫应答

目的 探索炭疽减毒活疫苗A16R诱导黏膜与系统免疫的规律。方法 将6～8周龄的BALB/c小鼠随机分为3组,每组5只,将炭疽疫苗A16R以5×10~7 cfu(相当于人用1/20剂量)和2×10~8 cfu(相当于人用1/5剂量)经皮下接种,每周采集尾血,采用ELISA间接法检测血清中特异性抗PA的IgG抗体;在免疫8周后,活杀小鼠,分离NALT、鼻通道、脾、小肠Peyer结及腹股沟淋巴细胞,采用流式细胞术检测其淋巴细胞表型的变化;并收集肺灌洗液,采用ELISA法检测特异性抗PA的sIgA抗体。结果 1/5剂量组能诱导较高、较快血清IgG的增加,免疫8周后,血清抗体效价仍然持续在高水平,但1/5剂量组肺灌洗液中仅能检测到微弱的sIgA抗体,而1/20剂量组基本检测不到;NALT、NP、PP和腹股沟淋巴结中CD_3^+、CD_4^+、CD_8^+和CD45R^+的细胞差异无显著意义,但是脾细胞中CD_3^+细胞构成比小于对照组,CD45R^+细胞构成比高于对照组,T/B比值低于对照组;1/20剂量与1/5剂量组差异无显著意义。其他部位的淋巴组织的细胞表型无显著变化。结论 炭疽疫苗A16R主要诱导系统免疫应答,而不能诱导有效的呼吸道和消化道黏膜免疫。

钩端螺旋体DNA疫苗pcD-flaB的构建及其免疫机制的初步研究

目的 :观察钩端螺旋体 DNA疫苗的保护效果 ,并探讨该疫苗的免疫机制。方法 :应用定向克隆的方法构建 DNA疫苗 pc D- fla B,肌肉途径免疫豚鼠 ,观察豚鼠攻击感染钩体后的保护率 ,以 EL ISA法检测特异性抗体 Ig G水平 ,并观察疫苗对豚鼠腹腔巨噬细胞分泌的 TNF活性的影响。结果 :该疫苗对同型钩体的保护率为 10 0 % ,特异性抗体水平在疫苗注射第 6周达到高峰 ,TNF的活性明显增高。 结论 :DNA疫苗 pc D- fla B对同型钩体感染有较强的保护作用 ;能够有效地诱导机体的体液免疫应答 ,并增强巨噬细胞所产生的 TNF的活性。

奶粉中锌、铁、钙的火焰原子吸收测定法

目的建立奶粉中的锌（Zn）、铁（Fe）、钙（Ca）样品的前处理和火焰原子吸收测定方法。方法奶粉中的Zn、Fe、Ca经3种样品前处理方法处理：湿式消解法、干法灰化法和微波消解法后，用火焰原子吸收测定。结果选择了最佳测定条件，定量测出了Zn、Fe、Ca的含量。3种方法的相对标准差RSD均在0．02％-2．00％，加标回收率在93．7％-104．26％。结论3种样品前处理方法的灵敏度、精密度都较高，准确率好，可使用于奶粉中Zn、Fe、Ca的分析测定。

钩端螺旋体膜表面蛋白LipL41基因的克隆、序列分析及表达

目的：进一步分析钩端螺旋体LipL－41的免疫原性。方法：通过PCR的方法，以我国特有的钩端螺旋体流感伤寒群临海型lin6株（56609）的 DNA为模板，扩增目的基因 LipL41，克隆至 PcDNA3载体上，以自动测序仪测序后进行序列分析，然后克隆至原核表达载体pGEX－5T进行原核表达，Western印迹分析其免疫原性。珐票：获得长 1068 hp的片段，DNA序列分析表明该菌株的LipL41基因与文献报道具有很高的同源性（95．0％～99．4％），在大肠杆菌中获得了表达，并与抗钩端螺旋体血清反应。结论：该抗原为致病性钩端螺旋体所具有的保守性抗原成分，可能在钩端螺旋体病的诊断和预防中发挥作用。

钩端螺旋体鞭毛蛋白B(FlaB)基因flaB在大肠杆菌内的表达

目的 在大肠杆菌中高效表达钩端螺旋体内鞭毛蛋白 (FlaB)用于钩体病的诊断和预防。方法 将目的基因flaB定向克隆至原核表达载体 pGEX - 5T ,构建重组融合表达质粒 pGF ;Western -blot鉴定其特异性 ,ELISA法判定其用于钩体病诊断的可行性。结果 GST -FlaB主要以包涵体形式表达 ,表达量约占菌体总蛋白的 4 0 % ;Western -blot结果显示该蛋白与FlaB抗血清能呈现明显的单一条带 ;包涵体经TritonX - 10 0及尿素纯化后 ,纯度可达 90 % ,并且能溶于包被缓冲液中 ;ELISA检测显示纯化后的GST -FlaB具有较好的特异性。结论 钩端螺旋体FlaB可以高效表达并可能用于ELISA检测及钩体病的预防。

水中砷含量的原子荧光法与快速试剂盒测定法比较

目的比较快速试剂盒法（速测法）和原子荧光法（HG—AFS法）测定地方性砷中毒病区饮水中砷含量的可靠性和应用价值。方法用速测法和HG—AFS法测定水样796份，对两种方法检测结果进行比较。结果两种方法测得的结果总体差异不显著，但速测法结果在0．01～0．10mg／L之间与HG—AFS法结果差异显著。结论HG—AFS法稳定可靠，速测法操作简单，可以在现场应用。用速测法初步筛选，用HG—AFS法对速测法结果为0．01mg／L以上的样品定量分析，即可减少工作量，又能保证分析结果的可靠性，完全能满足地方性砷中毒工作的需求。

锂动力电池内阻影响因素的实验研究

锂动力电池内阻是衡量电动汽车用电池性能的一个重要参数。本文中研究了不同环境温度、放电倍率和放电深度下的电池内阻随循环次数而变化的规律。结果表明,电池内阻与循环次数之间呈幂指数关系。电池内阻变化率与环境温度之间近似于二次函数关系,当环境温度为20℃时,电池内阻及其随循环次数的变化率均最小;电池内阻变化率随放电倍率的增大而增大,当放电倍率为1C时,电池内阻变化率基本上不随循环次数而变化,而当放电倍率为1.5C和2C时,电池内阻变化率随循环次数增加而明显增大;放电深度为25%和50%时,电池内阻变化率随循环次数的变化曲线相近,当放电深度达到100%时,电池内阻变化率显著增大。单次循环放电中,放电深度为0~80%时,电池内阻随放电深度的变化较小,当放电深度为80%~100%时,电池内阻随放电深度的增加而急剧增加。

不同工况下锂电池热特性影响因素实验研究

针对电动汽车在日常运行过程中由于加速、爬坡、路面状况不良等原因导致电池模块内单体电池电压、电流分布不均匀的现象,利用高精密电池测试仪与恒温水浴联用的方法,研究LiCo_(1/3)Mn_(1/3)Ni_(1/3)O_2三元正极材料锂电池在不同环境温度、荷电状态、放电倍率以及循环次数下电池内阻的变化规律以及不同环境温度、荷电状态下温熵系数的变化规律。实验结果表明,不同的工作状态对单体电池的内阻、熵变的影响效果不同,因此,有必要对电池模块内电压、电流的分布状况进行实时监测,并添加散热系统。

甲型流感病毒H1N1 HA蛋白在果蝇S2细胞中的表达及免疫原性研究

目的在果蝇S2细胞表达甲型流感H1N1HA并分析其免疫原性。方法根据GenBank发表的甲型流感病毒(H1N1)HA基因序列,经过密码子优化,全基因合成编码HA的基因,并于其N端引入特定的空间折叠序列,定向连接至表达载体pMT/Bip/V5-His A,构建重组表达载体pMT-HA。酶切鉴定正确后,用脂质体转染法与辅助质粒pCoHygro共转染果蝇S2细胞,潮霉素加压筛选稳定细胞系,在无血清培养基中以硫酸铜溶液诱导表达,SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定,经镍柱纯化后免疫小鼠,ELISA检测其诱导的特异性抗体水平。结果获得了稳定表达HA的S2细胞株,目的蛋白以分泌形式表达于上清,并形成三聚体,可以被H1N1HA抗体识别;免疫小鼠后可诱导机体产生抗HA特异性抗体。结论获得了纯化的三聚体形式表达的HA蛋白,并具有较好的免疫原性,具有很好的疫苗应用前景。

人 H7N9禽流感病毒与 H1 N1流感病毒感染小鼠病理学损伤的比较

目的比较分析H7N9病毒与H1N1病毒感染小鼠病理学损伤特点,初步探讨两种病毒感染致小鼠急性肺损伤的致病机制。方法 H7N9病毒与H1N1病毒分别感染小鼠,观察不同病毒感染后小鼠生存率,并于不同时间点取心、肝、脾、肺、肾、脑、肠等组织,伊红-苏木素染色并进行组织病理学分析,免疫组化检测病毒抗原分布及中性粒细胞浸润。综合分析肺组织病理损伤与病毒复制、宿主免疫反应之间的关系。结果 H7N9病毒感染小鼠肺及脾脏损伤较轻,存活率较高。H1N1病毒感染的小鼠肺及脾脏损伤较重,感染后9 d全部死亡;两种病毒抗原主要分布于支气管上皮细胞、少量间质细胞和肺泡上皮细胞,病毒复制水平无明显差异。但H1N1病毒感染后肺及脾脏中均有大量中性粒细胞浸润,小鼠机体炎症反应明显强于H7N9病毒感染后小鼠炎症反应。结论 H7N9病毒与H1N1病毒感染后小鼠病理学损伤特点及程度均不同,病毒复制是小鼠肺损伤的诱发因素但并非决定因素,宿主针对病毒感染产生的免疫反应程度与急性肺损伤密切相关。

BALB／c小鼠多疫苗接种的安全性和有效性研究

[目的]研究小鼠多疫苗联合接种的安全性和有效性。[方法]研究要求6种(炭疽、鼠疫、出血热、霍乱、痢疾、钩体疫苗)疫苗进行联合接种,根据6种疫苗的联合接种方式、疫苗接种间隔和接种的先后顺序,设计3种疫苗快速接种方案(2～3w完成接种)。对研究对象连续观测了119d,以体重、免疫反应、生化指标及自发活动等指标对疫苗联合接种的安全性和有效性进行评价。[结果]研究过程中实验动物在疫苗联合接种中副反应发生比较明显。在某些时间点体重、白细胞计数、淋巴细胞百分比、AST、ALT和肌酐有变化。6种疫苗联合接种后,小鼠能够对各疫苗产生免疫反应。但是,不同方案疫苗免疫反应不同。其中以出血热疫苗的免疫反应受方案的影响更加明显。[结论]出血热、霍乱、痢疾、钩体疫苗等疫苗在采用恰当的接种顺序和接种间隔的情况下可以联合使用,但是可能存在一定的风险,尤其在此基础上加入炭疽和鼠疫疫苗。

许昌市2005年疾病预防控制机构实验室食品理化比对实验结果与分析

目的为了考查许昌市(县、区)疾病预防控制(下简称疾控)机构实验室食品理化检验工作,对2005年许昌市8家疾控机构实验室进行食品理化实验比对。方法依据国家标准方法对铜和铁2个标准样品分别进行比对实验,采用分析系数对实验结果进行统计分析和分析质量评价。结果铜、铁检验结果均满意的实验室6个,铜单项结果满意的实验室7个,铁单项结果满意的实验室6个。结论通过比对实验,基本了解了许昌市疾控机构食品理化实验室检测技能的真实水平,同时起到了督促食品理化检验实验室不断提高自身检测工作质量和水平的作用。

人源靶向补体抑制物CR2-CD59在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定表达

目的构建人源靶向补体抑制物CR2-CD59,并筛选中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)高效表达细胞株。方法运用FuGENE6转染试剂,将含有人CR2-CD59的重组PEE14.1质粒转入CHO细胞,蛋氨酸亚氨基代砜(MSX)筛选出阳性克隆,并利用无血清培养基对CHO细胞表达株进行培养获得重组蛋白,以ELISA、SDS-PAGE和Western blot对表达蛋白进行鉴定。结果成功构建PEE14.1-CR2-CD59重组质粒,获得CHO细胞稳定表达株。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白CR2-CD59的相对分子质量同预期结果一致。ELISA和Western blot鉴定重组蛋白CR2-CD59可与CR2、CD59多克隆抗体特异性结合。且与含血清培养基相比,无血清培养基能明显提高CHO细胞的蛋白表达量(P<0.05)。结论在CHO细胞中成功表达人源靶向补体抑制物CR2-CD59。

具备中和中东呼吸综合征冠状病毒活性的单克隆抗体的制备

目的制备并鉴定对中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)具有中和活性的单克隆抗体,为进一步开展MERS-CoV感染与免疫保护机制研究,以及发展诊断与治疗手段奠定基础。方法 MERS-CoV S蛋白受体结合区与人IgG Fc片段融合表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫后小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过ELISA筛选出阳性克隆,随后通过多次亚克隆筛选出稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,制备单抗腹水并进行抗体效价测定及亚类鉴定;通过MERS-CoV假病毒及活病毒中和试验筛选出中和单抗。结果获得了10株能够稳定分泌抗原特异性单抗的杂交瘤细胞株。制备的腹水单抗亚类均为IgG1;其中7株单抗抗体ELISA效价达到10 000以上,并有1株单抗对MERS-CoV具有良好的中和活性。结论本研究获得了1株对MERSCoV具有良好中和活性的单克隆抗体。

SARS冠状病毒多聚酶表位区的原核表达及应用

目的原核表达SARS冠状病毒非结构蛋白RNA多聚酶表位区,了解其在SARS病毒感染诊断及作为病毒复制指标的意义。方法通过PCR扩增获得RNA多聚酶表位区基因,与原核表达载体Pet32a+连接,转化E.coliBL-21表达获得重组融合蛋白。经切胶透析纯化后,应用ELISA检测SARS患者及动物模型血清标本的IgG抗体。结果获得原核表达的RNA多聚酶表位区。ELISA检测正常人血清均阴性,SARS患者血清阳性率为95%;检测SARS病毒感染实验动物血清阳性率100%,灭活纯化病毒接种恒河猴均为阴性。结论RNA多聚酶表位区具有很好的抗原性,可用于感染诊断的检测及作为病毒复制性指标。

离子交换纯水器制备纯水方法的改进

目的改进离子交换纯水器的再生方法，提高纯水质量。方法对离子交换器的阴离子交换树脂（简称阴树脂）依次进行酸洗、碱洗。结果与原再生方法比较，改进再生法1周期可得比电阻（5．0×10^6-≥8．0×10^6）Ω·cm去离子水450L，而原再生法1周期可得比电阻（0．25×10^6-8．0×10^6）Ω·cm离子水约150L。由于阴树脂得以彻底清洗，水的纯度和产量都有很大提高。结论对离子交换纯水器的阴树脂依次进行酸洗-碱洗步骤，方法简便，可有效提高纯水质量。

用人MHC转基因小鼠模型鉴定高致病禽流感病毒核蛋白CTL表位

目的:筛选高致病禽流感病毒核蛋白(NP)中可用于高致病禽流感病毒感染检测或疫苗设计的CTL表位,为评价疫苗接种效果和开发新型疫苗奠定基础。方法:根据NCBI公布的NP的核苷酸序列设计特异性引物,以2006年深圳株高致病禽流感H5N1病人分离的病毒cDNA为模板扩增NP全长基因(1500 bp)并测序。通过生物信息学方法,预测NP氨基酸序列中潜在的HLA-A觹0201限制性表位。构建重组pJW4303-NP核酸疫苗并肌肉免疫HLA-A2/DP4转基因小鼠,利用ELISPOT法筛选特异性CTL表位。结果:克隆了2006年深圳株高致病禽流感NP基因,构建的重组pJW4303-NP核酸疫苗能在体外COS-7细胞中表达,免疫小鼠后能引起小鼠产生特异性的体液免疫和细胞免疫。结论:生物信息学和转基因小鼠模型筛选相结合的方法,能用于高致病性禽流感核蛋白CTL表位的筛选。